托幼機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范

1托幼機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了托幼機(jī)構(gòu)的消毒術(shù)語(yǔ)和定義、管理要求和采樣及檢驗(yàn)方法等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各級(jí)各類托幼機(jī)構(gòu)。托育機(jī)構(gòu)可參照本標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB15982醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB19193疫源地消毒總則GB37488公共場(chǎng)所衛(wèi)生指標(biāo)及限值要求GB14934食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)消毒餐（飲）具GB15979一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB4789.4食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)GB/T18204.4公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第4部分：公共用品用具微生物WS394公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范WS/T396公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)清洗消毒規(guī)范WS/T699人群聚集場(chǎng)所手衛(wèi)生規(guī)范托兒所幼兒園衛(wèi)生保健管理辦法（原衛(wèi)生部、教育部令76號(hào)）托兒所幼兒園衛(wèi)生保健工作規(guī)范（衛(wèi)婦社發(fā)〔2012〕35號(hào)）四川省幼托機(jī)構(gòu)消毒隔離工作常規(guī)3術(shù)語(yǔ)和定義3.1托幼機(jī)構(gòu)nurseryandkindergarten招收0~6歲兒童的各級(jí)各類托兒所、幼兒園。3.2托育機(jī)構(gòu)baby-careinstitution為3歲以下嬰幼兒提供全日托、半日托、計(jì)時(shí)托、臨時(shí)托等托育服務(wù)的機(jī)構(gòu)。3.3消毒disinfection殺滅或清除傳播媒介上病原微生物，使其達(dá)到無(wú)害化的處理。23.4預(yù)防性消毒preventivedisinfection在沒有明確的傳染源存在時(shí)，對(duì)可能受到病原微生物污染的場(chǎng)所和物品進(jìn)行的消毒。3.5疫源地消毒disinfectionforinfectiousfocus對(duì)疫源地內(nèi)污染的環(huán)境和物品的消毒。疫源地是傳染源排出的病原微生物所能波及的范圍。3.6隨時(shí)消毒terminaldisinfection有傳染源存在時(shí)，對(duì)其排除的病原體可能污染的環(huán)境和物品及時(shí)進(jìn)行的消毒。3.7終末消毒terminaldisinfection傳染源離開疫源地后進(jìn)行的徹底消毒。3.8消毒產(chǎn)品disinfectantsandsterilizingapparatus符合國(guó)家有關(guān)法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范規(guī)定的消毒劑、消毒器械和衛(wèi)生用品。4衛(wèi)生要求4.1預(yù)防性消毒衛(wèi)生要求4.1.1托幼機(jī)構(gòu)日常預(yù)防性消毒應(yīng)參照《托兒所幼兒園衛(wèi)生保健工作規(guī)范》規(guī)定定期進(jìn)行，傳染病流行時(shí)，適當(dāng)增加消毒頻次。4.1.2應(yīng)使用符合國(guó)家有關(guān)法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的消毒產(chǎn)品。應(yīng)嚴(yán)格按照消毒產(chǎn)品說(shuō)明書規(guī)定的使用范圍和使用方法，在有效期內(nèi)使用。應(yīng)妥善保管消毒產(chǎn)品及相關(guān)用品，明確標(biāo)識(shí)，避免幼兒接觸。4.1.3盡量保持室內(nèi)空氣流通，每日至少開窗通風(fēng)2次，每次10~15min。不宜開窗通風(fēng)時(shí)，可采用機(jī)械通風(fēng)設(shè)施或者空氣凈化消毒設(shè)備每日對(duì)室內(nèi)空氣消毒2次。4.1.4應(yīng)定期清洗分體式空調(diào)系統(tǒng)的過(guò)濾網(wǎng)、過(guò)濾器等裝置。集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)應(yīng)按照WS394和WS/T396有關(guān)要求執(zhí)行。4.1.5環(huán)境、物體表面和物品以清潔為主，受到污染后應(yīng)及時(shí)清潔和消毒。傳染病流行時(shí)，適當(dāng)增加消毒頻次。4.1.6室內(nèi)地面應(yīng)保持清潔、干燥，每日采用濕式清掃方式清潔1~2次。34.1.7餐桌每餐使用前消毒，門把手、水龍頭、床圍欄等兒童易觸摸的物體表面每日消毒1次，反復(fù)使用的餐巾每次使用后消毒，擦手毛巾每日消毒1次，使用含氯消毒劑消毒后應(yīng)用清水將殘留消毒劑擦凈。4.1.8洗手池、坐便器等每次使用后及時(shí)沖洗干凈、保持清潔，接觸皮膚部位每日消毒1~2次。盛裝嘔吐物、排泄物的容器、痰盂等每次使用后及時(shí)清洗消毒。4.1.9兒童接觸的用具、玩具等每周至少清潔消毒1次，紙質(zhì)書籍宜每?jī)芍苓M(jìn)行1次通風(fēng)晾曬。