熒光分光光度法測(cè)定核黃素

熒光分光光度法測(cè)定核黃素主講教師：中山職業(yè)技術(shù)學(xué)院趙冬梅分子熒光分析技術(shù)一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)熒光光度法測(cè)定多維葡萄糖粉中維生素B2的分析原理。2.掌握熒光光度計(jì)的操作技術(shù)。二.

實(shí)驗(yàn)原理維生素B2，又叫核黃素，是橘黃色無(wú)臭的針狀結(jié)晶。維生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有機(jī)溶劑。在中性或酸性溶液中穩(wěn)定，光照易分解，對(duì)熱穩(wěn)定。維生素B2水溶液在430-440nm藍(lán)光或紫外光照射下會(huì)發(fā)生綠色熒光，熒光峰在535nm，在pH6-7的溶液中熒光強(qiáng)度最大，在pH11的堿性溶液中熒光消失。多維葡萄糖中含有維生素B1，C，D2及葡萄糖均不干擾維生素B2的測(cè)定。由于維生素B2在堿性溶液中經(jīng)光線照射，會(huì)發(fā)生光分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，后者的熒光比核黃素的熒光強(qiáng)的多。因此，測(cè)量維生素B2的熒光時(shí)，溶液要控制在酸性范圍內(nèi)，且須在避光條件下進(jìn)行。三.儀器與試劑熒光分光光度計(jì)。10μg/mL維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取10.0mg維生素B2，用熱蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)入1L棕色容量瓶中，冷卻后加蒸餾水至標(biāo)線，搖勻，置于暗處保存。冰乙酸（AR）；多維葡萄糖粉試樣。四.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制于6只50mL容量瓶中，分別加入10μg/mL維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL，再各加入冰乙酸2.0mL，加水至標(biāo)線，搖勻。在970CRT熒光分光光度計(jì)上，用1cm熒光比色皿于激發(fā)波長(zhǎng)440nm，發(fā)射波長(zhǎng)540nm處，測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強(qiáng)度。(2)多維葡萄糖粉中維生素B2的測(cè)定準(zhǔn)確稱取0.15-0.2g多維葡萄糖粉試樣，用少量水溶解后轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，加冰乙酸2mL，搖勻。在相同的測(cè)量條件下，測(cè)量其熒光強(qiáng)度。平行測(cè)定三次五.實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)處理以相對(duì)熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，維生素B2的質(zhì)量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測(cè)試液中維生素