血型鑒定常見的疑難問題分析和相關(guān)處理

血型鑒定常見的疑難問題分析和相關(guān)處理概述

隨著輸血醫(yī)學(xué)的發(fā)展，輸血安全問題日益引起各方面的關(guān)注，輸血安全主要體現(xiàn)在兩方面內(nèi)容，一是經(jīng)血傳播疾病問題，二是血液免疫學(xué)方面的問題即血型血清方面的問題。第2頁,共52頁，2024年2月25日，星期天概述血型血清學(xué)不同于一般的臨床醫(yī)學(xué)檢驗，有其自身特點。一般臨床醫(yī)學(xué)檢驗的工作流程十分明了，即接受臨床醫(yī)生的申請，按各項檢驗的操作規(guī)程完成其申請內(nèi)容并反饋結(jié)果。而血型血清學(xué)方面的檢查則與此有很大的不同，臨床醫(yī)生及各醫(yī)院輸血科向血站和血液中心血型參比實驗室提出的檢測申請不外有以下幾種情況:第3頁,共52頁，2024年2月25日，星期天血型參比實驗室涉及的檢測內(nèi)容血型鑒定困難交叉配血困難輸血反應(yīng)原因分析其它：如母嬰血型不合新生兒溶血病檢測、coombs試驗、血小板抗體檢測等。第4頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO血型常規(guī)定型方法玻片法、紙片法

試管法

微量板法

微柱凝集法

第5頁,共52頁，2024年2月25日，星期天疑難血型鑒定常用的輔助實驗吸收試驗放散試驗（常用熱放散）DTT（二硫蘇糖醇）處理自身凝集紅細(xì)胞唾液血型物質(zhì)測定（中和試驗）分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行基因型檢測第6頁,共52頁，2024年2月25日，星期天血型血清學(xué)的工作特點鑒定技術(shù)因不同情況而異，沒有一個固定的格式，因此在試驗過程中隨時分析試驗結(jié)果，選擇最有效的方案(程序)是必要的。血型參比實驗室必須全面分析病歷情況，有選擇的運用相應(yīng)的實驗手段來解決問題，另外在接受檢測申請時，還應(yīng)詳細(xì)了解患者的既往史-性別、年齡、民族、臨床診斷及臨床癥狀和患者的輸血史和用藥史，如女性已婚患者還應(yīng)詢問其妊娠史。這些都對解決問題至關(guān)重要。第7頁,共52頁，2024年2月25日，星期天血型血清學(xué)的工作特點例如：對于白血病患者，應(yīng)考慮到由于疾病原因而引起血型抗原減弱的可能性；對消化系統(tǒng)的疾病的患者應(yīng)考慮到由于產(chǎn)生“類B物質(zhì)”而導(dǎo)致血型鑒定錯誤的可能性；對于多次輸血的患者應(yīng)考慮其體內(nèi)產(chǎn)生免疫性抗體的可能性，等等。第8頁,共52頁，2024年2月25日，星期天

疑難血型鑒定共同特點:正反定型不。第9頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO血型正反定型不符及其原因

1.技術(shù)和管理錯誤

2.正定型---紅細(xì)胞自身相關(guān)問題

3.反定型---血清自身相關(guān)問題

第10頁,共52頁，2024年2月25日，星期天一、技術(shù)和管理錯誤（1）標(biāo)本或試劑搞錯，造成假陽性或假陰性結(jié)果。（2）器材不潔產(chǎn)生假陽性結(jié)果。（3）試劑污染或失效產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。（4）離心過度或不足，產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。第11頁,共52頁，2024年2月25日，星期天一、技術(shù)和管理錯誤（5）陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識別，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。（6）漏加試劑，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。（7）結(jié)果記錄或判斷錯誤，產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。（8）細(xì)胞與血清比例不適當(dāng)，產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。第12頁,共52頁，2024年2月25日，星期天二、正定型---紅細(xì)胞自身相關(guān)問題

1.紅細(xì)胞致敏直接抗球蛋白試驗陽性的紅細(xì)胞（如自身免疫性溶血性貧血患者的紅細(xì)胞）在含高蛋白介質(zhì)的試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。2.異常基因型

ABO亞型的弱抗原常規(guī)方法難以檢出，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。3.Cis-AB型（順式AB型）

指從父母的一方同時得到A和B基因在一條染色體上，而另一條染色體上是從父母中另一方來的O基因。順式AB細(xì)胞的B抗原較弱，類似B3亞型。

第13頁,共52頁，2024年2月25日，星期天二、正定型---紅細(xì)胞自身相關(guān)問題

4.嵌合體血型體內(nèi)有兩群紅細(xì)胞，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。也可見于ABO不同型的骨髓移植術(shù)后。真正的嵌合體非常少見，可出現(xiàn)于雙胞胎，在胚胎期由于血管的吻合使得2個胎兒的血液發(fā)生混合，2種血液都被機(jī)體認(rèn)做自我，不產(chǎn)生抗體。人工嵌合狀態(tài)可出現(xiàn)于輸血后（如O型紅細(xì)胞輸給A或B型人），骨髓移植術(shù)后，交換輸血及母體、胎兒出血。