4.1.10應(yīng)做好拖布、抹布等清潔用具的管理和消毒。宜在不同區(qū)域使用不同的清潔用具，一次性使用的不得反復(fù)使用，重復(fù)使用的用完后應(yīng)及時(shí)清洗，干燥后存放。清潔用具應(yīng)每日消毒1~2次。4.1.11工作人員在開始工作前應(yīng)洗手。接觸過(guò)傳染病疑似或確診病例的幼兒及其污染物品后，應(yīng)立即洗手。4.1.12幼兒入院時(shí)、進(jìn)食前、如廁后、接觸公共設(shè)施后、室外活動(dòng)后和接觸鼻涕、唾液后，應(yīng)及時(shí)洗手。4.1.13洗手時(shí)，應(yīng)采用流動(dòng)水，使用肥皂或洗手液，反復(fù)揉搓，徹底洗凈雙手后，用干手物品擦干雙手。必要時(shí)，工作人員可在洗手基礎(chǔ)上使用手消毒劑進(jìn)行手消毒。推薦參照WS/T699規(guī)定的“六步洗手法”洗手。4.1.14餐（飲）具和盛放直接入口食品的容器，應(yīng)做到一人一用一清洗消毒，首選熱力消毒等物理消毒方法進(jìn)行消毒。餐（飲）具應(yīng)符合GB14934有關(guān)要求。4.2預(yù)防性消毒衛(wèi)生要求4.2.1托幼機(jī)構(gòu)內(nèi)出現(xiàn)傳染病疫情時(shí)，應(yīng)按照GB19193有關(guān)要求，在疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)指導(dǎo)下，做好隨時(shí)消毒和終末消毒。4.2.2消毒的對(duì)象與方法應(yīng)符合傳染病病原體特征，并與傳染病傳播途徑一致。如腸道傳染病應(yīng)重點(diǎn)對(duì)手、餐（飲）具、衛(wèi)生間等進(jìn)行消毒；呼吸道傳染病應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)室內(nèi)通風(fēng)換氣或者采取空氣消毒措施，并暫停使用集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)。5衛(wèi)生指標(biāo)及限值要求5.1托幼機(jī)構(gòu)日常預(yù)防性消毒衛(wèi)生指標(biāo)及其限值要求應(yīng)符合表1規(guī)定。表1衛(wèi)生指標(biāo)及限值要求對(duì)象衛(wèi)生指標(biāo)限值要求室內(nèi)空氣細(xì)菌菌落總數(shù)（沉降法CFU/皿·5min）細(xì)菌菌落總數(shù)（撞擊法CFU/皿·5min）≤1500物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)（CFU/cm2）大腸菌群（發(fā)酵法）致病菌a（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、溶血性鏈球菌）不得檢出不得檢出工作人員手細(xì)菌菌落總數(shù)（CFU/cm2）大腸菌群（發(fā)酵法）不得檢出4致病菌a（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌）不得檢出餐（飲）具大腸菌群致病菌a（銅綠假單胞菌、沙門氏菌）不得檢出不得檢出使用中消毒液細(xì)菌菌落總數(shù)（CFU/mL）≤1005.2托幼機(jī)構(gòu)發(fā)生傳染病疫情時(shí)，消毒效果評(píng)價(jià)應(yīng)符合GB19193有關(guān)要求。6采樣及檢驗(yàn)方法衛(wèi)生指標(biāo)的采樣及檢驗(yàn)方法按附錄A執(zhí)行。5（規(guī)范性附錄）采樣及檢驗(yàn)方法A.1采樣及檢驗(yàn)原則在清潔或消毒處理后2h內(nèi)進(jìn)行采樣。微生物指標(biāo)的檢驗(yàn)應(yīng)在采樣后4h內(nèi)盡快進(jìn)行，如不能在4h內(nèi)檢驗(yàn)，樣品應(yīng)保存于0~4℃條件下，在24h內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)。A.2室內(nèi)空氣微生物采樣及檢驗(yàn)方法A.2.1樣品采集在動(dòng)態(tài)下進(jìn)行，樣品采集可選擇空氣采樣器法或者平板暴露法。A.2.1.1空氣采樣器法選擇六級(jí)撞擊式空氣采樣器或其它經(jīng)驗(yàn)證的空氣采樣器，檢測(cè)時(shí)將采樣器置于室內(nèi)中央0.8m~1.5m高度，按采樣器使用說(shuō)明書操作，啟動(dòng)采樣器采樣5min，房間大于10m2，每增加10m2，增設(shè)一個(gè)采樣A.2.1.2平板暴露法室內(nèi)面積小于等于30m2，設(shè)置內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、設(shè)置4角及中央5點(diǎn)，4角的布置位置應(yīng)距墻壁1m處。將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平皿（直徑9cm）放置各采樣點(diǎn)，采樣高度為距地面0.8m~1.5m高度，采樣時(shí)將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，使平皿在空氣中暴露5min后蓋上平皿蓋及時(shí)送檢。A.2.2細(xì)菌培養(yǎng)將送檢平皿置36℃±1℃培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)平皿上細(xì)菌菌落數(shù)。A.2.3結(jié)果計(jì)算A.2.3.1空氣采樣器法空氣中菌落總數(shù)按照公式（A.1）計(jì)算：×1000.............................................................................(A.1)式中：—空氣中細(xì)菌菌落總數(shù)，單位為菌落形成單位每立方米（CFU/cm3）；—總和的符號(hào)；C—平板菌落數(shù)，單位為菌落形成單位（CFU）；Q—空氣流量，單位為每升每分鐘（L/min）；T—采樣時(shí)間，單位為分鐘（min）；1000—換算系數(shù)。