多花木藍鹽脅迫的生理響應(yīng)試驗方案

多花木藍鹽脅迫的生理響應(yīng)試驗方案材料和樣品：多花木蘭種子、NaCl、完全培育液〔硝酸鈣1克、磷酸二氫0.25克、氯化鉀或硝酸鉀0.25、蒸餾水。溶液培育皿設(shè)置：設(shè)置5組不同培育條件，選擇飽滿、均勻、外觀良好的種子，放入溶液培育皿中，每皿30粒，分別參加一樣量的完全培育液及6ml不同NaCl〔濃度梯度：0g/L、2g/、4g/、8g/、12g/1、3、4、5，1335項指標。一、多花木藍幼苗生長特性指標測定生長指標測定高、莖粗、最大側(cè)根長。根系活力的測定：TTC法材料、設(shè)備儀器及試劑〔一〕材料：水培的多花木藍根系。〔二〕儀器設(shè)備：分光光度計；分析天平〔感量0.1mg；電子頂載天平〔感量0.150ml；100ml10ml；10ml；10ml；10ml、1000ml?！踩?〕乙酸乙酯〔分析純2〕次硫酸鈉Na2S2O43〕1%TTCTTC1.0g，100ml，用時稀釋至4〕磷酸緩沖液1/15molL-1pH751molL-1量筒取比重1.84的濃硫酸55ml，500ml蒸餾水的燒杯中，冷1000ml；6〕0.4mol·L-14.72g，溶于水中，100ml三、試驗步驟TTC0.4%TTC0.2ml10ml25μg、50μg、100μg、150μg、200μg標準比色系列，以空白作參比，在485nm波長下測定吸光度，繪制標準曲線。11、12、13，21、22、、32、33，41、42、43，51、52、53，10ml0.4%TTC10ml，37℃下暗保1～3h，此后參加1mol·L-12ml，以停頓反響〔5，先加硫酸，再加根樣品，其他操作同上。3～4ml和少量石英砂一起在研缽內(nèi)磨碎，以提出甲腙。紅色提取液移入試管，并用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌二、三次，皆485nm以空白試驗作參比測出吸光度，查標準曲線，即可求出四氮唑復(fù)原量。四、結(jié)果計算〔mg.g-1〔h〕葉綠素含量測定：分光光度法材料、儀器設(shè)備及試劑〔一〕材料：穎的多花木藍葉片?！捕硟x器設(shè)備：1.分光光度計；2.電子頂載天平〔0.01g；3.研缽；4.5.小漏斗；6.定量濾紙；7.吸水紙；8.擦境紙；9.滴管?！踩吃噭?6％乙醇〔80％丙酮三、試驗步驟取穎多花木藍葉片，擦凈組織外表污物，剪碎〔去掉中脈，混勻。分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣2～3ml9510ml，連續(xù)研磨至組織變白。靜置3～5min。25ml起倒入漏斗中。25ml，搖勻。95％乙醇為空白，在波長、649nm四、試驗結(jié)果計算：將測定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649Cb=24.96A649－7.32A665ab〔C、Cb：mg/L素的濃度。最終依據(jù)下式可進一步求出植物組織中葉綠素的含量：干重。二、多花木藍幼苗生理指標測定超氧化物歧化酶SOD測定：氮藍四唑(NBT)比色法材料、儀器設(shè)備及試劑〔一〕材料：多花木藍幼苗的葉片〔二〕儀器設(shè)備：1.高速臺式離心機；2.分光光度計；3.微量進樣器；4.熒光燈〔4000Lx；5.試管或指形管數(shù)支?！踩?.0.05mol/L〔pH7.82.130mmol/L避光保存；4.100μmol/LEDTANa20.03721gEDTA－Na21000ml5.20μmol/L1000ml試驗步驟5ml。1.5～2ml1000rpm20min，SOD5ml〔要求透亮度好2管，按下表參加各溶液試劑〔酶〕用量/ml終濃度〔比色時〕0.05mol/L1.5130mmol/LMet0.313mmol/Lmol/LNBT0.375μmol/L100μmol/LEDTA－Na2液0.310μmol/L20μmol/L核黃素0.32.0μmol/L酶液0.052蒸餾水0.25總體積3.04000Lx20min〔要求各管受光狀況全都，溫度高時間縮短，低時延長。SOD其它各管的吸光度。結(jié)果計算50％為一個酶活性單位表示，按下式SODSOD＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt)AckAEVVtmlWgmgg丙二醛(MDA)含量測定:硫代巴比妥酸法材料、儀器設(shè)備及試劑試驗材料：多花木藍幼苗的葉片儀器：分光光度計，研缽，剪刀，恒溫水浴，試管20mL×4，離心機。試劑：5%三氯醋酸；0.5%硫代巴比妥酸〔5%三氯醋酸溶解定容；pH7.8。試驗步驟3~50.5cm，混勻。2mL0.05mol·L-1磷酸緩沖液，研磨成勻漿。將勻漿轉(zhuǎn)移到試管中，再用3mL0.05mol·L-15mL0.5%硫代巴比妥酸溶液，搖勻。將試管放入沸水浴中煮沸10min〔時。到時間后，馬上將試管取出并放入冷水浴中。待試管內(nèi)溶液冷卻后，3000×g15min，取上清液并量其體積。以0.5532nm、600nm450nm3．計算含量MDmml-F=6.45D532

