實(shí)驗(yàn)室菌株管理制度

實(shí)驗(yàn)室菌株管理制度.目的建立實(shí)驗(yàn)室菌株管理制度。.范圍適用于實(shí)驗(yàn)室菌株的管理。.職責(zé)實(shí)驗(yàn)員和實(shí)驗(yàn)室管理員負(fù)責(zé)對(duì)本制度實(shí)施。QA負(fù)責(zé)監(jiān)測本規(guī)程的執(zhí)行。.規(guī)程菌種管理菌種復(fù)活4.1.3.1.凍干菌種若購入的標(biāo)準(zhǔn)菌株是玻璃安瓿瓶裝的凍干粉劑則需對(duì)凍干菌種進(jìn)行復(fù)活。首先清潔安瓿，安瓿的表面用75%的酒精擦拭并讓其自然干燥；然后用一小砂輪在安瓿的上部劃一條線，用手輕輕將安瓿掰開（開啟時(shí)必須小心，因?yàn)榘碴涤鰺釙r(shí)可能會(huì)破裂）；再用一無菌吸管移取1-2ml適宜的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基到安瓿中；輕輕地旋轉(zhuǎn)安瓿使凍干菌種和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基充分混合并完全溶解；最后將安瓿內(nèi)菌液轉(zhuǎn)接到相應(yīng)的液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中在適宜的條件下培養(yǎng)，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、枯草芽孢桿菌和生孢梭菌于30-35℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，白色念珠菌于20-25℃培養(yǎng)24-48小時(shí)，黑曲霉于20-25℃培養(yǎng)5-7天。斜面菌種若購入的標(biāo)準(zhǔn)菌株是試管裝瓊脂斜面則不需要進(jìn)行菌種復(fù)活。菌種確認(rèn)取上述凍干菌種（細(xì)菌）的液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物或斜面菌種（細(xì)菌）的斜面培養(yǎng)物劃線接種到胰酪大豆胨瓊脂平皿上，30-35℃培養(yǎng)48小時(shí)，培養(yǎng)結(jié)束后觀察菌落形態(tài)，然后挑取單一的純菌落，進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢，觀察其染色特性及菌形。取上述凍干菌種（真菌）的液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物或斜面菌種（真菌）的斜面培養(yǎng)物劃線接種到沙氏葡萄糖瓊脂平皿上，20-25℃培養(yǎng)5-7天，觀察菌落形態(tài)，然后挑取單一的純菌落，進(jìn)行染色和鏡檢，觀察其染色特性及菌形。菌落形態(tài)A.大腸埃希菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，乳白色，光滑，薄，蔓延，半透明。B.金黃色葡萄球菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，白色至淺黃色，光滑，濕潤，全緣。C.銅綠假單胞菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，白色，伸展形，邊緣透明，不規(guī)則，培養(yǎng)基變?yōu)闇\綠色至暗黑色。D.沙門菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，淺灰色，濕潤，光滑，半透明。E.枯草芽孢桿菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，奶油色至微褐色，粗糙，不透明，不閃光，蠟質(zhì)，蔓延。F.生孢梭菌：胰酪大豆胨瓊脂平皿或斜面上，中部突起，白色至淡黃色，邊緣模糊不規(guī)則，表面無光澤。G.白色念珠菌：沙氏葡萄糖瓊脂平皿或斜面上，乳白色，濕潤，光滑，易挑取，正、反面及邊緣、中心顏色一致，質(zhì)地均勻。H.黑曲霉：沙氏葡萄糖瓊脂平皿或斜面上，起初白色，常常出現(xiàn)鮮黃色區(qū)域，后黑色，反面無色或中央部分略帶黃褐色。鏡檢A.大腸埃希菌：革蘭氏陰性桿菌或短桿菌，無芽孢。B.金黃色葡萄球菌：革蘭氏陽性球菌，排列不規(guī)則，堆聚似葡萄串狀。C.銅綠假單胞菌：革蘭氏陰性桿菌，長短不一，無芽孢。D.沙門菌：革蘭氏陰性桿菌，無芽孢。E.枯草芽孢桿菌：陽性桿菌，部分內(nèi)含芽孢，橢圓形，中生或次端生。F.生孢梭菌：革蘭氏染色陽性，芽孢卵圓形、次端生。G.白色念珠菌：卵圓形，出芽繁殖，革蘭氏陽性。H.黑曲霉：菌絲為有隔的多細(xì)胞，分生孢子梗頂端膨大成頂囊，頂囊的表面以輻射狀長出二層小梗，小梗頂端產(chǎn)生一串圓形的分生孢子。菌種傳代與保藏4.1.5.1.將微生物接種至一新的培養(yǎng)基上/內(nèi)，每萌發(fā)一次即稱為一代，菌種的傳代次數(shù)（自原始凍干菌種起）不得超過5代。本實(shí)驗(yàn)室菌種保藏采用斜面低溫保藏法。將菌種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌生長充分以后，轉(zhuǎn)移到2-8℃冰箱中保藏。