6A.2.3.2平板暴露法按平均菌落數(shù)的計(jì)算公式（A.2）計(jì)算：..................................................................................(A.2)式中：V2—采樣平板暴露5min平均菌落數(shù)，單位（CFU/皿?5min—總和的符號(hào)；C—平板菌落數(shù)，單位為菌落形成單位（CFU）；N—采樣平板數(shù)。A.3物體表面、手微生物采樣及檢驗(yàn)方法A.3.1樣品采集A.3.1.1物體表面被采表面不足100cm2的，取全部表面；被采表面大于等于100cm2，取100cm2。用經(jīng)滅菌的內(nèi)徑為5cm×5cm的滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用浸有無(wú)菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水采樣液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，連續(xù)采樣1~4個(gè)規(guī)格板面積（門把手等不規(guī)則物體表面采樣，直接用棉拭子涂抹，估算采樣面積剪去手接觸部分棉棒，將棉拭子放入含10mL采樣液的試管中送檢。若采樣物體表面有消毒劑殘留，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)的中和劑。A.3.1.2手被檢人在清潔或消毒處理后，接觸幼兒或餐飲活動(dòng)前采樣。將被檢人五指并攏，用浸有無(wú)菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水采樣液的棉拭子1支在雙手指曲面，從指跟到指端來(lái)回涂擦各2次（一只手涂擦面積約30cm2剪去手接觸部位棉棒，將棉拭子放入含10mL采樣液的試管中送檢。若采樣時(shí)手上有消毒劑殘留，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)的中和劑。A.3.2菌落總數(shù)A.3.2.1檢驗(yàn)方法將采樣液充分振蕩混勻后，取2~3個(gè)適宜稀釋倍數(shù)的樣液各1.0mL接種平皿，傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂，每個(gè)稀釋度平行接種兩個(gè)平皿，置36℃±1℃培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。必要時(shí)分離致病性微生物。A.3.2.2結(jié)果計(jì)算A.3.2.2.1物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)按照公式（A.3）計(jì)算：............................................................................................................................................................式中：—物體表面菌落總數(shù)，單位為菌落形成單位每平方厘米（CFU/cm2N—平板平均菌落數(shù)，單位為菌落形成單位每皿（CFU/皿7k—稀釋倍數(shù)；S—采樣面積，單位為平方厘米（cm2）。A.3.2.2.2手表面細(xì)菌菌落總數(shù)手表面細(xì)菌菌落總數(shù)按照公式（A.4）計(jì)算：..........................................................................................................................................................式中：—手表面菌落總數(shù)，單位為菌落形成單位每平方厘米（CFU/cm2N—平板平均菌落數(shù)，單位為菌落形成單位每皿（CFU/皿k—稀釋倍數(shù)；2—代表采兩只手；30—每只手采樣面積按30cm2計(jì)算。A.3.3大腸菌群A.3.3.1檢驗(yàn)方法取樣液1mL接種9mL乳糖膽鹽發(fā)酵管，置36℃±1℃培養(yǎng)24h，如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報(bào)告為大腸菌群陰性。如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃線接種伊紅美藍(lán)瓊脂平板，置36℃±1℃培養(yǎng)18~24h，觀察平板上菌落形態(tài)。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤(rùn)，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落。取疑似菌落1~2個(gè)作革蘭氏染色鏡檢，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36℃±1℃培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)氣情況。A.3.3.2結(jié)果報(bào)告凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍(lán)平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性無(wú)芽胞桿菌，可報(bào)告被檢樣品檢出大腸桿菌。A.3.4致病菌A.3.4.1金黃色葡萄球菌A.3.4.1.1檢驗(yàn)方法取樣液1mL，加入到9mLSCDLP或7.5％氯化鈉肉湯培養(yǎng)液中，充分混勻，置36℃±1℃培養(yǎng)24h。自上述增菌液中取1~2接種環(huán)，劃線接種在血瓊脂平板或BairdParker平板上，置36℃±1℃培養(yǎng)24~48h。