臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

實(shí)驗(yàn)一

血液一般檢驗(yàn)（一）GeneralExaminationofBlood

【內(nèi)容】

1、皮膚采血法（毛細(xì)血管采血法）

2、血紅蛋白（微量）吸管

3、靜脈采血法

4、血紅蛋白測(cè)定

5、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)池的正、側(cè)面觀察

7、正常及異常紅細(xì)胞形態(tài)（示教）

【目的要求】

1、掌握紅細(xì)胞直接計(jì)數(shù)，血紅蛋白測(cè)定的標(biāo)本送檢要求、原理、操作方法、參考值

及臨床意義。

2、掌握皮膚采血法（毛細(xì)血管采血法）及血紅蛋白（微量）吸管的使用方法。

3、熟悉靜脈采血（collectionofvenousblood）的方法和無(wú)菌操作技術(shù)。

4、熟悉細(xì)胞計(jì)數(shù)池的結(jié)構(gòu)及應(yīng)用范圍。

【器材】

721-型分光光度計(jì)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，血紅蛋白吸管，75%酒精棉球及干棉球，三

棱針，玻棒及試管，顯微鏡。

【試劑】

1、HicN試劑的配制

氟化鉀50mg

高鐵氟化鉀200mg

無(wú)水磷酸二氫鉀140mg

TritonX-1001.0ml

蒸儲(chǔ)水加至1000ml,糾正pH至7.0-7.4。

此液為淡黃色透明溶液，貯存在棕色有塞玻璃瓶中，放4°C冰箱保存，一般可用

數(shù)月。

2、赫姆（Hayem）液:

氯化鈉1.Og

結(jié)晶硫酸鈉（Na2S04?10HO5.0g（或無(wú)水硫酸鈉2.5g）

氯化高汞0.5g

蒸僧水加至200ml

溶解后加20g/L伊紅水溶液1滴，過(guò)濾后用。

【實(shí)驗(yàn)】

一、皮膚采血法（毛細(xì)血管采血法）

【器材】

1、三棱針，預(yù)先高壓消毒，每人每次采血更換1次性采血針以避免交叉感染。

2、消毒干棉球。

3、75%乙醇棉球

4、20ul吸管

【操作方法】

1、采血部位以左手無(wú)名指為宜。

2、輕輕按摩采血部位，使其自然充血，用75%乙醇棉球消毒局部皮膚，待干。

3、緊捏刺血部位，用無(wú)菌刺血針迅速刺入皮膚約2—3mm,讓血液自然流出，如

血液不流出可在其周?chē)p輕加壓，但不要過(guò)重。

4、用干棉球擦去第一滴血、按需要依次采血。

5、采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。

6、血紅蛋白吸管的使用：在采血前首先練習(xí)一下吸管使用，使其達(dá)到得心應(yīng)手。

二、血紅蛋白（微量）吸管的使用

【原理】擠壓乳膠吸頭，使刻度微量吸管內(nèi)產(chǎn)生負(fù)壓而吸取液體。

【器材】

1.微量吸管、乳膠吸頭、干脫脂棉。

2.試管、試管架。

3.2ml吸管、吸耳球。

【試劑】

1.洗滌液3管（蒸儲(chǔ)水、95%乙醇、乙醛）。

2.生理鹽水。

【操作方法】

1.準(zhǔn)備吸管及試管將乳膠吸頭套在微量吸管上，注意兩者連接處應(yīng)嚴(yán)密不漏氣。

試管上應(yīng)貼上患者姓名或門(mén)診/住院號(hào)標(biāo)簽。

2.加稀釋液取試管1支，加生理鹽水2ml。

3.持管吸血右手拇指和中指夾住吸管與吸頭交接處，示指蓋住吸頭小孔。三指輕

微用力，排出適量的氣體使管內(nèi)形成負(fù)壓。將管尖插入抗凝血，三指慢慢松開(kāi)，吸取

抗凝血到所需刻度后抬起示指。注意吸血時(shí)管尖始終不要離開(kāi)液面，以免吸入氣泡；

也不要用力過(guò)度，將血液吸入乳膠吸頭內(nèi)。

4.拭凈余血用干脫脂棉沿吸管口方向拭凈余血，并檢查血量是否達(dá)到規(guī)定刻度。

5.釋放血液將吸管插入含生理鹽水的試管底部，慢慢排出吸管內(nèi)的血液，再用上

清液沖洗管內(nèi)余血3次，最后將管內(nèi)殘余液體完全排凈。

6.洗滌試管依次用蒸馀水洗凈，95%（V/V）乙醇脫水，乙醛干燥。如為一次性微量

吸管，可省略該步驟。

【注意事項(xiàng)】

1.準(zhǔn)備吸管吸管和膠吸頭連接處應(yīng)嚴(yán)密不漏氣，擠壓吸頭力度應(yīng)適宜。

2.持管吸血吸血時(shí)動(dòng)作宜慢，防止血液吸入乳膠吸頭內(nèi)；避免產(chǎn)生氣泡。

3.拭凈余血吸血后拭凈管外余血以保證血量準(zhǔn)確。

三、靜脈采血法

【原理】使用注射器或負(fù)壓采血器刺入淺靜脈后，用負(fù)壓吸取所需血量。

【器材】

1.消毒棉簽。

2.壓脈帶（止血帶）2~3nlm口徑的橡皮軟管。

3.一次性消毒注射器

（1）針頭：30~40mm長(zhǎng)，18號(hào)、19號(hào)、20號(hào)帶斜面。若采集5歲以下兒童的血液

標(biāo)本，使用23號(hào)或25號(hào)針。

（2）注射器：可選用2ml、5ml、10ml或20ml注射器。

4.一次性負(fù)壓采血器。

5.試管含或不含抗凝劑，并應(yīng)有采血量的標(biāo)記（如5ml刻度）。

6.墊枕。

【試劑】

30g/L碘酊、75%（V/V）乙醇或碘伏。

1.抗凝劑（根據(jù)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目選擇所需的抗凝劑）。

【操作方法】

1.準(zhǔn)備試管仔細(xì)閱讀受檢者申請(qǐng)單，決定采血量，準(zhǔn)備每個(gè)試驗(yàn)所需的試管，并

應(yīng)按一定順序排列，如患者僅做凝血試驗(yàn)一項(xiàng)，最初1口1血液必須丟棄。如做紅細(xì)胞

沉降率測(cè)定，需取試管1支，加入適量抗凝劑（109mmol/L枸檬酸鈉0.4ml）。

2.標(biāo)記試管在試管上貼上標(biāo)簽，注明患者姓名、項(xiàng)目名稱、采集日期、門(mén)診或住

院號(hào)等。

3.消毒雙手采血前，操作人員應(yīng)用肥皂或消毒液和水洗手。

4.選擇靜脈采血前，要求受檢者坐在實(shí)驗(yàn)臺(tái)前。將前臂放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，掌心向上,