D600

0.559D450

VtVWtsVt〔mLVs〔mlFW〔g。葉綠素含量測定:丙酮比色法葉片細胞電導(dǎo)率：將葉片樣本在蒸餾水中浸泡8-10小時，再用電導(dǎo)率儀測定。材料、儀器設(shè)備及試劑〔一〕材料：小麥、女貞葉片;〔二〕儀器設(shè)備：1〕電導(dǎo)儀；2〕天平；3〕溫箱；4〕真空枯燥器；5〕抽氣機；6〕恒溫水浴鍋；7〕注射器。試驗步驟制作標準曲線：如需定量測定透性變化，可用純NaCl配成0、10、20、40、80100μg/ml20～25℃2g。0.5～1h，另一份插入水杯中放在室1cm〔大小以夠容電極為度，并用玻棒或干凈尼龍網(wǎng)壓住，20ml，浸沒葉片。7～8min緩放入空氣，水即被壓入組織中而使葉下沉。5〕將抽過氣的小玻杯取出，放在試驗桌上靜置20min，然后用玻棒輕輕攪動葉片，在20～25℃恒溫下，用電導(dǎo)儀測定溶液電導(dǎo)率。100℃15min，以殺死植物組織，取出放10min，20～25℃恒溫下測其煮沸電導(dǎo)率?！参杼幚砼c比照〕的葉片細胞透性的變化狀況，記錄結(jié)果，并加解釋。損害率=處理電導(dǎo)率/煮沸電導(dǎo)率:80%乙醇提取后用蒽酮比色法測定器材與試劑試驗儀器 分光光度計，恒溫水浴，電子天平，烘箱，刻度試管，漏斗試驗試劑 活性炭，乙醇100mg，80%乙醇配1000mlml100μg1g1000ml〔760ml1.84的濃硫酸用蒸餾水稀釋成1000ml〕溶液中，置于棕色瓶中，當(dāng)日配置使用。試驗材料 植物葉片或種子試驗步驟可溶性糖的提取15min，70℃過夜。干葉片磨碎后稱4ml8080℃水浴中不2ml802，80℃30min，80%10ml，過濾后取濾液測定。繪制標準曲線20ml10min〔水浴重沸后計時625nm密度值，用0線。管號 0123456葡萄糖標準液〔ml〕00.10.20.40.60.81.080%乙醇〔ml〕 1.00.90.80.60.40.20葡萄糖含量〔μg〕 03.1020406080100ml5mg過氧化物酶(POD)活性測定:以愈創(chuàng)木酚作底物,721型可見分光光度計在720nm下測吸光值Cd處理7d的菱葉片；0.1mol/L磷酸緩沖液〔pH6.0，0.1mol/L磷酸緩沖液〔pH7.0〕酚；H2O2。試驗步驟提取酶液：葉片2片〔wgFW〕+pH7.0磷酸緩沖液5mL，研磨，離心4000rpm*10min，上清液即為粗酶液。21mol/L磷酸緩沖液〔pH6.0〕50ml+28uL愈創(chuàng)木酚+19uLH2O2(30%)。一般臨用前配制，冰箱內(nèi)短期保存。3.+0.2mL3mL0.2mLOD4703010SOD>1.000計算酶活性選取OD值變化較均勻的一段數(shù)據(jù)，代入公式計算；OD0.011〔U酶活力=活力單位(U)/w(gFW)W=W〔gFW)*V(mL)/V游離脯氨酸(Proline)含量測定:茚三酮比色法一、原理520nm〕脯氨酸的含量。二、材料、儀器設(shè)備及試劑〔一〕材料：待測植物〔水稻、小麥、玉米、高粱、大豆等〕葉片?！硟x器設(shè)備：1.722；2.研缽；3.100ml；4.容量瓶；5.6.7.8.9.10.11.；12.濾紙；13剪刀。30ml20ml6mol/L磷酸中，攪拌加熱〔70℃〕溶解，貯于冰箱中；2.3％磺基水楊酸：3g100ml；3.冰醋酸；4.甲苯。三、試驗步驟標準曲線的繪制〔1〕25mg250ml50ml0.5，1.0，1.5，2.0，2.53.0ml，用蒸餾水定容至刻度，2ml2ml2ml每管在沸水浴中加熱30min?！?〕冷卻后各試管準確參加4ml甲苯，振蕩30S，靜置片刻，使色素全部轉(zhuǎn)至甲苯溶液?！?〕用注射器輕輕吸取各管上層脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液為空白比照，于520nm〔6〕標準曲線的繪制：先求出吸光度值〔Y〕依脯氨酸濃度〔X〕而變的回歸方程式，再按回歸方程式繪制標準曲線，計算2ml測定液中脯氨酸的含量〔μg/2ml〕。樣品的測定〔1〕脯氨酸的提取：準確稱取不同處理的待測植物葉片各0.5g，分別置大管中，然后向各管分別參加5ml3％的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中提10min，〔提取過程中要常常搖動〕，冷