第14頁,共52頁，2024年2月25日，星期天二、正定型---紅細(xì)胞自身相關(guān)問題

5.疾病因素導(dǎo)致抗原減弱

常見的如白血病、何杰金病、10號染色體轉(zhuǎn)位、紅細(xì)胞系統(tǒng)極度增生如海洋性貧血等病人ABO血型抗原可受到暫時抑制，抗原減弱檢出困難。紅細(xì)胞ABO抗原減弱與病程有關(guān)，病情緩解時抗原性會恢復(fù)。6.紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象當(dāng)病人感染細(xì)菌或病毒后，病毒或細(xì)菌產(chǎn)生的酶使紅細(xì)胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于正常人血清中都含有抗-T抗體，因此可與正常人血清產(chǎn)生凝集反應(yīng)，正定型試驗假陽性。第15頁,共52頁，2024年2月25日，星期天二、正定型---紅細(xì)胞自身相關(guān)問題

7.獲得性類B

由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。(腸梗阻、結(jié)腸、直腸癌或其他下消化道疾病時腸壁通透性增加，細(xì)菌多糖入血，使A型患者出現(xiàn)獲得性類B現(xiàn)象)8.可溶性血型物質(zhì)增多

胃或胰腺惡性腫瘤患者血清中可能含有過多的可溶性血型物質(zhì)，這些物質(zhì)中和抗A（B）血清從而影響正定型結(jié)果。

第16頁,共52頁，2024年2月25日，星期天二、正定型---紅細(xì)胞自身相關(guān)問題9.紅細(xì)胞發(fā)生自凝現(xiàn)象患者血清中的高效價自身冷凝集素使紅細(xì)胞發(fā)生凝集。10.近期輸血曾異型輸血，使病人血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。第17頁,共52頁，2024年2月25日，星期天三、反定型---血清自身相關(guān)問題1.血漿置換治療后

近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療，影響抗體效價，造成反定型困難。2.異常的血漿蛋白

病人血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例和高濃度的纖維蛋白原等能導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象，多見于如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、何杰金淋巴瘤、嚴(yán)重的肝病等患者。3.高分子聚合物的影響血漿增容劑（葡聚糖、PVP等）也會引起緡錢狀凝集導(dǎo)致假陽性結(jié)果。第18頁,共52頁，2024年2月25日，星期天三、反定型---血清自身相關(guān)問題4.不規(guī)則抗體或自身冷凝集素的存在受檢者血漿中含有ABO血型抗體以外的IgM類不規(guī)則抗體與試劑A、B、O細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng)。5.低丙種球蛋白血癥低丙種球蛋白血癥病例(如白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制劑的患者、先天丙種球蛋白缺乏的患者、免疫缺陷的患者)可能會因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型時不見凝集或僅見弱凝集反應(yīng)。第19頁,共52頁，2024年2月25日，星期天三、反定型---血清自身相關(guān)問題6.年齡因素在未產(chǎn)生自己抗體的嬰兒、由母親被動獲得抗體的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試驗時可出現(xiàn)不見凝集或僅見弱凝集反應(yīng)等異常結(jié)果。7.骨髓移植術(shù)后

ABO不同型骨髓移植患者術(shù)后。8.纖維蛋白原的影響

使用血漿或凝固不完全的血清會形成很小的纖維蛋白凝集包裹的紅細(xì)胞凝塊。第20頁,共52頁，2024年2月25日，星期天小結(jié)（一）一、紅細(xì)胞抗原增多（額外的反應(yīng)）的原因紅細(xì)胞致敏：直接抗人球蛋白試驗陽性。紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象紅細(xì)胞發(fā)生自凝現(xiàn)象獲得性類B其它：近期異型輸血、嵌合體血型二、紅細(xì)胞抗原減弱的原因異?；蛐停ˋBO亞型等）Cis-AB型（順式AB型）疾病因素導(dǎo)致抗原減弱（常見于白血型等血液病患者）可溶性血型物質(zhì)增多（常見于胃或胰腺惡性腫瘤患者）第21頁,共52頁，2024年2月25日，星期天小結(jié)（二）三、血型抗體增多（額外的反應(yīng)）的原因異常的血漿蛋白（串錢狀假凝集）：多見于如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、何杰金淋巴瘤、嚴(yán)重的肝病等患者。高分子聚合物的影響：血漿增容劑（葡聚糖、PVP等）也會引起緡錢狀凝集導(dǎo)致假陽性結(jié)果。不規(guī)則抗體或自身冷凝集素的存在纖維蛋白原的影響第22頁,共52頁，2024年2月25日，星期天小結(jié)（三）四、血型抗體減弱的原因血漿置換治療后低丙種球蛋白血癥年齡因素：嬰兒、老年人抗體水平低。骨髓移植術(shù)后第23頁,共52頁，2024年2月25日，星期天正反定型不符一般處理程序