在血瓊脂平板上該菌菌落呈金黃色、突起、圓形，不透明、表面光滑，周圍有溶血圈，在BairdParker平板上該菌菌落呈圓形、光滑、凸起、表面光滑、黑灰色。挑取典型菌落，涂片作革蘭氏染色鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列成葡萄狀，無(wú)芽胞與莢膜。鏡檢符合上述情況，應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn)：血漿凝固酶試驗(yàn)：吸取1:4新鮮血漿0.5mL，放滅菌小試管中，加人待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5mL，混勻，放36℃±1℃溫箱或水浴中，每30min觀察一次，24h之內(nèi)呈現(xiàn)凝塊即為陽(yáng)性。同時(shí)以已知血漿凝固酶陽(yáng)性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物各0.5mL，分別加入滅菌小試管內(nèi)與1:4新鮮血漿0.5mL混勻，作為陽(yáng)性與陰性對(duì)照。也可使用生化鑒定卡對(duì)可疑菌落進(jìn)行鑒定。8A.3.4.1.2結(jié)果報(bào)告凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長(zhǎng)，鏡檢為革蘭氏陽(yáng)性葡萄球菌，血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性，可報(bào)告檢出金黃色葡萄球菌。A.3.4.2銅綠假單胞菌A.3.4.2.1檢驗(yàn)方法取樣液1mL接種于9mLSCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置36℃±1℃培養(yǎng)18~24h。如有銅綠假單胞菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍(lán)綠色。從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板，置36℃±1℃培養(yǎng)18~24h，觀察菌落特征。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色，其他菌不長(zhǎng)。取可疑菌落涂片作革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性菌者應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn)：a.氧化酶試驗(yàn)：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無(wú)菌玻棒挑取可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對(duì)苯二胺試液，30s內(nèi)出現(xiàn)粉紅色或紫紅色，為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，不變色者為陰性。b.綠膿菌素試驗(yàn)：取2~3個(gè)可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基斜面，36℃±1℃培養(yǎng)24h,加入三氯甲烷3~5mL，充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解，待三氯甲烷呈藍(lán)色時(shí)，用吸管移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL，振蕩后靜置片刻。如上層出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽(yáng)性，表示有綠膿菌素存在。c.硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)：挑取被檢菌落純培養(yǎng)物接種在硝酸鹽胨水培養(yǎng)基中，置36℃±1℃培養(yǎng)24h，培養(yǎng)基小倒管中有氣者即為陽(yáng)性。d.明膠液化試驗(yàn)：取可疑菌落純培養(yǎng)物，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi)，置36℃±1℃培養(yǎng)24h，取出放于4~10℃,如仍呈液態(tài)為陽(yáng)性，凝固者為陰性。e.42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)：取可疑培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，置42℃培養(yǎng)24h-48h，有銅綠假單胞菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性。也可使用生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡對(duì)可疑菌落進(jìn)行鑒定。A.3.4.2.2結(jié)果報(bào)告被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)均為陽(yáng)性者，即可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)三者皆為陽(yáng)性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。A.3.4.3沙門氏菌取樣液1mL接種于9mLBPW無(wú)菌試管內(nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)8h~18h增菌后續(xù)檢測(cè)按GB4789.4進(jìn)行。A.3.4.4溶血性鏈球菌A.3.4.4.1檢驗(yàn)方法取樣液1mL加人到9m