2022屆高考生物一輪復(fù)習(xí)第1講基因工程課末總結(jié)課件新人教版選修3202106052254

第1講基因工程課末總結(jié)

知識(shí)導(dǎo)圖·思維縷析1．限制酶具有特異性，即一種限制酶只能識(shí)別特定的核苷酸序列，并在特定的位點(diǎn)上切割DNA分子。DNA連接酶的作用部位是磷酸二酯鍵。2．質(zhì)粒是常用的載體，它是一種小型的雙鏈環(huán)狀DNA分子，具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)及標(biāo)記基因。3．基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)。

學(xué)科素養(yǎng)·核心釋疑4．培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，受體細(xì)胞必須是受精卵；培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是體細(xì)胞。5．目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用顯微注射技術(shù)，導(dǎo)入微生物細(xì)胞常用感受態(tài)細(xì)胞法。6．目的基因到了另一種生物體內(nèi)能夠成功表達(dá)的原理是所有生物共用一套遺傳密碼。

探究高考·明確考向1．(2020·天津卷，16)Ⅰ型糖尿病是因免疫系統(tǒng)將自身胰島素作為抗原識(shí)別而引起的自身免疫病。小腸黏膜長(zhǎng)期少量吸收胰島素抗原，能誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)識(shí)別該抗原后應(yīng)答減弱，從而緩解癥狀。科研人員利用Ⅰ型糖尿病模型小鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，使乳酸菌在小鼠腸道內(nèi)持續(xù)產(chǎn)生人胰島素抗原，為此構(gòu)建重組表達(dá)載體，技術(shù)路線如下。據(jù)圖回答：(1)為使人胰島素在乳酸菌中高效表達(dá)，需改造其編碼序列。下圖是改造前后人胰島素B鏈編碼序列的起始30個(gè)核苷酸序列。據(jù)圖分析，轉(zhuǎn)錄形成的mRNA中，該段序列所對(duì)應(yīng)的片段內(nèi)存在堿基替換的密碼子數(shù)有_____個(gè)。6

(2)在人胰島素A、B肽鏈編碼序列間引入一段短肽編碼序列，確保等比例表達(dá)A、B肽鏈。下列有關(guān)分析正確的是____________。A．引入短肽編碼序列不能含終止子序列B．引入短肽編碼序列不能含終止密碼子編碼序列C．引入短肽不能改變A鏈氨基酸序列D．引入短肽不能改變?cè)艘葝u素抗原性(3)在重組表達(dá)載體中，SacⅠ和XbaⅠ限制酶僅有圖示的酶切位點(diǎn)。用這兩種酶充分酶切重組表達(dá)載體，可形成_____種DNA片段。ABCD

3

(4)檢測(cè)轉(zhuǎn)化的乳酸菌發(fā)現(xiàn)，信號(hào)肽—重組人胰島素分布在細(xì)胞壁上。由此推測(cè)，信號(hào)肽的合成和運(yùn)輸所經(jīng)歷的細(xì)胞結(jié)構(gòu)依次是______________________________________。(5)用轉(zhuǎn)化的乳酸菌飼喂Ⅰ型糖尿病模型小鼠一段時(shí)間后，小鼠體內(nèi)出現(xiàn)人胰島素抗原，能夠特異性識(shí)別它的免疫細(xì)胞有________。A．B細(xì)胞

B．T細(xì)胞C．吞噬細(xì)胞 D．漿細(xì)胞核糖體、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、細(xì)胞膜、細(xì)胞壁

AB

[解析]