并在肘下放一墊枕。臥床受檢者要求前臂伸展，暴露穿刺部位。常用采血位置是肘前

靜脈，因其粗大、容易辨認(rèn)。

5.檢查注射器打開(kāi)一次性注射器包裝，左手持針頭下座，右手持針筒。將針頭和

針筒緊密連接，并使針頭斜面對(duì)準(zhǔn)針筒刻度，抽拉針?biāo)z查有無(wú)阻塞和漏氣。最后排

盡注射器中的空氣，備用。使用前，保持針頭無(wú)菌狀態(tài)。

6.消毒皮膚用30g/L碘酊棉簽自所選靜脈穿刺處從內(nèi)向外，順時(shí)針?lè)较蛳酒つw,

待碘酊揮發(fā)后，再用75%乙醇棉簽以同樣方式拭去碘跡；或以碘伏消毒，待干。

7.扎壓脈帶在采血部位上端約6cm處，將壓脈帶繞手臂一圈打一活結(jié)，壓脈帶末

端向上。要求患者握緊和放松拳頭兒次，使靜脈隆起。壓脈帶應(yīng)能減緩遠(yuǎn)端靜脈血液

回流，但乂不能緊到壓迫動(dòng)脈血流。

8.穿刺皮膚取下針頭無(wú)菌帽，以左手拇指固定靜脈穿刺部位下端，右手持注射器,

示指固定針頭下座。保持針頭斜面和針筒刻度向上，沿靜脈走向使針頭與皮膚成30°

角斜行快速刺入皮膚，然后成5°角向前穿破靜脈壁進(jìn)入靜脈腔。確認(rèn)穿刺入靜脈中

心位置，并沿著靜脈走向?qū)⑨橆^推入1015mm。

9.抽血用左手緩緩向后拉注射器針?biāo)ǎ?jiàn)少量回血后，松開(kāi)壓脈帶。然后，向后拉

針?biāo)ǖ竭_(dá)采血量刻度。若使用一次性負(fù)壓采血器，當(dāng)針頭進(jìn)入血管后會(huì)見(jiàn)少量回血，

將負(fù)壓采血管插入試管托內(nèi)采血針中，因試管內(nèi)負(fù)壓作用，血液自動(dòng)流入試管，到達(dá)

采血量刻度后拔出試管即可。

10.止血囑受檢者松拳，用消毒棉簽壓住穿刺點(diǎn)，迅速向后拔出針頭。繼續(xù)緊按住

消毒棉簽3mino

11.放血從注射器上取下針頭。將血液沿試管壁緩緩注入，到達(dá)標(biāo)記處。含抗凝劑

試管需迅速輕輕顛倒混勻幾次。

【注意事項(xiàng)】

1.采血準(zhǔn)備采血前應(yīng)向患者耐心解釋，以消除不必要的疑慮和恐懼心理。如遇個(gè)

別患者進(jìn)針時(shí)或采血后發(fā)生眩暈，應(yīng)立即拔出針頭讓其平臥休息片刻，即可恢復(fù)。必

要時(shí)可給患者嗅吸芳香酊、針刺（或拇指壓掐）人中和合谷等穴位。若因低血糖誘發(fā)

眩暈，可立即靜注葡萄糖或囑患者服糖水。如有其它情況，應(yīng)立即找醫(yī)生共同處理。

2.準(zhǔn)備試管不同檢查項(xiàng)目可根據(jù)試驗(yàn)需要選擇不同的抗凝劑及與血液的稀釋比

例，如血細(xì)胞計(jì)數(shù)及MCV、MPV等參數(shù)測(cè)定時(shí)應(yīng)選擇EDTA-心抗凝，不要用肝素抗凝，

因?yàn)楦嗡乜鼓龝?huì)影響RBC和PLT的計(jì)數(shù)結(jié)果。

3.選擇靜脈如果肥胖患者的靜脈暴露不明顯，可以左手示指經(jīng)碘酊、乙醇或碘伏

消毒后，在采血部位觸摸，發(fā)現(xiàn)靜脈走向后憑手感的方向與深度試探性穿刺。

4.檢查注射器靜脈采血前要仔細(xì)檢查針頭是否安裝牢固，針筒內(nèi)是否有空氣和水

分。所用針頭應(yīng)銳利、光滑、通氣，針筒不漏氣。抽血時(shí)針?biāo)ㄖ荒芟蛲獬?，不能向靜

脈內(nèi)推，以免形成空氣栓塞，造成嚴(yán)重后果。

5.扎壓脈帶采靜脈血時(shí)壓脈帶壓迫時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、綁扎不能過(guò)緊，以避免淤血和

血液濃縮，最好不超過(guò)Imin,否則會(huì)影響某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如造成血紅蛋白和血細(xì)胞比

容增高。

6.穿刺皮膚不能從靜脈側(cè)面進(jìn)針。針頭進(jìn)入靜脈的感覺(jué)是：皮膚有一定阻力，而

靜脈壁阻力較小，更富彈性。

7.抽血血液加入抗凝試管中應(yīng)與抗凝劑充分混勻以達(dá)到抗凝目的；無(wú)須抗凝時(shí)則

將血液直接注入試管中。要防止血液標(biāo)本溶血，因?yàn)槿苎髽?biāo)本不僅血紅細(xì)胞數(shù)和血

細(xì)胞比容減低，還會(huì)使血清（漿）化學(xué)成分發(fā)生變化。造成溶血的原因有：注射器和

容器不干燥、不清潔；壓脈帶捆扎時(shí)間太久，淤血時(shí)間長(zhǎng)；穿刺過(guò)程中損傷組織過(guò)多;

抽血速度太快；血液注入容器時(shí)未取下針頭或用力推出時(shí)產(chǎn)生大量氣泡；抗凝血用力

震蕩；離心時(shí)速度過(guò)快等。

8.止血不能彎曲手臂，以免形成血腫。

9.放血顛倒混勻時(shí)，需防止溶血和泡沫產(chǎn)生。切忌震蕩試管。

10.標(biāo)本檢測(cè)與保存血液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，實(shí)驗(yàn)室接到標(biāo)本后應(yīng)盡快地檢查。

抗凝靜脈血可穩(wěn)定8~12h,如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)將其置于較穩(wěn)定的環(huán)境中，如4℃冰

箱，減少和降低條件的變化。測(cè)定前，將其從冰箱內(nèi)取出，恢復(fù)至室溫狀態(tài)，混勻后

再測(cè)定。要注意有的試驗(yàn)標(biāo)本不宜4c保存，如PLT計(jì)數(shù)。用于生物化學(xué)檢查的標(biāo)本

若不能及時(shí)檢查，應(yīng)將血清或血漿與細(xì)胞分離，進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼?/p>

