RKTG基因剔除小鼠模型的建立及功能分析開題報告

RKTG基因剔除小鼠模型的建立及功能分析開題報告一、選題背景RKTG基因（RafKinaseTrappingtoGolgi）又稱FLJ22609，是在人類小肺癌組織中篩選到并克隆的一種新的抑癌基因。研究發(fā)現(xiàn)，RKTG基因能夠通過引導Raf-1激酶到高爾基體分泌途徑中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體中轉(zhuǎn)運，從而抑制Raf-1激酶的活性，從而形成RKTG蛋白的保守功能。RKTG基因的缺失或低表達與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關。為了研究RKTG基因的生物學功能和機制，目前已經(jīng)建立了多種RKTG基因敲除小鼠模型。然而，這些模型中的某些基因缺失影響了小鼠正常的發(fā)育和生長，導致了實驗結(jié)果的誤差。因此，需要建立一種新的完全敲除RKTG基因的小鼠模型，以更加準確地研究RKTG基因的生物學功能和機制。二、研究目的和意義本研究旨在利用CRISPR/Cas9基因編輯技術，建立一種完全敲除RKTG基因的小鼠模型，并對此模型進行功能分析，從而確定RKTG基因在小鼠生長和發(fā)育中的生物學功能和機制。本研究將為深入理解RKTG基因的功能、探討其在腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用提供新的實驗基礎。三、研究內(nèi)容和方法研究內(nèi)容：（1）使用CRISPR/Cas9技術敲除小鼠的RKTG基因。（2）分別采用Westernblot和RT-qPCR技術檢測敲除后小鼠體內(nèi)RKTG基因蛋白和RNA的表達情況，確定敲除效果。（3）對敲除后的小鼠進行生長和發(fā)育史跡的觀察，通過測量小鼠體重、身長、頭臂長等指標評估敲除RKTG基因?qū)π∈笊L發(fā)育的影響。（4）利用Westernblot和免疫組織化學等技術檢測敲除RKTG基因?qū)π∈篌w內(nèi)信號通路、細胞周期、凋亡等方面的影響。研究方法：本研究將采用CRISPR/Cas9基因編輯技術建立RKTG基因完全敲除的小鼠模型。敲除后，利用Westernblot和RT-qPCR技術檢測小鼠體內(nèi)RKTG基因蛋白和RNA的表達情況，確定敲除效果。同時，對敲除后的小鼠進行生長和發(fā)育史跡的觀察，通過測量小鼠體重、身長、頭臂長等指標評估敲除RKTG基因?qū)π∈笊L發(fā)育的影響。最后，利用Westernblot和免疫組織化學等技術檢測敲除RKTG基因?qū)π∈篌w內(nèi)信號通路、細胞周期、凋亡等方面的影響。四、預期成果和研究難點預期成果：本研究將成功建立一種完全敲除RKTG基因的小鼠模型，并對此模型進行生長和發(fā)育指標的觀察和免疫學和分子生物學實驗，從而深入探討RKTG基因在小鼠中的生物學功能和機制。研究難點：（1）CRISPR/Cas9基因編輯技術的應用和優(yōu)化。（2）建立RKTG基因完全敲除的小鼠模型。（3）對小鼠的生長和發(fā)育進行指標評估。（4）對成年小鼠的信號通路、細胞周期、凋亡等方面進行免疫學和分子生物學實驗。五、可行性分析本研究采用CRISPR/Cas9基因編輯技術建立RKTG基因完全敲除的小鼠模型，該技術已經(jīng)被廣泛應用于醫(yī)學和生命科學領域。同時，對小鼠的生長和發(fā)育進行指標評估，以