(1)從圖示可知，改造前后人胰島素B鏈編碼序列的起始30個(gè)核苷酸序列有7個(gè)核苷酸發(fā)生了替換，則其轉(zhuǎn)錄形成的mRNA中，也會(huì)有7個(gè)核苷酸發(fā)生改變，一個(gè)密碼子由mRNA上三個(gè)連續(xù)的堿基組成，由此可知，該段序列所對(duì)應(yīng)的片段內(nèi)存在堿基替換的密碼子數(shù)有6個(gè)。(2)要確保等比例表達(dá)A、B肽鏈，則需A、B肽鏈一起合成，即啟動(dòng)子和終止子在人胰島素A、B鏈編碼序列兩端，在其中間加入一段短肽編碼序列后，序列中間不能出現(xiàn)終止子，所轉(zhuǎn)錄得到的mRNA中間也不能出現(xiàn)終止密碼子，同時(shí)不能改變肽鏈的氨基酸序列和它的功能，綜上，答案選ABCD。(3)在重組表達(dá)載體中，SacⅠ和XbaⅠ限制酶切位點(diǎn)分別有2個(gè)和1個(gè)，當(dāng)將重組表達(dá)載體用SacⅠ和XbaⅠ限制酶充分酶切后，會(huì)形成3個(gè)缺口，得到3種不同的DNA片段。(4)乳酸菌屬于原核細(xì)胞，其細(xì)胞壁上的信號(hào)肽在核糖體上合成后，到細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中加工，再將其運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞膜上，進(jìn)而轉(zhuǎn)移到細(xì)胞壁。(5)人胰島素抗原能引起小鼠的特異性免疫，在特異性免疫過(guò)程中，B細(xì)胞和T細(xì)胞能特異性識(shí)別抗原，而吞噬細(xì)胞能識(shí)別抗原，但不是特異性識(shí)別，漿細(xì)胞不能識(shí)別抗原。2．(2020·山東卷，25)水稻胚乳中含直鏈淀粉和支鏈淀粉，直鏈淀粉所占比例越小糯性越強(qiáng)?？蒲腥藛T將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列轉(zhuǎn)入水稻，實(shí)現(xiàn)了對(duì)直鏈淀粉合成酶基因(Wx基因)啟動(dòng)子序列的定點(diǎn)編輯，從而獲得了3個(gè)突變品系。(1)將能表達(dá)出基因編輯系統(tǒng)的DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時(shí)，所需的酶是__________________________________，重組載體進(jìn)入水稻細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為_(kāi)_______。(2)根據(jù)啟動(dòng)子的作用推測(cè)，Wx基因啟動(dòng)子序列的改變影響了____________________________________，從而改變了Wx基因的轉(zhuǎn)錄水平。與野生型水稻相比，3個(gè)突變品系中Wx基因控制合成的直鏈淀粉合成酶的氨基酸序列__________(填：發(fā)生或不發(fā)生)改變，原因是____________________________________________。限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶

轉(zhuǎn)化

RNA聚合酶與啟動(dòng)子的識(shí)別和結(jié)合

不發(fā)生

編碼直鏈淀粉合成酶的堿基序列中不含啟動(dòng)子

(3)為檢測(cè)啟動(dòng)子變化對(duì)Wx基因表達(dá)的影響，科研人員需要檢測(cè)Wx基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA(WxmRNA)的量。檢測(cè)時(shí)分別提取各品系胚乳中的總RNA，經(jīng)______________________過(guò)程獲得總cDNA。通過(guò)PCR技術(shù)可在總cDNA中專一性的擴(kuò)增出

Wx基因的cDNA，原因是___________________________________________________________________________________。(4)各品系WxmRNA量的檢測(cè)結(jié)果如圖所示，據(jù)圖推測(cè)糯性最強(qiáng)的品系為_(kāi)________，原因是_________________________________________________________________________________________。逆轉(zhuǎn)錄(或：反轉(zhuǎn)錄)

引物是根據(jù)Wx基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的(或：引物能與Wx基因的cDNA特異性結(jié)合)

品系3

品系3的WxmRNA最少，控制合成的直鏈淀粉合成酶最少，直鏈淀粉合成量最少，糯性最強(qiáng)[解析]

