動物實驗基本操作技術

第九章

動物實驗基本操作技術5/11/202415/11/20242動物實驗準備引進動物動物抓取固定動物編號標記給藥途徑和方法動物麻醉體液采集實驗外科技術操作術前準備術中技術術后護理動物處死動物實驗流程5/11/20243動物實驗基本操作技術動物實驗的方法是各種各樣的，如常用模型復制法、切開和分離法、切除和注入法、離體組織器官法等，在不同的研究領域有其不同的目的和應用，但是一些基本的操作技術方法是一樣的。如動物的抓取、固定、標號、脫毛、麻醉、給藥、采血、采尿、處死等，對于實驗研究者來說無論從事哪一類研究項目，都會不同程度的應用這些技術。

5/11/20244一、大、小鼠的抓取固定第一節(jié)實驗動物的抓取與固定5/11/20245固定盒5/11/20246二、豚鼠的抓取固定法5/11/20247三、家兔的抓取固定法5/11/202485/11/20249一、大、小鼠的性別鑒定第二節(jié)

性別鑒定5/11/202410Female

Male

二、兔的性別鑒定5/11/202411一、大、小鼠

1.根據(jù)形態(tài)鑒定日齡（大、小情況基本一樣）第三節(jié)年齡的大致判斷日齡/d外觀形態(tài)特征1仔鼠裸體鮮紅3耳殼露出表皮4臍帶瘢痕脫落5能翻身8能爬行5/11/202412日齡/d外觀形態(tài)特征10能聽到聲音9～11全身被白毛，門齒長出13～15眼皮張開，能跳躍，能抓取東西18以后能自行采食，獨立生活5/11/2024135/11/2024145/11/2024155/11/2024165/11/2024175/11/2024185/11/2024195/11/2024205/11/2024215/11/202422

2.根據(jù)體重鑒定日齡⑴小鼠日齡與體重的對應日齡/d初生51015202530體重/g

1.84.06.011.015.021.021.05/11/202423⑵大鼠日齡與體重的對應日齡/d初生10203040體重/g6～717～2535～5055～90100～150日齡/d50607080體重/g150～210170～240210～270240～3205/11/202424二、豚鼠老年豚鼠：牙齒和趾爪長，被毛稀疏無光澤，眼神呆滯，行動遲緩。年輕豚鼠：牙齒短白，爪短軟，眼睛圓亮，行動敏捷，被毛有光澤，且緊貼身體。同日齡雌性體重略高于雄性。日齡/d初生7203060體重/g60～80100～120150～200170～220240～300日齡/d90120180體重/g330～400400～470520～6005/11/202425三、家兔家兔的門齒和爪隨年齡增長而增長，是年齡鑒別的重要標志。青年兔：門齒潔白，短小，排列整齊；老年兔：門齒暗黃,厚而長,排列不整齊,有破損。1歲家兔趾：紅色與白色長度相等；1歲以下：紅多于白；1歲以上：白多于紅。5/11/202426五、犬 犬的年齡主要以牙齒的生長情況、磨損程度、外形顏色等情況綜合判定。5/11/202427年齡犬齒更換和磨損情況2個月以下僅有乳齒(白、細、尖)2～4個月更換門齒．4～6個月更換犬齒(白，牙尖圓鈍)6～10個月更換臼齒1歲牙長齊，潔白光亮。門齒有尖突2歲下門齒尖突部分磨乎3歲上、下門齒尖突大部分磨平4～5歲上、下門齒開始磨損呈微斜面，并發(fā)黃6～8歲門齒磨成齒根，犬齒發(fā)黃、磨損9～10歲唇部、胡須發(fā)白10歲以上門齒磨損，犬齒不齊全，牙根黃，唇邊胡須全白5/11/202428第四節(jié)

妊娠檢查妊娠診斷(pregnancydiagnosis)：在配種以后能及時掌握雌性動物是否妊娠、妊娠的時間及胎兒和生殖器官的異常情況，采用臨床和實驗室的方法進行檢查。通過妊娠檢查，可以及時地對雌性動物加強護理或再次配種，以保護母體和胎兒的正常發(fā)育，避免胎兒早期死亡和流產及減少繁育時間的損失。5/11/202429外部檢查法摸胎法陰道檢查法直腸檢查法超聲波檢查法孕酮含量測定法青蛙試驗妊娠檢查方法有5/11/202430第五節(jié)