11.一次性器材只能使用一次，不能反復(fù)使用。

四、血紅蛋白測(cè)定（Hemoglobin簡(jiǎn)稱Hb）

氧化高鐵血紅蛋白法

【原理】

血紅蛋白被高鐵氟化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，再與鼠離子（CN）結(jié)合生成穩(wěn)定

的氟化高鐵血紅蛋白，用光電比色法根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得每升血液的血紅蛋白克數(shù)。

【試劑】

HicN試劑

【操作方法】

取試劑5毫升加入血液20立方毫米混勻置5分鐘后用540nm波長(zhǎng)，試劑為空白

調(diào)0點(diǎn)比色，讀取光密度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得結(jié)果。

【報(bào)告方式】HbXXXg/L

【參考區(qū)間】

男性成人：120—160g/L

女性成人：110—150g/L

新生兒：170—200g/L

五、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（redbloodcell簡(jiǎn)稱RBC）

——顯微鏡直接計(jì)數(shù)（試管法）

【原理】

一定量的血液經(jīng)一定量等滲性稀釋液稀釋后，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池中顯微鏡下計(jì)數(shù)。

【血細(xì)胞計(jì)數(shù)板】

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央有兩個(gè)刻度平臺(tái)（即血細(xì)胞計(jì)數(shù)池），每個(gè)平臺(tái)劃分為9個(gè)大方

格，每個(gè)大方格的面積為1平方毫米，加特制蓋片的深度為0」毫米，故每1大方格

的容積為0.1立方毫米。四角的四個(gè)大方格又等分為16個(gè)中方格，作為計(jì)數(shù)白細(xì)胞

用。中央大方格又等分為25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又等分為16個(gè)小方格，共為400

個(gè)小方格，作為計(jì)數(shù)紅細(xì)胞和血小板之用。計(jì)數(shù)臺(tái)之上覆以特制的蓋片（厚度0.4mm,

表面平直，質(zhì)地較硬）后構(gòu)成計(jì)數(shù)室。每個(gè)大格方格體積是0.ImmdnimXImmXO.limn）,

參閱圖1、2及3。

計(jì)數(shù)板與首片

計(jì)JR板間JEU為01.星片

V7-)

熱片支持提

圖2血細(xì)胞計(jì)數(shù)板側(cè)面圖

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圖3血細(xì)胞計(jì)數(shù)臺(tái)鏡下結(jié)構(gòu)

【操作方法】

1、取紅細(xì)胞稀釋液2.0ml毫升，放入一小試管內(nèi)。

2、用血紅蛋白吸管吸血至10立方毫米處。

3、擦去管尖外部余血將血液迅速輕輕吹入盛有紅細(xì)胞稀釋液的試管內(nèi)，吸上清

液嗽洗吸管2-3次，立即搖勻。

4、用玻棒取混懸液少量，充入計(jì)數(shù)池內(nèi)。

5、待2—3分鐘，讓紅細(xì)胞完全下沉后，將計(jì)數(shù)板平放在顯微鏡臺(tái)上，用低倍鏡

觀察，如紅細(xì)胞分布均勻即可換高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的區(qū)域是中心大方格

中的5個(gè)中方格（正中一個(gè)和四角各一個(gè)）。計(jì)數(shù)方法：長(zhǎng)城迂回法。計(jì)數(shù)原則：凡壓

在中方格邊線（雙線）上的紅細(xì)胞，只計(jì)上側(cè)與左側(cè)線上的細(xì)胞，而壓在下側(cè)與右側(cè)線

上者不計(jì)入。即“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則進(jìn)行。

圖4紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的方式

圖4紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的方式

【計(jì)算】

紅細(xì)胞數(shù)/L=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)X5X10X201X106或

紅細(xì)胞數(shù)/L=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)+100X1012

式中X55個(gè)中方格換算成1個(gè)大方格

X101個(gè)大方格容積為0.lul,換算成1.0uLo

X201血液的稀釋倍數(shù)

X106由ul換算成L

【報(bào)告方式】RBCXXXX107L

【注意事項(xiàng)】

1、吸管、試管要注意清潔、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝

塊應(yīng)重新采血，同時(shí)做血紅蛋白測(cè)定、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類(lèi)計(jì)數(shù)，在采血

時(shí)應(yīng)先做血膜再做紅細(xì)胞，然后做白細(xì)胞，血紅蛋白檢驗(yàn)，避免紅細(xì)胞破壞。

2、充液前，紅細(xì)胞懸液要充分搖勻，紅細(xì)胞懸液注入計(jì)數(shù)池內(nèi)要求分布均勻，

不可有氣泡，亦不可有多余液體外溢。

3、中方格內(nèi)紅細(xì)胞分布應(yīng)均勻，健康成人每中方格紅細(xì)胞數(shù)約為80—100個(gè)，

各中方格內(nèi)之紅細(xì)胞相近，如懸殊過(guò)大(超過(guò)10個(gè)細(xì)胞以上的)應(yīng)重混勻再充填。

【參考區(qū)間】男性成人：(4-5.5)X107L

女性成人：(3.5—5)X10'2/L

新生兒：(6—7)X107L

實(shí)驗(yàn)二

血液一般檢驗(yàn)（二）GeneralExaminationofBlood

【內(nèi)容】

1、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)計(jì)數(shù)

2、各類(lèi)白細(xì)胞的形態(tài)（示教）

【目的要求】

1、掌握白細(xì)胞直接計(jì)數(shù)，分類(lèi)計(jì)數(shù)的標(biāo)本送檢要求、方法及參考值，并換算出

白細(xì)胞絕對(duì)值。

2、掌握血液涂片的制作與瑞氏染色方法。

3、熟悉并能識(shí)別三類(lèi)五種白細(xì)胞的正常形態(tài)及常見(jiàn)異常白細(xì)胞的形態(tài)。

【器材】

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、載物片、推片、手揪計(jì)數(shù)器、染色架、吸耳球、三棱針、酒精

棉球及干棉球，血紅蛋白吸管，小試管，顯微鏡。

【試劑】

1、白細(xì)胞稀釋液，冰醋酸2毫升，蒸馀水加至98ml,1%亞甲蘭（或結(jié)晶紫）數(shù)滴

顯色借以區(qū)別其他稀釋液。

2、瑞氏染液、緩沖液或蒸儲(chǔ)水、香柏油。

瑞氏一姬姆薩復(fù)合染色液

取瑞氏染粉1g，姬姆薩染粉0.3g,置潔凈研缽中，加少量甲醇（分析純），研磨

片刻，吸出上層染液。再加少量甲醇繼續(xù)研磨，再吸出上層染液，如此連續(xù)幾次，共

用甲醇500ml,收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振搖3分鐘共5天，以后存放一

周即能使用。

【實(shí)驗(yàn)】

一、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（Whitebloodcell簡(jiǎn)稱WBC）