(1)將目的基因與Ti質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要限制酶的切割，將目的基因插入載體時(shí)需要DNA連接酶的連接，重組載體進(jìn)入水稻細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程叫做轉(zhuǎn)化。(2)根據(jù)以上分析可知，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn)，如果啟動(dòng)子序列改變將會(huì)影響RNA聚合酶與之結(jié)合和識(shí)別，進(jìn)而影響基因的轉(zhuǎn)錄水平。在真核生物中，編碼蛋白質(zhì)的序列是基因中編碼區(qū)，編碼區(qū)中不包括啟動(dòng)子序列，因此直鏈淀粉合成酶的基因堿基序列中不含有啟動(dòng)子，因此3個(gè)突變品系中Wx基因中控制合成直鏈淀粉酶的氨基酸序列不發(fā)生改變。(3)以mRNA為模板合成cDNA的過(guò)程為逆轉(zhuǎn)錄，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Wx基因的cDNA，需要以Wx基因合成的引物，這樣引物能夠在總cDNA中與Wx基因的cDNA特異性結(jié)合，從而利用PCR擴(kuò)增技術(shù)專一性擴(kuò)增出Wx基因的cDNA。(4)識(shí)圖分析可知，圖中品系3的Wx基因的mRNA的含量最少，那么合成的直鏈淀粉酶最少，直鏈淀粉合成量最少，因此該水稻胚乳中含的直鏈淀粉比例最小，糯性最強(qiáng)。3．(2020·江蘇卷，33)如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡(jiǎn)捷地分析出已知序列兩側(cè)的序列，具體流程如圖(以EcoRI酶切為例)：請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題：(1)步驟I用的EcoRI是一種__________________________酶，它通過(guò)識(shí)別特定的______________切割特定位點(diǎn)。(2)步驟Ⅱ用的DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間的3′—羥基與5′—磷酸間形成______________；PCR循環(huán)中，升溫到95℃是為了獲得______________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________________________________。限制性核酸內(nèi)切(或限制)

核苷酸序列

磷酸二酯鍵

DNA單鏈

以DNA為模板的

DNA鏈的延伸

(4)對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序，經(jīng)分析得到了片段F的完整序列。下列DNA單鏈序列中(虛線處省略了部分核苷酸序列)，結(jié)果正確的是______。A．5′—AACTATGCG－－－－－－－AGCCCTT—3′B．5′—AATTCCATG－－－－－－－－CTGAATT—3′C．5′—GCAATGCGT－－－－－－－TCGGGAA—3′D．5′—TTGATACGC－－－－－－－－CGAGTAC—3′②④

[解析]

(1)EcoRI是一種限制性核酸內(nèi)切酶，它通過(guò)識(shí)別特定的核苷酸序列切割特定的位點(diǎn)。(2)DNA連接酶可催化相鄰核苷酸之間的3′—羥基和5′—磷酸之間形成磷酸二酯鍵；PCR循環(huán)中，升溫到95℃時(shí)，DNA受熱變性后解旋為單鏈；TaqDNA聚合酶是一種耐高溫的依賴于DNA模板的DNA聚合酶，能催化以DNA鏈為模板的DNA鏈的延伸。(3)引物是一小段單鏈DNA，引物5′端的堿基可以與DNA兩條鏈的3′端的堿基進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)，可作為DNA復(fù)制的起始點(diǎn)，子鏈的延伸方向從5′→3′，據(jù)題圖分析，結(jié)合已知序列可知，能與片段F左邊配對(duì)的引物為④，與右邊配對(duì)的引物為②，故步驟Ⅲ選用的PCR引物應(yīng)當(dāng)為②④。(4)對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序，得到片段F的完整序列，因?yàn)槠蜦是被限制酶EcoRI剪切的兩端，它識(shí)別的序列是GAATTC，且在G與A之間切割，所以5′端應(yīng)該是AATTC,3′端是GAATT，故選B。4．(2020·浙江卷，24)下列關(guān)于基因工程的敘述，正確的是

(

)A．若受體大腸桿菌含有構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)用到的限制性核酸內(nèi)切酶，則一定有利于該重組質(zhì)粒進(jìn)入受體并保持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定B．抗除草劑基因轉(zhuǎn)入某抗鹽植物獲得2個(gè)穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)基因品系，抗性鑒定為抗除草劑抗鹽和抗除草劑不抗鹽。表明一定是抗鹽性的改變與抗除草劑基因的轉(zhuǎn)入無(wú)關(guān)C．抗除草劑基因轉(zhuǎn)入某植物獲得轉(zhuǎn)基因植株，其DNA檢測(cè)均含目的基因，抗性鑒定為抗除草劑和不抗除草劑。表明一定是前者表達(dá)了抗性蛋白而后者只表達(dá)抗性基因RNAD．已知不同分子量DNA可分開(kāi)成不同條帶，相同分子量的為一條帶。用某種限制性核酸內(nèi)切酶完全酶切環(huán)狀質(zhì)粒后，出現(xiàn)3條帶。表明該質(zhì)粒上一定至少有3個(gè)被該酶切開(kāi)的位置B