分組與編號動物實驗前對實驗動物進行隨機分組和編號標記一、隨機分組：隨機數(shù)字表（隨機抽樣原理）

（一）

為二組例：設有雄性Wistar大鼠12只，按體重大小依次編為1，2，3，…，12號，試用完全隨機的方法，分為甲、乙兩組。分組方法：隨機點落在是隨機數(shù)字表上第21行第31列的78，則從78開始，由上向下抄12個隨機數(shù)字，如下：5/11/202431隨機數(shù)字：78386957910374566826541隨機數(shù)字的奇數(shù)代表甲組，偶數(shù)代表乙組：動物編號：123456789101112組別：乙乙甲甲甲乙甲甲乙乙甲甲乙組5個，甲組7個，兩組數(shù)字不等繼續(xù)用隨機方法將甲組多余的一只調整給乙組，從上面最后一隨機數(shù)字41，接下去抄一個數(shù)為62，以7除之(因甲組原分配7只)得6，即把原分配在甲組的第6個甲(即11號大鼠)調入乙組。5/11/202432如果甲組多兩個，則接下去抄兩個數(shù)。分別以8，7除之，余數(shù)即指要調入乙組的第幾個甲，余此類推。最后各組的鼠數(shù)就相等了。調整后各組鼠的編號為：組別鼠的編號甲組3457812

乙組126910115/11/202433

(二)為三組：A組、B組、C組分組方法：落點是隨機數(shù)字表第40行17列的08，則從08開始，自左到右抄12個隨機數(shù)字，以3除各隨機數(shù)字，若余數(shù)為l，即該鼠歸A組；余數(shù)為2，歸人B組；余數(shù)為3，歸入C組。動物編號：123456789101112

隨機數(shù)字：082701501529393943796910

除3余數(shù)：201202001101

組別：BCABCBCCAACA

調整組別：B5/11/202434

（三）

每個動物為一組：例：設有A，B，C，D，E，F(xiàn)代表的6只家兔，試用完全隨機法將其每只分為一組。分組方法：從隨機數(shù)字表上用鉛筆任指一點，若為第21行第17列的33，則從33向左抄用6個數(shù)字，然后分別以6，5，4，3，2，l除之。凡除不盡的，即將余數(shù)寫下。

隨機數(shù)字3346952687

除數(shù)654321

余數(shù)311121

隨機排列CABDFE5/11/202435二、編號標記方法實驗動物分組后，為了區(qū)分、觀察并記錄每個個體的反應情況，必須給每只動物進行編號標記。

1．體表顏料著色法一般對短期試驗的白色動物可用顏料涂搽被毛的方法標記。常用的涂染化學藥品有：紅色：0.5％中性紅或品紅溶液；黃色：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸酒精飽和液；咖啡色：2％硝酸銀溶液；黑色：煤焦油酒精溶液。5/11/202436左前腿上部為1，左腰部為2，左后腿為3，頭部為4，背部為5，尾基部為6，右側從前至后依次為7、8、9。用黃色表示個位數(shù)，紅色表示十位數(shù)。5/11/202437

2．個體耳號標記法

3.個體斷趾標記法

4.耳號鉗標記法

5.掛牌法5/11/2024385/11/202439三、實驗動物被毛的去除方法除毛的方法有剪毛、拔毛和脫毛三種。

剪毛：固定動物后，用粗剪刀剪去所需部位的被毛。剪毛時需注意以下幾點：⑴把剪刀貼緊皮膚剪，不可用手提起被毛，以免剪破皮膚；⑵依次剪毛，不要亂剪；⑶剪下的毛集中放在一個容器內，勿遺留在手術野和兔臺周圍，以保證手術野的清潔和防止注射器等夾毛。5/11/202440

拔毛：兔耳緣靜脈注射或取血時以及給大、小白鼠作尾靜脈注射時，需用拇指、食指將局部被毛拔去，以利操作。

脫毛：脫毛系指用化學藥品脫去動物的被毛，適用于無菌手術野的準備以及觀察動物局部皮膚血液循環(huán)和病理變化。5/11/202441

常用脫毛劑的配方：

⑴硫化鈉3g、肥皂粉1g，淀粉7g，加水適量調成糊狀。⑵硫化鈉8g、淀粉7g、糖4g、甘油5g、硼砂1g，加水75ml。⑶硫化鈉8g，溶于100ml水中。以上脫毛劑適用于家兔、大白鼠、小白鼠等小動物的脫毛。⑷硫化鈉10g、生石灰15g，溶于100ml水此配方適用于狗等大動物的脫毛。