【原理】

血液經(jīng)稀酸稀釋后，成熟紅細(xì)胞全部被溶解，注入計(jì)數(shù)池后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)白

細(xì)胞。

【操作方法】

1、取白細(xì)胞稀釋液0.38毫升，置于小試管內(nèi)。

2、用血紅蛋白吸管吸血液至20立方毫米處，擦去管尖多余的血液，將血液迅速

放入稀釋液中再吸上清液沖洗幾次，立即混勻。

3、待液體呈褐色后，搖勻用玻棒充填入計(jì)數(shù)池內(nèi)（與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)操作相同）。

4、靜置2-3分鐘，低倍鏡下計(jì)數(shù)四角四個(gè)大方格中白細(xì)胞總數(shù)。計(jì)數(shù)原則壓邊

線的白細(xì)胞，仍為數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。

【計(jì)算】

4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)

白細(xì)胞數(shù)/L=-----------------------X10X20X106

4

式中4-4為每個(gè)大方格（即0.lul）內(nèi)白細(xì)胞平均數(shù)

X101個(gè)大方格容積為0.lul,換算成lul

X20血液稀釋倍數(shù)

X106由lul換算成1L

【報(bào)告方式】WBCXXXX109/L

【參考區(qū)間】

成人：(4—10)X107L

新生/L(15—20)X107L

6個(gè)月至2歲：(11—12)X107L

【注意事項(xiàng)】

1、與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的注意事項(xiàng)相同

2、計(jì)數(shù)時(shí)，兩次重復(fù)計(jì)數(shù)誤差不得超過(guò)10%?

3、在某些病理情況下，血中可出現(xiàn)大量有核紅細(xì)胞以致影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)，此時(shí)

應(yīng)通過(guò)分類(lèi)計(jì)數(shù)將有核紅細(xì)胞從總數(shù)中減去。

【校正公式】

白細(xì)胞校正數(shù)=XX100/100+Y

X=未校正前白細(xì)胞數(shù)

丫=在分類(lèi)計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞的同時(shí)，計(jì)數(shù)到的有核細(xì)胞數(shù)

例：某標(biāo)本校正前“有核細(xì)胞數(shù)”為10X107L,血片分類(lèi)計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞過(guò)

程中見(jiàn)有核紅細(xì)胞20%個(gè)。則校正后的白細(xì)胞數(shù)應(yīng)為:

100

白細(xì)胞數(shù)/L=IOXIO7LX-------------------=8.3X107L

100+20

二、白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)（Differentcount簡(jiǎn)稱DC）

（一）血片制備法

1、自手指端取血一小滴置于玻片一端，把推片的一端放在血滴前方，將推片略

向后移，并左右移動(dòng)一二次使血滴散開(kāi)。

2、使推片與玻片之間形成30-40度角，均勻向前推成一個(gè)厚薄均勻，頭、體尾

分明的血片。見(jiàn)圖5。

血片.（圖5）

r-

3

困5血涂片的備制

（二）瑞氏染色法

【原理】

瑞氏染色液中含有甲醇，起固定細(xì)胞的作用，其中還含有堿性染料（美蘭及小量天

青）和酸性染料（伊紅），在一定PH下細(xì)胞蛋白質(zhì)因等電點(diǎn)不同，可選擇性的吸附上述

染料而著色。

【染色方法】

1、待血片干燥后，于血膜上滴加瑞氏染色液數(shù)滴以蓋住血膜為宜，靜置約一分

鐘。

2、再加等量的緩沖液與染液混勻（邊加邊用洗耳球打氣或口吹），靜置8—10分

鐘，染色的時(shí)間隨室外溫度升高而適當(dāng)縮短，反之可延長(zhǎng)。

3、用自來(lái)水緩緩的將染料液沖去，干后油鏡分類(lèi)。

【分類(lèi)方法】

1、將染好的血片先用低倍鏡觀察選染色良好，厚薄適宜，細(xì)胞分布均勻處，以

油鏡進(jìn)行分類(lèi)。

2、在血片的體尾交界處滴加香柏油一滴，用油鏡對(duì)好視野，以曲徑推動(dòng)血片，

向尾部上下迂回移動(dòng)，如圖6白細(xì)胞分類(lèi)的鏡檢順序。同時(shí)將遇到的各類(lèi)白細(xì)胞分別

記錄下來(lái)至總數(shù)達(dá)100個(gè)為止，每類(lèi)的白細(xì)胞數(shù)目即為其百分率，一般來(lái)說(shuō)粒細(xì)胞、

單核細(xì)胞以及體積大的細(xì)胞多分布于涂片上下邊緣及其尾端，淋巴細(xì)胞多分布于體

部。(圖6)

圖6白細(xì)胞分類(lèi)的鏡順序

3、各種白細(xì)胞絕對(duì)值計(jì)算，由每立方毫米內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，乘以該白細(xì)胞的百

分?jǐn)?shù)，

即得出絕對(duì)值。

如：白細(xì)胞數(shù)為10x107L,淋巴細(xì)胞為30%,淋巴細(xì)胞的絕對(duì)值為：

10X30%=3X109/L

【報(bào)告方式】以國(guó)際單位(比值)報(bào)告

【參考區(qū)間】

嗜中性桿狀核粒細(xì)胞(neutrophilicstabgranulocyteNst)0—5%國(guó)際單位0

—0.05

嗜中性分葉核粒細(xì)胞(NNeutrophil)50—70%國(guó)際單位0.5—0.7

嗜酸性粒細(xì)胞(EEosinophil)0.5—5%國(guó)際單位0,005-0-05

嗜堿性粒細(xì)胞(BBasophil)0-1%,國(guó)際單位0—0.01

淋巴細(xì)胞(LLymphocyte)20—40%,國(guó)際單位0.2—0.4

單核細(xì)胞(MMonocyte)3-8%,國(guó)際單位0.03—0.08

【注意事項(xiàng)】

1、在白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)時(shí)，如遇到幼稚紅細(xì)胞，要注意不要將此種細(xì)胞包括在白

細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)內(nèi)，應(yīng)另行報(bào)告。

2、兒童的白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)，其正常值隨年齡的大小而不同，特別是淋巴細(xì)胞的

變化較大。新生兒及2歲以內(nèi)的幼兒淋巴細(xì)胞可高達(dá)0.7—0.8,3—5歲時(shí)，淋巴細(xì)