視菌種的生長情況，正常情況下芽孢桿菌（枯草芽孢桿菌）每3個(gè)月傳代接種一次，其他細(xì)菌（大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、生孢梭菌）每月傳代接種一次，酵母菌（白色念珠菌）每4個(gè)月傳代接種一次，絲狀真菌（黑曲霉）每4個(gè)月傳代接種一次。每次傳代接種2支或2支以上試管，一支作為下一次傳代使用，其他的作為日常檢驗(yàn)中使用。菌種傳代操作步驟細(xì)菌和酵母菌：右手執(zhí)接種工具，左手執(zhí)試管，燒針滅菌，拔塞燒口，挑菌移植，燒口塞管，燒針滅菌，培養(yǎng)。霉菌：將2-3ml0.9%無菌氯化鈉溶液加入到原菌種管內(nèi)，反復(fù)震搖，將孢子洗脫，取適量孢子懸液接種于瓊脂斜面上，燒口塞管，培養(yǎng)。培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、枯草芽孢桿菌和生孢梭菌使用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為30-35℃培養(yǎng)24小時(shí)（枯草芽孢桿菌培養(yǎng)48小時(shí)），白色念珠菌和黑曲霉使用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，20-25℃培養(yǎng)5-7天。質(zhì)量控制菌種儲(chǔ)存菌種需單獨(dú)放置于2-8℃冰箱內(nèi)保藏，有專人負(fù)責(zé)保管并建立實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有菌種清單（見附件四：實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有菌種清單）。菌種的使用菌種必須在有效期內(nèi)才能使用，每次使用應(yīng)做好相應(yīng)的記錄工作（具體見附錄五：菌種使用記錄）菌懸液的制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌和枯草芽孢桿菌接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，生孢梭菌接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，30-35℃培養(yǎng)18-24小時(shí)；白色念珠菌接種于沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20-25℃培養(yǎng)24-48小時(shí)；黑曲霉接種于沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基中，20-25℃培養(yǎng)5-7天。用0.9%無菌氯化鈉溶液（稀釋黑曲霉孢子時(shí)加入0.05%聚山梨醇酯-80）制成實(shí)驗(yàn)中規(guī)定濃度的菌懸液或孢子懸液。稀釋后菌懸液于2-8℃條件下保存，制備后的24小時(shí)內(nèi)使用。菌種的銷毀使用后的菌種，必須經(jīng)過121℃、30分鐘高溫高壓濕熱滅菌處理，方可遺棄，同時(shí)做好銷毀記錄。其他相關(guān)事項(xiàng)菌種是特殊的標(biāo)準(zhǔn)品，在一定條件下，許多都是病原菌，如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、白色念珠菌等。所以必須實(shí)行嚴(yán)密安全的保藏管理，用于菌種保藏的冰箱需上鎖；有關(guān)菌種的所有操作都應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，僅有微生物實(shí)驗(yàn)員才能使用菌種；操作人員必須穿工作服，配戴手套，口罩等防護(hù)用品；在操作過程中，要求無菌操作，防止交叉污染或?qū)⑽廴緜鞑サ絼e的地方。.記錄實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程HYT/SMP-QA-ZB-004偏差調(diào)查與處理管理規(guī)程HYT/SMP-QA-ZB-008檢驗(yàn)異常管理規(guī)程HYT/SMP-QA-ZB-0107.參考文獻(xiàn)無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)管理規(guī)范YY0033-2000中國藥典2022版8.修訂歷史附件1：菌種采購清單附件2：HYT/SMP-QA-ZB-028菌種名稱標(biāo)準(zhǔn)號(hào)接種日期傳代數(shù)有效期傳代人附件3：HYT/SMP-QA-ZB-028菌種名稱菌號(hào)來源代菌種傳代接種情況：菌種確認(rèn)菌落形態(tài)：鏡檢：API鑒定：確認(rèn)結(jié)果口符合規(guī)定口不符合規(guī)定操作人:復(fù)核人：保藏條件有效期附件4：HYT/SMP-QA-ZB-028菌種名稱狀態(tài)菌號(hào)大腸埃希菌Echerichiacoli金黃色葡萄球菌Staphylococcuaureu銅綠假單胞菌Peudomonaaeruginoa沙門菌Salmonellaapecie枯草芽孢桿菌Bacilluubtili生孢梭菌Clotridiumporogene白色念珠菌Candidaalbican黑曲霉Apergilluniger“O”表示無