[解析]

若受體大腸桿菌含有構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)用到的限制性核酸內(nèi)切酶，則該酶會(huì)對(duì)進(jìn)入受體的重組質(zhì)粒進(jìn)行切割，不利于其保持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，A錯(cuò)誤；抗除草劑基因轉(zhuǎn)入抗鹽植物，獲得了抗除草劑抗鹽品系和抗除草劑不抗鹽品系，不抗鹽品系的產(chǎn)生可能是轉(zhuǎn)入的抗除草劑基因插入到抗鹽基因內(nèi)，影響其表達(dá)造成，B錯(cuò)誤；轉(zhuǎn)基因植物中均含抗除草劑基因，但存在抗除草劑和不抗除草劑兩種植株，前者表達(dá)了抗性蛋白，后者可能抗除草劑基因未轉(zhuǎn)錄出mRNA，或轉(zhuǎn)錄出的mRNA未能翻譯成蛋白質(zhì)，C錯(cuò)誤；某種限制性內(nèi)切酶完全酶切環(huán)狀質(zhì)粒后，出現(xiàn)3條帶，即3種不同分子量DNA，因此環(huán)狀質(zhì)粒上至少有3個(gè)酶切位點(diǎn)，D正確。故選D。5．(2019·江蘇卷，33)圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因(tetr)和氨芐青霉素抗性基因(ampr)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：圖1平

胸腺嘧啶(T)

DNA連接

(3)為篩選出含有重組質(zhì)粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板進(jìn)行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長(zhǎng)情況如下表(“＋”代表生長(zhǎng)，“－”代表不生長(zhǎng))。根據(jù)表中結(jié)果判斷，應(yīng)選擇的菌落是______(填表中字母)類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別是___________________、______________________。B

菌落類型平板類型

ABC無(wú)抗生素＋＋＋氨芐青霉素＋＋－四環(huán)素＋－－氨芐青霉素＋四環(huán)素＋－－A類菌落含有

P0

C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒

(4)為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，PCR鑒定時(shí)應(yīng)選擇的一對(duì)引物是________。某學(xué)生嘗試用圖中另外一對(duì)引物從某一菌落的質(zhì)粒中擴(kuò)增出了400bp片段，原因是____________________。圖2

乙丙

目的基因反向連接

[解析]

(1)從圖中可以看出，EcoRⅤ酶切出來(lái)的載體質(zhì)粒為平末端。(2)從圖中可以看出，目的基因的兩端各有一個(gè)游離的腺嘌呤脫氧核苷酸，由于載體P1為平末端，所以載體P1的兩端應(yīng)該各添加一個(gè)胸腺嘧啶脫氧核苷酸，這樣在DNA連接酶的作用下才能把目的基因和載體P1連接起來(lái)。(3)由題意可知，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)四環(huán)素抗性基因被破壞，所以導(dǎo)入目的基因的菌落只能在沒(méi)有抗生素或含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中存活，應(yīng)該選B類菌落。A類菌落能在表中條件下存活，說(shuō)明導(dǎo)入的是P0質(zhì)粒。C類菌落只能在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中存活，說(shuō)明C類菌落沒(méi)有導(dǎo)入質(zhì)粒。(4)據(jù)圖分析，目的基因的外側(cè)鏈只能用丙作引物，內(nèi)側(cè)鏈可用甲、乙作引物，若選用另一對(duì)甲、乙作引物，會(huì)出現(xiàn)目的基因反接擴(kuò)增出的DNA片段為400bp，則正好是目的基因反向連接后，外側(cè)鏈用乙作引物，內(nèi)側(cè)鏈用甲作引物擴(kuò)增出的片段。6．(2018·全國(guó)卷Ⅰ，38)回答下列問(wèn)題：(1)博耶(H．Boyer)和科恩(S．Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。該研究除證明了質(zhì)?？梢宰鳛檩d體外，還證明了__________________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。體外重組的質(zhì)粒可以進(jìn)入受體細(xì)胞；真核生物

基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)