胞約為0.42—0.6,6—8歲時(shí)為0.5左右，8—14歲則接近成人。

三、白細(xì)胞常見(jiàn)的病理形態(tài)（示教）

中毒顆粒、空泡變性、大小不均等。

實(shí)驗(yàn)三

血液一般檢驗(yàn)（三）GeneralExaminationofBlood

【內(nèi)容】

1、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

2、紅細(xì)胞比積測(cè)定（示教）

3、紅細(xì)胞沉降率測(cè)定（示教）

【目的要求】

1、掌握網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)標(biāo)本送檢要求、原理和方法。

2、熟悉紅細(xì)胞比積測(cè)定及紅細(xì)胞沉降率檢測(cè)原理和方法。

3、了解紅細(xì)胞比積測(cè)定及紅細(xì)胞沉降率檢測(cè)標(biāo)本送檢要求。

【實(shí)驗(yàn)】

一、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RecitudocytoCount）

（試管法）

【原理】

網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞脫核后到完全成熟的紅細(xì)胞之間的尚未完全成熟的紅細(xì)

胞，由于其胞漿中尚殘存核糖體等嗜堿性物質(zhì)，因而用煌焦油蘭染液進(jìn)行活體染色后,

胞漿中可見(jiàn)淺蘭綠色和深蘭色的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，故名為網(wǎng)織紅細(xì)胞。

【試劑】

lOg/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液：煌焦油藍(lán)1g,枸椽酸鈉0.4g,氯化鈉0.85g溶于

雙蒸儲(chǔ)水100ml中，過(guò)濾后備用。

【操作方法】

取干燥潔凈小試管一只，滴加煌焦油蘭生理鹽水溶液?滴，加入病人指端血液3-4

滴（貧血者多加兒滴）混勻，10分鐘再混勻取一小滴推成薄膜片，干燥后用油鏡檢查，

分類(lèi)計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞，求出其中網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率，以國(guó)際單位（比值）或絕對(duì)

值報(bào)告。

【注意事項(xiàng)】

1、血膜宜薄，以免使細(xì)胞重疊、擠縮而影響計(jì)數(shù)。

2、用二甲苯擦片后，可使結(jié)果偏低。

【報(bào)告方式】

網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率：以國(guó)際單位（比值）報(bào)告

網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值：XXXX107L

【參考區(qū)間】

成人0.5—1.5%平均1%,國(guó)際單位0.005—0.015

新生兒3—6%國(guó)際單位0.03—0.06

成人網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值（2.4—8.4萬(wàn)/uL）國(guó)際單位（24—84）X109/L

【網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)數(shù)的計(jì)算】

%網(wǎng)織紅細(xì)胞X紅細(xì)胞數(shù)/立方毫米

網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)數(shù)值=---------------------------------------

100

舉例：設(shè)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率為1%,紅細(xì)胞數(shù)為500萬(wàn)/立方毫米，則

1%1X5OO萬(wàn)/立方毫米

網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)數(shù)值=----------------------------=5萬(wàn)/u]

100

【附注】

如因視野太小。其中紅細(xì)胞太多，以至視覺(jué)混亂，無(wú)法數(shù)清時(shí)，可在接目鏡內(nèi)，

先接上一個(gè)中間開(kāi)一個(gè)矩形的硬圓紙片-，將視野縮?。ㄒ?jiàn)圖7甲）或先粘上四根頭發(fā)（見(jiàn)

圖7乙），以便計(jì)數(shù)。

以便計(jì)數(shù).

圖7(甲)

二、紅細(xì)胞比容

(DeterminationofHematocritHet)測(cè)定(示教)

【原理】

將定量的抗凝血液用一定速度和時(shí)間離心沉淀后，觀察壓實(shí)紅細(xì)胞與全血體積的

比值(L/L),稱為紅細(xì)胞比容，它的多少與紅細(xì)胞數(shù)量和大小有關(guān).

【操作方法】

1、靜脈穿刺取血2磯，放入肝素抗凝劑(肝素鈉0.2mg)的小試管內(nèi)充分搖勻，防

止凝固。

2、用長(zhǎng)的毛細(xì)管取上述血液將其插到溫氏血管底部，將血徐徐注入至“0”刻度

3、置離心機(jī)內(nèi)，以每分鐘3000轉(zhuǎn)的速度離心30分鐘。

4、取出溫氏管觀察紅細(xì)胞高度并加以記錄，再將溫氏管同上述速度再離心5分鐘,

至紅細(xì)胞不再下降為止，乘以0.01即為每升血液中紅細(xì)胞體積的升數(shù)，以L/L為單

位報(bào)告結(jié)果。

【報(bào)告方式】0.XX

【參考區(qū)間】

成年男性0.42—0.49L/L(42—49%)

成年女性0.37—0.43L/L(37—43%)

三、紅細(xì)胞沉降率

(DeterminationofErythrocytesedimentationrate簡(jiǎn)稱ESR)

測(cè)定(示教)

【原理】

紅細(xì)胞具有細(xì)胞膜的膠體性質(zhì)，除具有一定的表面張力以外，在紅細(xì)胞外有一層

水化膜使紅細(xì)胞互相隔離，紅細(xì)胞表面帶陰電荷，因此紅細(xì)胞互相排斥，而不易粘合

下沉。球蛋白與纖維蛋白原帶正電荷，因此二者增多或減少，都會(huì)使紅細(xì)胞沉降率發(fā)

生變化。離體抗凝血液置于特制刻度測(cè)定管內(nèi)，垂直立于室溫中，記時(shí)1小時(shí)觀察上

層血漿高度以紅細(xì)胞下沉的毫米數(shù)值報(bào)告。

【試劑】

109mmol/L(32g/L)枸檬酸鈉溶液：取含二分子結(jié)晶水枸檬酸鈉(分子量294.12)

3.2g,用蒸儲(chǔ)水溶解，稀釋至100ml。室溫保存不能超過(guò)2周.