一、詢問、查閱病史患者的年齡患者的病史患者的近期輸血史患者的近期用藥史患者是否進(jìn)行了骨髓移植患者以前的血型患者是否進(jìn)行過血漿置換術(shù)

第24頁,共52頁，2024年2月25日，星期天正反定型不符一般處理程序

二、使用試管法重做試驗并判斷可能的原因

試管法定型的優(yōu)點

1.可以反復(fù)離心看結(jié)果。

2.可以隨意延長抗原抗體反應(yīng)時間，可以改變反應(yīng)溫度（4℃、37℃孵育），有利于弱抗原、抗體的檢出或排除冷凝集素的干擾。

3.可以觀察紅細(xì)胞混合外觀現(xiàn)象。

4.可以觀察紅細(xì)胞溶血現(xiàn)象。

第25頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO定型常見問題的解決方法

ABO亞型*正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H

*反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身對照*正反定型在不同溫度下反應(yīng)并比較凝集強(qiáng)度的變化*吸收放散試驗

*唾液血型物質(zhì)檢測

*有條件者可作家系調(diào)查或PCR檢測血型基因

第26頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第27頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO定型常見問題的解決方法

A、B抗原減弱

*延長孵育時間、4℃孵育

*酶處理紅細(xì)胞

*吸收放散試驗

*唾液血型物質(zhì)檢測

*既往血型調(diào)查第28頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO定型常見問題的解決方法

抗體減弱

*延長孵育時間、4℃孵育

*酶處理試劑紅細(xì)胞

*既往血型調(diào)查*免疫球蛋白水平測定第29頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO定型常見問題的解決方法

冷自身抗體

*將血清和紅細(xì)胞分別在37孵育后再混合

*用37℃溫鹽水洗滌紅細(xì)胞、45℃熱放散3分鐘

*巰基試劑(DTT)處理紅細(xì)胞

*自身吸收去除血清中的自身冷抗體第30頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO定型常見問題的解決方法

室溫反應(yīng)的同種抗體

*用譜細(xì)胞做抗體鑒定

*選擇沒有相應(yīng)抗原的A、B細(xì)胞做反定型

第31頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO定型常見問題的解決方法

獲得性B紅細(xì)胞

*詢問病史

*酸化抗-B血清（pH6.0)

*唾液型物質(zhì)檢測*家系調(diào)查證明沒有遺傳基礎(chǔ)第32頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO定型常見問題的解決方法

混合視野凝集

*ABO亞型：A3、B3亞型等

*ABO不同型輸血（非O型人近期輸入O型血)：詢問近期輸血史、毛細(xì)管離心分離自身紅細(xì)胞等

*ABO不同型骨髓移植術(shù)后

*單合子的相嵌紅細(xì)胞、雙合子交移體紅細(xì)胞第33頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO定型常見問題的解決方法

致敏紅細(xì)胞造成的假陽性

洗滌后的壓積受檢紅細(xì)胞于56℃水浴放散10分鐘，直至直抗試驗陽性結(jié)果明顯減弱或消失，再次洗滌放散后的細(xì)胞用于正定型試驗。第34頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO定型常見問題的解決方法

*緡錢狀凝集：洗滌紅細(xì)胞、鹽水替代試驗

*前帶現(xiàn)象：稀釋血清后再做試驗

第35頁,共52頁，2024年2月25日，星期天

疑難血型舉例

第36頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第37頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第38頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第39頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第40頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第41頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第42頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第43頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第44頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第45頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第46頁,共52頁，2024年2月25日，星期天第47頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO血型結(jié)果解釋與應(yīng)用指導(dǎo)選擇血液。正常表達(dá)可分為：A、B、AB、O。原則上同型輸血，特殊情況采用配合型輸血（以洗滌細(xì)胞為佳)。

患者輸血血型的選擇

患者血型同型輸血配合型輸血AAOBBOABABA、B、OOO無第48頁,共52頁，2024年2月25日，星期天ABO血型結(jié)果解釋與應(yīng)用ABO血型系統(tǒng)特殊表達(dá)的血型

ABO血型亞型：亞型是指屬同一血型抗原，但抗原結(jié)構(gòu)和性能或抗原位點數(shù)有一定差異。如