急性白血病免疫分型

關(guān)于急性白血病免疫分型簡介白血病免疫分型是利用單克隆抗體（McAb）對骨髓或外周血中的白血病細胞進行免疫標記，檢測其細胞膜及細胞漿抗原，分析其表型，以了解被測白血病細胞所屬細胞系列及其分化程度，從而診斷白血病的類型。第2頁,共30頁，2024年2月25日，星期天原理造血細胞分化抗原：造血細胞分化過程中由細胞核內(nèi)染色體上的基因編碼的鑲嵌蛋白,

存在于細胞表面和（或）細胞漿內(nèi)，隨著分化成熟過程不斷發(fā)生改變。第3頁,共30頁，2024年2月25日，星期天原理造血細胞分化抗原出現(xiàn)、增多、減少或消失與造血細胞所屬系列和分化程度密切相關(guān)，因而可作為鑒別和區(qū)分造血細胞的標記。第4頁,共30頁，2024年2月25日，星期天原理急性白血病細胞來自造血干/祖細胞的惡性克隆性增生，既保持造血細胞的部分性質(zhì)，又有其獨特的生物學(xué)和免疫學(xué)特性：（1）急性白血病主要表現(xiàn)在骨髓或外周血中原始幼稚細胞顯著增多，正常細胞成分受抑制，因此免疫分型表現(xiàn)在帶有某種抗原標志的細胞比例異常增多或減少，例如T-ALL時的CD7+細胞遠遠超過正常人的30%，而CD13+/CD33+細胞的比例降低，并可能同時伴有CD34+、TdT+細胞的異常增多；第5頁,共30頁，2024年2月25日，星期天（2）錯位表達：即同一細胞出現(xiàn)異系列抗原混合表達，如AML細胞出現(xiàn)CD7、CD10抗原，ALL細胞出現(xiàn)CD33、CD14等；（3）抗原非同步化表達：如CD34與分化成熟較晚期的抗原不應(yīng)該同步表達，但白血病細胞有時會出現(xiàn)CD34/CD56、CD34/CD20等同時表達的異?，F(xiàn)象；（4）抗原丟失：如CD13、CD33是髓系最常見抗原，但少數(shù)AML卻不表達或僅表達其中一項。原理第6頁,共30頁，2024年2月25日，星期天如何進行免疫分型選擇良好的設(shè)門方法：FSC/SSC設(shè)門法,CD45／SSC設(shè)門法；目的：排除正常細胞的干擾，將不正常的細胞群孤立出來便于重點分析。第7頁,共30頁，2024年2月25日，星期天CD45是所有白細胞的抗原，其表達量與細胞分化程度具有高度相關(guān)性，即細胞分化程度高的細胞，CD45表達量高；分化程度低的細胞，CD45表達量低。CD45表達量在成熟淋巴細胞最高，單核細胞、粒細胞、早期造血細胞依次減弱。紅細胞(中、晚幼紅細胞、成熟紅細胞)不表達CD45。側(cè)向角光散射(SSC)反映細胞的顆粒性，成熟粒細胞SSC最高，依次為單核細胞、淋巴細胞、早期造血細胞、紅細胞。第8頁,共30頁，2024年2月25日，星期天通過CD45／SSC散點圖即可獲得初步印象。若同時加上一個或二個以上其它單抗進行二、三色甚至四色分析，則很容易識別非正常細胞群的表型。通常在CD45/SSC散點圖上,白血病細胞群體多出現(xiàn)于由淋巴細胞、單核細胞、粒細胞和紅細胞圍成的稱為“白血病窗”的區(qū)域內(nèi)。第9頁,共30頁，2024年2月25日，星期天根據(jù)骨髓細胞CD45/SSC圖中分布情況設(shè)門圈定各類細胞

R1門為成熟淋巴細胞R2門為正常單核細胞位置R3門正常粒細胞位置R4門為幼稚淋巴細胞出現(xiàn)位置R5門為有核紅細胞或細胞碎片位置R6門為幼稚髓細胞出現(xiàn)位置白血病細胞通常會在R4R6兩門位置處出現(xiàn)第10頁,共30頁，2024年2月25日，星期天正常骨髓經(jīng)CD45/SSC射門的散點圖CD45/SSC圖中可見CD45強陽性SSC低信號的細胞群為淋巴細胞褐色細胞群體中等強度的CD45表達SSC信號最強的細胞群體為粒細胞藍色及紅色細胞群體CD45表達與SSC信號介于淋巴細胞與粒細胞之間的是單核細胞群體綠色細胞群體CD45陰性SSC信號最低的有核紅細胞和細胞碎片第11頁,共30頁，2024年2月25日，星期天單克隆抗體的選擇白血病免疫分型時盡量選用系列特異性強的單抗作為一線單抗，目前較為公認系列特異性單抗有T系的CD3、CD2；B系的CD79a、CD22、CD19和髓系的MPO、CD117、CD13等。一般說來胞漿比胞膜的標志特異性強。用這些特異性強的標志作為初篩，基本可確定T系、B系或髓系，隨后即以二線單抗（CD14,CD36,CD41,CD34,CyIg,SmIg等）做進一步的免疫分型，以確定最后亞型。第12頁,共30頁，2024年2月25日，星期天各系列造血細胞表達的主要相關(guān)抗原：