【操作方法】

測(cè)定方法很多，現(xiàn)介紹魏(Mestergren)氏法

在13mmX100mm試管中先加3.8%枸檬酸鈉0.4毫升，靜脈取血1.6毫升注入上

述試管內(nèi)，立即混勻，用血沉管吸取抗凝血至刻度“0”處，垂直固定于血沉架上，

在室溫置1小時(shí)。

【報(bào)告方式】X毫米/小時(shí)

【參考區(qū)間】

男性＜15毫米/小時(shí)

女性〈20毫米/小時(shí)

【注意事項(xiàng)】

1、注射器、試管、血沉管均應(yīng)保持干凈干燥，以免溶血。

2、血沉管必須完全垂直，否則血沉加快，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3、血液與抗凝劑的比例應(yīng)要準(zhǔn)確，充分混合，并應(yīng)在抽血后3小時(shí)內(nèi)測(cè)定。

4、測(cè)定時(shí)溫度應(yīng)在18—25℃室溫進(jìn)行，溫度過(guò)高血沉加快，過(guò)低則變慢。

實(shí)驗(yàn)四

出血與血栓性疾病的實(shí)驗(yàn)室檢查

(LaboratoryExaminationofHemorrhagicDisorders)

【［內(nèi)容】

一、血小板計(jì)數(shù)(Platelecount簡(jiǎn)稱PC)

二、凝血酶原時(shí)間(PT)測(cè)定

三、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)測(cè)定

四、纖維蛋白原含量測(cè)定

五、凝血酶時(shí)間(TT)測(cè)定

【目的要求】

1、掌握血小板計(jì)數(shù)的原理、操作方法及參考值。

2、掌握凝血四項(xiàng)APTT、PT、TT、Fib試驗(yàn)的原理、方法、結(jié)果判斷及臨床意義。

3、熟悉凝血四項(xiàng)標(biāo)本送檢要求。

4、了解出血性疾病常用的實(shí)驗(yàn)室檢查方法及其原理。

【實(shí)驗(yàn)】

一、血小板計(jì)數(shù)(Plateletcount簡(jiǎn)稱PC)(目視計(jì)數(shù)法)

【原理】

取一定量血液，放于血小板稀釋液內(nèi)按一定倍數(shù)稀釋，破壞紅細(xì)胞及白細(xì)胞，用

直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，再算出每升血液中的血小板數(shù)。

【器材】

三棱針、玻棒、血紅蛋白吸管、小試管、顯微鏡等。

【試劑】

許汝和氏液：胭素10g；枸檬酸鈉0.5g,40%甲醛0.1毫升，蒸饋水加至100毫

升。

將上液混合，待溶解后過(guò)濾，放于冰箱內(nèi)保存。

【操作方法】

(1)取0.38毫升血小板稀釋液于清潔試管中。

(2)從耳垂或指端取血，用血紅蛋白吸管吸血至20立方毫米處，擦去管尖外所有

沾的血液迅速放人稀釋液內(nèi)，再用上清液沖洗吸管數(shù)次，混勻。

(3)取上述混勻的血小板懸液一滴，加至血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置10—15分鐘，讓

血小板下沉穩(wěn)定。

(4)用高倍鏡計(jì)數(shù)血小板，計(jì)數(shù)中央大方格中的5個(gè)中方格內(nèi)的血小板數(shù)，如以P

代表，則血小阪計(jì)數(shù)為：

PX5(變?yōu)?.lul)X10(變?yōu)閘ul)X20(稀釋倍數(shù))X106(將ul換算為L(zhǎng))=PX109

/L

【報(bào)告方式】xxX109/L

【參考區(qū)間】

血小板計(jì)數(shù)(100—300)X109/L

【注意事項(xiàng)】

(1)血小板要和其它雜質(zhì)區(qū)別，前者為園形折光小點(diǎn)，后者為碎片不折光，如血

小板聚集在一起，則不能計(jì)數(shù)，須另取標(biāo)本再檢。

(2)血液稀釋后，應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)計(jì)數(shù)完畢，如果時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則可使血小板逐漸破

壞，以致結(jié)果偏低。

(3)混懸液注入計(jì)數(shù)池后，靜置10—15分鐘為宜，時(shí)間過(guò)短，血小板未下沉，時(shí)

間過(guò)長(zhǎng)；血小扳被破壞，均使結(jié)果偏低。

二、凝血酶原時(shí)間(Prothrombintime,PT)測(cè)定(一步法)

【原理】

在待檢血漿中加入過(guò)量的含鈣組織凝血活酶，使凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?，凝?/p>

酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，測(cè)定從加入含鈣組織凝血活酶到血漿凝固所需的時(shí)

間即為凝血酶原時(shí)間。此試驗(yàn)可了解受檢血漿外源凝血系統(tǒng)凝血因子有無(wú)異常的情

況。

【器材】水浴箱、試管、試管架、加樣搶、吸頭、離心機(jī)、秒表

【試劑】

凍干含鈣凝血活酶102.0ml

稀釋液4~6.0ml

本批號(hào)國(guó)際敏感指數(shù)(1S1)值:2.20

【樣本收集和保存】

靜脈采血，血樣與抗凝劑(0.109mol/L枸檬酸三鈉)的比例為9：1,輕輕顛倒

混勻，以2700g(離心半徑18cm約3500轉(zhuǎn)/分)離心10分鐘，分離血漿待測(cè)。如該血

漿不能立即分析，應(yīng)將其密封放2—8℃保存，最長(zhǎng)不超過(guò)4小時(shí)，或立即置于一20℃

以下凍存不超過(guò)30天，用時(shí)37c融化，避免反復(fù)凍融。

【操作方法】

1、每瓶?jī)龈珊}凝血活酶加2.0ml稀釋液復(fù)溶即為PT應(yīng)用試劑。用前置，37℃

預(yù)熱。

1ml,~37c浴分鐘。

2、加入PT應(yīng)用試劑0.2Jof~-c,立刻計(jì)時(shí)，記錄凝固時(shí)間，即為凝血酶原時(shí)

間(PT)。采用儀器測(cè)定，請(qǐng)參考儀器使用說(shuō)明書(shū)。

【計(jì)算】

凝血酶原時(shí)間比值(PTR)

國(guó)際正?；戎?lNR)=PTRmI

本批試劑盒PT正常對(duì)照值：12.3秒

【報(bào)告方式】患者X秒，正常對(duì)照X秒

【參考區(qū)間】

1、以PT表示：12—15秒，超過(guò)正常對(duì)照3秒以上為異常。

2、以PTR表示：0.95—1.24

3、監(jiān)測(cè)口服抗凝藥，以INR表示。

建議各實(shí)驗(yàn)室使用健康正常血漿，建立自己的參考值范圍。

【注意事項(xiàng)】

1、抽血要順利，抗凝要充分，決不可有凝血塊。

2、水浴溫度控制在37土0.5℃,過(guò)高或過(guò)低均會(huì)影響結(jié)果。

3、樣品收集時(shí)不宜用EDTA和肝素作抗凝劑。

4、復(fù)溶試劑按每天使用量取適量預(yù)熱，未川完之預(yù)熱試劑應(yīng)棄去。復(fù)溶試劑請(qǐng)