(2)體外重組的質(zhì)粒可通過(guò)Ca2＋參與的_______方法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞；而體外重組的噬菌體DNA通常需與____________________________組裝成完整噬菌體后，才能通過(guò)侵染的方法將重組的噬菌體DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞。在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)胞中，可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的是________。(3)真核生物基因(目的基因)在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會(huì)被降解。為防止蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用________________的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，在蛋白質(zhì)純化的過(guò)程中應(yīng)添加__________的抑制劑。轉(zhuǎn)化

細(xì)菌

蛋白酶缺陷型

蛋白酶

外殼蛋白(或答噬菌體蛋白)

[解析]

(1)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌中，該過(guò)程利用的技術(shù)是基因工程。該研究除了證明質(zhì)?？勺鳛檩d體外，還證明了體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞，真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)等。(2)重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞可采用Ca2＋參與的轉(zhuǎn)化方法；體外重組噬菌體要通過(guò)將體外重組的噬菌體DNA和外殼蛋白(或噬菌體蛋白)進(jìn)行組裝獲得；因?yàn)槭删w是專門寄生在細(xì)菌中的病毒，所以宿主細(xì)胞選用細(xì)菌。(3)為防止蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用蛋白酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細(xì)胞；在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中，為防止目的蛋白質(zhì)被降解，需要添加蛋白酶的抑制劑。7．(2018·全國(guó)卷Ⅱ，38)某種熒光蛋白(GFP)在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會(huì)發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測(cè)細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某種病毒的外殼蛋白(L1)基因連接在GFP基因的5′末端，獲得了L1－GFP融合基因(簡(jiǎn)稱為甲)，并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如下，圖中E1～E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。回答下列問(wèn)題：(1)據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P0時(shí)，使用了兩種限制酶，這兩種酶是____________。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證____________，也是為了保證____________________。(2)將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說(shuō)明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了________和________過(guò)程。E1和E4

甲的完整

甲與載體正確連接

轉(zhuǎn)錄

翻譯

(3)為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的__________移入牛的________________中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。(4)為了檢測(cè)甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定，在鑒定時(shí)應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的____________(填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”)作為PCR模板。細(xì)胞核

去核卵母細(xì)胞

核DNA

[解析]

(1)由題意可知，L1基因和GFP基因合成了L1－GFP融合基因(簡(jiǎn)稱為甲)，題圖中顯示了四個(gè)酶切位點(diǎn)，當(dāng)將L1－GFP融合基因插入質(zhì)粒P0時(shí)，可用E1和E4限制酶進(jìn)行酶切，用這兩種酶進(jìn)行酶切不會(huì)破壞甲的完整性，同時(shí)能保證甲按照正確的方向與載體連接。(2)若在牛皮膚細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說(shuō)明L1－GFP融合基因得到表達(dá)，即目的基因在受體細(xì)胞中通過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯合成了熒光蛋白。(3)為了獲得含有甲的牛，可將含有目的基因的細(xì)胞的細(xì)胞核移入牛的去核卵母細(xì)胞中，然后進(jìn)行體外培養(yǎng)、胚胎移植等。(4)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，可以檢測(cè)目的基因是否存在。PCR擴(kuò)增的模板是核DNA。8．(2018·江蘇，32)為生產(chǎn)具有特定性能的α－淀粉酶，研究人員從某種海洋細(xì)菌中克隆了α－淀粉酶基因(1656個(gè)堿基對(duì))，利用基因工程大量制備α－淀粉酶，實(shí)驗(yàn)流程見(jiàn)下圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增α－淀粉酶基因前，需先獲得細(xì)菌的________________。(2)為了便于擴(kuò)增的DNA片段與表達(dá)載體連接，需在引物的_______端加上限制性酶切位點(diǎn)，且常在兩條引物上設(shè)計(jì)加入不同的限制性酶切位點(diǎn)，主要目的是____________________________________________。(3)進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)的溫度和時(shí)間需根據(jù)具體情況進(jìn)行設(shè)定，下列選項(xiàng)中______的設(shè)定與引物有關(guān)，______的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度有關(guān)。(填序號(hào))①變性溫度②退火溫度③延伸溫度④變性時(shí)間⑤退火時(shí)間⑥延伸時(shí)間基因組DNA

5′

使DNA片段能定向插入表