ELISA檢測(cè)乙肝抗體HBsAb

ELISA檢測(cè)乙肝抗體第三小組肝表面抗體ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶標(biāo)儀的使用方法。Y細(xì)胞1細(xì)胞2標(biāo)記物分類(lèi)熒光素放色性核素酶用酶標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)?？捎妹笜?biāo)測(cè)定儀測(cè)定光密度（OD）來(lái)反應(yīng)抗原或抗體含量，靈敏度可達(dá)到ng-pg/ml水平。Y酶酶具有高效催化性：可以加快化學(xué)反應(yīng)的速度；在反應(yīng)前后，沒(méi)有質(zhì)和量的改變；微量的酶便可發(fā)揮巨大的催化作用。DH2+H2O2D+2H2O酶無(wú)色有色酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶免疫組化法用于檢測(cè)可溶性抗原或抗體用于檢測(cè)組織中或細(xì)胞表面的抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)-ELISA

實(shí)驗(yàn)原理

抗原或抗體吸附到固相載體表面后，以及抗原抗體與酶連接后，仍保持免疫活性和酶活性，當(dāng)酶遇到相應(yīng)底物時(shí)，在酶的催化下引起底物水解顯色。產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；（3）酶反應(yīng)的底物。ELISA的類(lèi)型

間接法（測(cè)抗體）雙抗體夾心法（測(cè)大分子抗原）競(jìng)爭(zhēng)法（測(cè)小分子抗原）

間接法將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原；加酶標(biāo)抗體：與固相抗原抗體復(fù)合物中的抗體結(jié)合，使該抗體問(wèn)接地標(biāo)記上酶；加受檢血清：其特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法。

雙抗體夾心法特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體；標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合成固相抗原復(fù)合物；加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合，酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成正相關(guān)；酶標(biāo)抗體血清樣品或參比品底物加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物酶標(biāo)儀測(cè)定OD值終止液根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。競(jìng)爭(zhēng)法

用于抗原和半抗原的定量測(cè)定，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和待測(cè)抗原的混合液，而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測(cè)定的未知抗原的量。

這種方法所測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位就可，因此，對(duì)小分子抗原如激素和藥物之類(lèi)的測(cè)定常用此法。該法的優(yōu)點(diǎn)是快，因?yàn)橹挥幸粋€(gè)保溫洗滌過(guò)程，但需用較多量的酶標(biāo)記抗原。操作步驟1.從冰箱取出試劑盒，室溫平衡30分鐘。2.按如下方式加待測(cè)血清，每孔1滴。待2待3待1陽(yáng)性陰性空白3.每孔加酶結(jié)合物1滴（孔上方懸空滴加，無(wú)氣泡），混勻，空白孔不加，置37度溫箱30分鐘。4.取出反應(yīng)板，棄液，拍干。5.每孔注滿洗滌液，（不要溢出）靜置5秒后棄液，拍干，重復(fù)洗滌5次，拍干。6.每孔加顯色劑A和B各1滴，置37度溫箱15分鐘。7.每孔加終止液1滴混勻，觀察結(jié)果。結(jié)果觀察結(jié)果觀察乙型肝炎病毒采用ELISA檢測(cè)法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、試劑成本低、環(huán)保和適用于大批量人群抗原、抗體篩查等優(yōu)點(diǎn),目前在國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室被廣泛使用。缺點(diǎn)易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。酶標(biāo)儀洗板機(jī)

排槍加樣酶標(biāo)儀乙肝病毒（hepatitisBvirus,HBV）抗原,抗體:1、表面Ag（HBsAg）HBsAb2、核心抗原（HBcAg）HBcAb3、e抗原（HBeAg）HBeAb兩對(duì)半：HBsAgHBsAbHBcAbHBeAgHBeAb

HBV-Ag、Ab檢測(cè)結(jié)果臨床分析HBsAgHBeAgHBsAbHBcAbHBeAb+-

-

-

-

HBV感染/無(wú)癥狀攜帶者+

+-

-

-

急性/慢性乙肝/無(wú)癥狀攜帶者++-

-

+急性/慢性乙肝

（傳染性強(qiáng)，大三陽(yáng)）+-

-

+

+

急性感染趨向恢復(fù)（小三陽(yáng)）-

-+

+

+

既往感染恢復(fù)期--+

+

-

既往感染恢復(fù)期--

-

-