勿冰凍保存。

5、如果血球壓積＜20%或＞55%,則需調(diào)整血樣與抗凝劑的比例，方法是0.00185

義血液毫升數(shù)X(100一壓積)=抗凝劑毫升數(shù)。

【貯存】

試劑2—8℃保存有效期為12個(gè)月，復(fù)溶試劑2—8℃保存有效期3天。

三、活化部分凝血活酶時(shí)間

（Activatedpartialthromboplastintime,APTT）測(cè)定

【原理】

在37c條件下，以白陶土（激活劑）激活因子刈，以腦磷脂（部分凝血活酶）代

替血小板提供凝血的催化表面，再加入適量的Ca「，即可滿足內(nèi)源性凝血的全部條件。

測(cè)定從加入CaJ血漿凝固所需的時(shí)間即為活化部分凝血活酶時(shí)間，此試驗(yàn)可了解受檢

血漿內(nèi)源凝血系統(tǒng)凝血因子有無(wú)異常的情況。

【器材】水浴箱、試管、試管架、加樣搶、吸頭、離心機(jī)、秒表

【試劑】

凍干部分凝血活酶10~L0ml

MS溶液2~6.0ml

0.025moi/氯化鈣溶液

【樣本收集和保存】

靜脈采血，血樣與抗凝劑（0.109mol/L枸椽酸三鈉）的比例為9：10輕輕顛倒

混勻，以2700g（離心半徑18cm約3500轉(zhuǎn)/分）離心10分鐘，分離血漿待測(cè)。如該

血漿不能立即分析，應(yīng)將其密封放2—8℃保存，最長(zhǎng)不超過(guò)4小時(shí)，或立即置于一

80℃以下凍存不超過(guò)30天，用時(shí)37℃融化，避免反復(fù)凍融。

【操作方法】

1、每瓶?jī)龈刹糠帜蠲讣覮OmlMS溶液復(fù)溶即為APTT試劑。

2、取待測(cè)血漿0.1ml,加入APTT試劑0.1ml,混勻，37c預(yù)熱5分鐘。

3、加入0.025mol/L氯化鈣溶液0.1ml,立刻計(jì)時(shí)，記錄凝固時(shí)間，即為活化

部分凝血活酶時(shí)間（APTT）。如采用儀器測(cè)定，請(qǐng)參考儀器使用說(shuō)明書(shū)。

【報(bào)告方式】患者X秒，正常對(duì)照X秒

【參考區(qū)間】

30—44秒，超過(guò)正常對(duì)照10秒以上為異常。

建議各實(shí)驗(yàn)室使用健康正常人血漿，建立自己的參考值范圍。

【注意事項(xiàng)】

1、抽血要順利，抗凝要充分，不可有凝血塊；分離血漿時(shí)，務(wù)必去除血小板。

2、水浴溫度控制在37_+0.5℃,過(guò)高或過(guò)低均會(huì)影響結(jié)果。

3、樣品收集時(shí)不宜用EDTA和肝素作抗凝劑。

4、本試劑盒所含MS溶液忌冰凍。

5、復(fù)溶試劑按每天使用量取適量預(yù)熱，未用完之預(yù)熱試劑應(yīng)棄去。復(fù)溶試劑請(qǐng)

勿冰凍保存。

6、本方法對(duì)于凝血因子活性40%的樣品欠敏感。

7、如果血球壓積＜20%或＞50%,則需調(diào)整血樣與抗凝劑的比例，方法是：0.00185

X血液毫升數(shù)X（100—壓積）抗凝劑毫升數(shù)。

【貯存】

試劑2-8℃保存有效期12個(gè)月。

復(fù)溶試劑2-8℃保存有效期3天。

四、纖維蛋白原含量測(cè)定（Fibrinogen,Fib）

【原理】

纖維蛋白原與凝血酶作用形成不溶性纖維蛋白，因而血漿在加入適量凝血酶后即

逐漸凝固，凝固時(shí)間與血漿中纖維蛋白原的濃度呈負(fù)相關(guān)。以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品為參比血漿

制作“凝固時(shí)間（S）——纖維蛋白原的濃度（g/L）”標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定被檢血漿的凝

固時(shí)間，被檢血漿的纖維蛋白原含量即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得。

【器材】水浴箱、試管、試管架、加樣搶、吸頭、離心機(jī)、秒表

【試劑】

1、凍干正常參比血漿2、凍干纖原試劑3、稀釋液4、凝血酶（凍

干品）

【樣品收集和保存】

靜脈采血，血樣與抗凝劑（0.109mol/L枸椽酸三鈉）的比例為9：1,輕輕顛倒混

勻，以2700g（相當(dāng)于離心半徑18cra約3500轉(zhuǎn)/分）離心10分鐘，分離血漿待測(cè)。

如該血漿不能立即分析，應(yīng)將其密封放2—8℃保存：最長(zhǎng)不超過(guò)4小時(shí)，或立即置于

一20C以下凍存不超過(guò)30天，用時(shí)37℃融化，避免反復(fù)凍融。

【操作方法】

1、試劑準(zhǔn)備：

(1)凍干正常參比血漿加0.5ml蒸儲(chǔ)水，即為正常參比血漿。

(2)凍干纖原試劑每瓶加1.0ml蒸餌水，即為纖原試劑。用前37℃預(yù)溫3分鐘

以上，但不可超過(guò)30分鐘。

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

(1)將正常參比血漿用稀釋液作1:5、1:101:20、1:40稀釋。

(2)取不同稀釋度的正常參比血漿0.2ml,置37c預(yù)熱3分鐘。

(3)加入纖原試劑0.1ml,立刻計(jì)時(shí)，記錄凝固時(shí)間。

(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的獲得：將以上測(cè)定時(shí)間與纖維蛋白原濃度值對(duì)應(yīng)即可獲得。

3、樣品測(cè)定

(1)將樣品用稀釋液作1:10稀釋待用。

(2)取稀釋后的待測(cè)血漿0.2ml,于37℃預(yù)熱3分鐘，加入纖原試劑0.1ml,

立刻計(jì)時(shí)記錄凝固時(shí)間。將凝固時(shí)間代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到纖維蛋白原濃度。如

采用儀器測(cè)定，請(qǐng)參考儀器使用說(shuō)明書(shū)。

【報(bào)告方式】X.XXg/L

【參考區(qū)間】

2.0-4.0g/L

建議各實(shí)驗(yàn)室使用健康正常人血漿，建立自己的參考值范圍。

【注意事項(xiàng)】

1、不同儀器判斷終點(diǎn)有所不同，故所得凝固時(shí)間及標(biāo)準(zhǔn)曲線會(huì)有所不同。但同

一批次試劑均應(yīng)獲得較理想的重復(fù)性及線性。

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作中，可根據(jù)檢測(cè)方法的不同、儀器的靈敏度和操作說(shuō)明以及檢

測(cè)要求等具體情況進(jìn)行多點(diǎn)選擇。

3、抗凝血酶物質(zhì)的存在會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4、不同批次纖原試劑效價(jià)可能不一樣，請(qǐng)嚴(yán)格按測(cè)定步驟1.2指示量復(fù)溶

