GB-T《甘蔗皮渣中對(duì)香豆酸檢測(cè)方法-高效液相色譜法》征求意見稿

GB

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXX-XXX

甘蔗皮渣中對(duì)香豆酸檢測(cè)方法-

高效液相色譜法

Determinationofp-coumaricacidin

sugarcanerinds-Highperformanceliquid

chromatographymethod

XXX-XX-XX發(fā)布XXX-XX-XX實(shí)施

I

中華人民共和國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)發(fā)布

GB/XXXX—XXXX

GB/XXXX—XXXX

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了甘蔗皮中對(duì)香豆酸含量的測(cè)定方法—高效液相色譜法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于甘蔗皮中對(duì)香豆酸的定性確證和定量測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)高效液相色譜法的檢出限為0.33mg/kg，定量限為1.09mg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的

版本適用于本文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓

勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可會(huì)用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新

版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6379.2測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度與精密度）第2部分：確定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法重復(fù)性與

再現(xiàn)性的基本方法。

3原理

甘蔗皮渣試樣用2mol/LNaOH溶液提取，6mol/L的HCI溶液調(diào)節(jié)pH至2左右，乙酸乙酯萃取后經(jīng)C18

色譜柱分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，色譜峰保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

4試劑與材料

除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1試劑

4.1.1甲醇：色譜純。

4.1.2乙酸：色譜純。

4.2試劑配制

乙酸溶液（0.1%）：量取0.25mL甲酸（4.1.2）于250mL容量瓶中，用水定容至刻度。

4.3標(biāo)準(zhǔn)品

對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)品（C9H8O3）：CAS：501-98-4，純度大于98.0%。

4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

4.4.1對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（2.0mg/mL）：準(zhǔn)確稱取對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)品50mg（精確至0.1mg）于25mL

容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成濃度為2.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。放置于4℃冰箱避光保

存，有效期為一個(gè)月

4.4.2對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0mg/mL）：準(zhǔn)確稱取對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)品25mg（精確至0.1mg）于25mL

容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。放置于4℃冰箱避光保

存，有效期為一個(gè)月。

4.4.3對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)中間液（400μg/mL）：準(zhǔn)確吸取10.0mL對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.4.2）于25mL

容量瓶中，用甲醇定容。放置于4℃冰箱避光保存，有效期為一個(gè)月。

4.4.4對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液：分別吸取對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.4.3）0.1mL、0.25mL、0.5mL、

1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容。該標(biāo)準(zhǔn)系列濃度

分別為4.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、60.0μg/mL、80.0μg/mL、100μg/mL、200

μg/mL、300μg/mL。臨用時(shí)配制。

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5儀器和設(shè)備

5.1高效液相色譜儀，配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。

5.2天平：感量為0.0001g和0.01g。

5.3油浴鍋。

5.4超聲波清洗器。

5.50.45μm微孔水相濾膜，0.45μm針筒式有機(jī)相過濾器。

5.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

6分析步驟

6.1試樣制備

稱取1.00g（精確至0.01g）甘蔗皮渣樣品于25mL圓底燒瓶中，加入10mL2mol/LNaOH溶液

混合均勻，在室溫下磁力攪拌6h。之后逐滴加入6mol/L的HCI溶液，調(diào)節(jié)pH值至2左右。將上述

酸性溶液移入分液漏斗中，加入等體積的乙酸乙酯，劇烈振蕩，靜置、分層，移取乙酸乙酯。然后重復(fù)

上述步驟萃取三次，合并三次所得乙酸乙酯相，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將萃取液在50℃蒸干，最后得到0.2638g

膏狀物，密封保存于4℃冰箱待后續(xù)使用。準(zhǔn)確稱取100mg用10.0mL色譜甲醇定容，過0.45μm針筒

式有機(jī)相過濾器，即為試樣液。

6.2色譜測(cè)定

6.2.1參考色譜條件

6.2.1.1色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)250mm×直徑4.6mm，粒徑5μm，或具有同等性能的色譜柱。

6.2.1.2流動(dòng)相：A甲醇B0.1%乙酸溶液，0-30min：30%-80%A。

6.2.1.3流速：1.0mL/min。

6.2.1.4柱溫：30℃±1℃。

6.2.1.5測(cè)定波長(zhǎng)：254nm。

6.2.1.6進(jìn)樣體積：10μL。

6.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液、標(biāo)準(zhǔn)中間液及標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的保

留時(shí)間和峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)色譜

圖見附錄A中圖A.1）。

6.2.3試樣測(cè)定

將試樣液注入高效液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，同時(shí)記錄其峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出試樣

液中對(duì)香豆酸的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于三次。待測(cè)試樣中對(duì)香豆酸的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍

內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)行分析。

6.2.4空白實(shí)驗(yàn)

除不稱取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。

7分析結(jié)果的表述

試樣中對(duì)香豆酸的含量由色譜數(shù)據(jù)處理軟件或按公式（1）計(jì)算：

cV1000

X.....................................(1)

m1000

式中：

4

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X—試樣中對(duì)香豆酸的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

c—試樣液中對(duì)香豆酸的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V—被測(cè)試樣的總體積，單位為毫升（mL）；

m—稱取試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；

1000—換算系數(shù)。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的三次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算數(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

8精密度

8.1一般規(guī)定

本標(biāo)準(zhǔn)的精密度按照GB/T6379.2的規(guī)定確定，重復(fù)性和再現(xiàn)性的值以95%的可信度來計(jì)算。

8.2重復(fù)性

在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

8.3再現(xiàn)性

在再現(xiàn)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

9其他

本方法線性范圍為4μg/mL~2000μg/mL。檢出限：以3倍基線噪音信號(hào)確定檢出限12.45

ng/mL,定量限：以10倍基線噪音信號(hào)確定檢出限41.49ng/mL。甘蔗皮渣試樣取樣量為1g，確定

檢出限為0.33mg/kg，定量限為1.09mg/kg，對(duì)香豆酸含量為13292.88mg/kg。在添加濃度400

mg/kg～600mg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在95%～105%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。

附錄A

對(duì)香豆酸色譜圖

圖A.1對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

圖A.2甘蔗皮渣粗提物的色譜圖