T淋巴細胞系：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8；

B淋巴細胞系：CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD79；

粒、單核細胞系：CD11b/c，CD13，CD14，CD15，CD33、CD64、CD65w、CD117及MPO；

巨核細胞系：CD41、CD42、CD61、CD62、CD36；

紅細胞系：CD71、CD36、血型糖蛋白A（Glycophorin）；

其它：造血干祖細胞共同抗原CD34、CD38及末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)換酶（TdT），人類主要組織相容性抗原HLA-DR，白細胞共同抗原CD45等。

第13頁,共30頁，2024年2月25日，星期天CD45/SSC設(shè)門中白血病細胞群表面標志陽性判斷標準：陽性率>陰性對照的20％，對于MPO只需要>3％即可。第14頁,共30頁，2024年2月25日，星期天ANLL的免疫分型急性非淋巴細胞性白血?。ˋNLL）的分型主要依靠形態(tài)學(xué)（包括細胞化學(xué)染色）來區(qū)分，尤其是FAB分型中的M1、M2與M4、M5之間尚無明確的免疫標志劃分，但對一些形態(tài)學(xué)難于分類或特殊類型的ANLL（如M0、M6、M7），細胞免疫學(xué)分析對臨床確診ANLL可提供重要信息。第15頁,共30頁，2024年2月25日，星期天ANLL的免疫分型CD34是造血干細胞的特征性標記，與AML的分型有一定關(guān)系。CD34+的AML與低分化的FAB亞型M1及原始細胞比較高的M2a有明顯的相關(guān)性。而在分化程度較成熟的M3、M2b及M5b等白血病細胞則缺乏或極少有CD34抗原的表達。且隨著分化程度漸趨成熟，CD34的表達量逐漸減少。第16頁,共30頁，2024年2月25日，星期天ANLL的免疫分型特點FAB-M1/M2的免疫表型特點：CDl3+、CD15+、CD33+、HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中的表達強于M2，而CD15在M2的表達較強。第17頁,共30頁，2024年2月25日，星期天ANLL的免疫分型特點FAB-M3典型的免疫表型是CDl3+、CD15+、CD33+、CD9+、CD38+、CD34-/+、HLA-DR-，部分病人可能出現(xiàn)CD2+，CD56+。第18頁,共30頁，2024年2月25日，星期天ANLL的免疫分型特點FAB-M4/M5的免疫表型特點：HLA-DR+、CD15+、CD14+、CD64+、CD33+/-、CD13+/-、CD34-/+、CD11b/c+。第19頁,共30頁，2024年2月25日，星期天ANLL的免疫分型特點FAB-M6免疫表型特征為HLA-DR-/+，CD36+,血型糖蛋白A或B（Gly-A/B）是陽性，CD34+/-，髓系抗原也可以表達。第20頁,共30頁，2024年2月25日，星期天ANLL的免疫分型特點FAB-M7特征性的抗原表達是CD41，CD42，CD61，部分也可表達CD36。第21頁,共30頁，2024年2月25日，星期天ALL的免疫分型從70年代開始進行免疫學(xué)分型第22頁,共30頁，2024年2月25日，星期天1986年前五分法五分法：Common型 未分化型T細胞型前B細胞型B細胞型表型DR/CD9/CD10+復(fù)雜CD2/CD5+CyIg+SmIg+發(fā)生率：國外60-70%30%15-25%2--3%2--3%

國內(nèi)50%30%20%0.5%1.5%預(yù)后：兒童最好次之再次最次最次成人次之再次最好最次最次第23頁,共30頁，2024年2月25日，星期天1986年后兩大類九分法ALL免疫分型

－－兩類九型法:

非T亞型HLA-DRCD9CD10CD20μ鏈SmIg發(fā)生率%

I+-----5

II++----15

III+++---30

IV++++--50

V+++/-+/-+-<5

VI++-+-+<2

第24頁,共30頁，2024年2月25日，星期天1986年后兩大類九分法T亞型CD7CD5CD2CD3CD4CD8

CD1a發(fā)生率I+++---

-55II++++(25%)+(90%)+(90%)+25III+

+

+++/--/+-20

第25頁,共30頁，2024年2月25日，星期天1994年四型21類法4型21類法：這是1994年法國國際白血病歐洲協(xié)作組在過去白血病分型的基礎(chǔ)上，對ALL免疫學(xué)分型提出的新方法。首先，根據(jù)每個CD抗原特異性強弱，確定其相應(yīng)的積分，并在此基礎(chǔ)上將ALL分為4型:①裸型：此型中每個系列（T淋巴細胞系、B淋巴細胞系、髓細胞系）積分均<2。②純型：此型要求T、B、髓細胞某一系列積分≥2，而其它細胞系列積分為0。③變異型：此型要求某一系列積分≥2，其它系列積分<2。④多表型：此型要求2個或2個以上系列積分≥2。第26頁,共30頁，2024年2月25日，星期天ALL的免疫學(xué)分類（EGIL，1994年）1.B-ALL

早期前B-ALL（earlyPre-B-ALL）普通型B-ALL（common-B-ALL）前B-ALL（Pre-B-ALL）成熟B-ALL（mature-B-AL