5、如果血球壓積＜20%或＞55%,則需調(diào)整血樣與抗凝劑的比例血液毫升數(shù)X(100

一壓積)抗凝劑毫升數(shù)

6、復(fù)溶試劑按每天使用量取適量預(yù)熱，

【貯存】

本試劑2-8°C保存有效期12個(gè)月

復(fù)溶試劑2—8。。保存有效期3天。

復(fù)溶試劑請(qǐng)勿冰凍保存。

五、凝血酶時(shí)間(Thrombintime,TT)測(cè)定

【原理】

在血漿中加入標(biāo)準(zhǔn)化的凝血酶溶液，在凝血酶的作用下，血漿凝固所需要的時(shí)

間即凝血酶時(shí)間。

【器材】水浴箱、試管、試管架、加樣搶、吸頭、離心機(jī)、秒表

【試劑】

1、凍干凝血酶10X2.Oral2、正常參比血漿

【樣本收集和保存】

靜脈采血，血樣與抗凝劑(0.109mol拘橡酸三鈉)的比例為9：1輕輕顛倒混勻

2700g(離心半徑18cm約3500轉(zhuǎn)/分)離心10分鐘，分離血漿待測(cè)。如該血漿不能立

即分析，應(yīng)將其密封放2—8℃保存，最長(zhǎng)不超過(guò)4天，或立即置于-2℃以下凍存不超

過(guò)30天，用時(shí)37℃融化，避免反復(fù)凍融。

【操作方法】

1、每瓶?jī)龈赡讣?ml蒸鐳水復(fù)溶即為T(mén)T應(yīng)用試劑超過(guò)30分鐘。

2、取待測(cè)血漿0.2ml,37℃預(yù)溫2分鐘。

3、加入TI'應(yīng)用試劑0.2ml混勻，立刻計(jì)時(shí)如采用儀器測(cè)定，請(qǐng)參考儀器使

用說(shuō)明書(shū)。

【報(bào)告方式】患者X秒，正常對(duì)照X秒

【參考區(qū)間】

16-18秒，超過(guò)正常對(duì)照3秒以上為異常。建議各實(shí)驗(yàn)室使用健康正常人血

漿。

【注意事項(xiàng)】

用前37℃預(yù)熱。預(yù)熱時(shí)間不記錄凝固時(shí)間，即為凝血酶時(shí)間(TT)。建立自己的參

考值范圍。

1、抽血要順利，抗凝要充分，決不可有凝血塊。

2、浴溫度控制在37±0.5℃,過(guò)高或過(guò)低均會(huì)影響結(jié)果。

3、樣本收集時(shí)不宜用EDTA和肝素作抗凝劑。

4、觀察凝固時(shí)，光線要充足，必要時(shí)作雙份測(cè)定，可報(bào)告其均值。

5、批次復(fù)溶凝血酶的量應(yīng)按測(cè)定步驟1的指示量進(jìn)行，或者用正常參比血漿的

凝固時(shí)間16—18秒作為控制標(biāo)準(zhǔn)，如偏離此范圍，可適當(dāng)增或減稀釋液的用

6、如果血球壓積＜20%或＞55%,則需調(diào)整血樣與抗凝劑的比例血液毫升數(shù)X(100

一壓積)抗凝劑毫升數(shù)

【貯存】

本試劑2—8C保存有效期12個(gè)月

復(fù)溶試劑2—8C保存有效期3天。

實(shí)驗(yàn)五

一血型鑒定與配血(Bloodgrouptypingandmatchingofblood)

【內(nèi)容】

1、ABO血型鑒定

2、Rh血型鹽水介質(zhì)法鑒定

3、交叉配血試驗(yàn)

(1)鹽水介質(zhì)配血法

(2)聚凝胺介質(zhì)配血法

【目的要求】

1、掌握AB0血型鑒定的原理、方法及臨床意義。

2、掌握交叉配血的原理及臨床意義。

3、掌握Rh血型鑒定的原理、方法及臨床意義。

【器材】

試管、雙凹玻片、顯微鏡、竹簽、離心機(jī)

【試劑】

抗A標(biāo)準(zhǔn)血清、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清、抗D血清、5%紅細(xì)胞鹽水懸液。

【實(shí)驗(yàn)】

實(shí)驗(yàn)一ABO血型鑒定(ABObloodgrouptyping)

【原理】

根據(jù)紅細(xì)胞上有或無(wú)A抗原或/和B抗原，將血型分為A型B型AB型及。型4

種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒定AB0血型。所謂正定型，是用

已知抗一A和抗一B分型血清來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的A抗原或/和B抗原；所謂

反定型,是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗-A或/和抗-B。

【試劑】

1、抗A標(biāo)準(zhǔn)血清

2、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清

3.受檢者血清

4.受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液

【操作方法】

1.試管法

⑴取潔凈小試管(內(nèi)徑1OmmX60mm)3支，分別標(biāo)明抗-A、抗-B,用滴管分別加抗一A、

抗一B和抗一A+B分型血清各1滴于試管底部，再以滴管分別加人受檢者5%紅細(xì)胞鹽

水懸液1滴，混和。

⑵另取潔凈小試管(內(nèi)徑lOmmX60mm)3支，分別標(biāo)明A、B型細(xì)胞，用滴管分別加入

受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和0型5%試劑紅細(xì)胞懸液1

滴，混和。

(3)立即以1000r/min離心Imin。

(4)將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無(wú)凝集(或溶血)現(xiàn)

象。如肉眼不見(jiàn)凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。

(5)觀察結(jié)果時(shí)既要看有無(wú)凝集,更要注意凝集強(qiáng)度,此有助于A、B亞型、類(lèi)B或cisAB

的發(fā)現(xiàn)。

(6)凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)

4+=紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。

3+=紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。

2+=紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見(jiàn)到游離紅細(xì)胞。

1+=肉眼可見(jiàn)大顆粒，周?chē)休^多游離紅細(xì)胞。

±=鏡下可見(jiàn)數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起.周?chē)泻芏嘤坞x紅細(xì)胞。

MF=混合凝集外觀（mixedfield）是指鏡下可見(jiàn)少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅

細(xì)胞仍呈分散分布。

一表示陰性，鏡下未見(jiàn)凝集，紅細(xì)胞均勻分布。

（7）按下表報(bào)告受檢者紅細(xì)胞ABO血型。

2.玻片法

（1）取清潔玻片1張（或白瓷板1塊），用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗M、抗-B和抗一

A+B分別用滴管滴加抗-A、抗-B和抗一A+B血清1滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者

2%紅細(xì)胞懸液1