5/11/2024425/11/2024435/11/2024445/11/202445第六節(jié)

常規(guī)采血方法

一、大、小鼠的采血方法

1．頸靜脈或頸動脈采血

2．股靜脈或股動脈采血

3．心臟采血

4．尾部采血

5．眼眶采血

6．斷頭取血5/11/202446眼窩靜脈叢采血尾部采血5/11/202447心臟采血5/11/2024485/11/2024495/11/202450二、豚鼠的采血方法

1．耳緣剪口采血

2．心臟采血方法同大、小鼠。

3．股動脈采血方法同大、小鼠。

4．后肢背中足靜脈采血5/11/2024515/11/202452三、家兔的采血方法

1.心臟采血

2.耳中央動脈采血

3.耳靜脈采血

4.頸總動脈5/11/2024535/11/202454四、狗、貓的采血方法

1．后肢外側跗外靜脈、內側隱靜脈、前肢內側皮下頭靜脈采血

2．股動脈采血

3.心臟采血同大、小鼠心臟采血。

4．耳緣靜脈采血同兔耳緣靜脈采血。5/11/202455采血方法的選擇，決定于實驗目的所需血量以及動物種類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細胞計數(shù)、血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細血管的血。當需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時，若需反復多次，應自遠離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。而研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動、靜脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、Cl-離子濃度，必須采取動脈血液。5/11/2024561）采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃為宜；2）采血用具有采用部位一般需要進行消毒；3）采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；4）若需抗凝全血，在注射器或試管內需預先加入抗凝劑。采血時要注意5/11/202457部位

動物種類a.尾靜脈大鼠、小鼠b.耳緣靜脈兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊c.眼底靜脈叢兔、大鼠、小鼠１．取少量血5/11/202458部位動物種類ａ．后肢外側皮下小隱靜脈狗、猴、貓ｂ．前肢內側皮下頭靜脈狗、猴、貓ｃ．耳中央動脈兔ｄ．頸靜脈狗、貓、兔ｅ．心臟豚鼠、大鼠、小鼠ｆ．斷頭大鼠、小鼠２．取中量血5/11/202459部位

動物種類ａ．股動脈、頸動脈狗、猴、貓、兔ｂ．心臟狗、猴、貓、兔ｃ．頸靜脈馬、牛、山羊、綿羊ｄ．摘眼球大鼠、小鼠３．取大量血5/11/202460動物種類最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040狼狗100500獵狗50200猴15604.最大安全采血量與最小致死采血量5/11/202461第七節(jié)麻醉方法一、實驗動物的麻醉方法全身麻醉法：吸入法，注射法局部麻醉法：浸潤麻醉，表面麻醉5/11/202462（一）全身麻醉法1、吸入法麻醉藥：乙醚氯仿三氟乙烷5/11/2024632、注射法靜脈注射、肌肉注射、腹腔注射麻醉藥：巴比妥類藥物、氯胺酮、烏拉坦、水合氯醛（一）全身麻醉法5/11/202464（二）局部麻醉法注射部位：皮膚、肌下組織、深層組織

1%鹽酸普魯卡因局部浸潤麻醉

0.02～2％鹽酸可卡因表面麻醉5/11/202465麻醉藥物應用原則：依據(jù)動物體重計算麻醉藥物的劑量；依據(jù)動物生命體征變化控制給藥速度；掌握寧少勿多、分階段給藥的方式；麻醉時需注意保溫。針對不同的動物，選擇不同的麻醉藥物、實施不同的麻醉方法。5/11/202466麻醉具體操作：家兔全身麻醉麻醉劑：3%戊巴比妥鈉，1ml/kg（30mg/Kg）前1/2快速推入，使動物能順利、快速地渡過興奮期；后1/2速度宜慢，且邊注射邊注意觀察動物的生命體征變化，當確定已達到麻醉效果時，即停止給藥，不必急于將剩余的麻醉藥物全部推入。給藥方法：耳緣靜脈注射5/11/202467麻醉成功標志角膜反射遲鈍或消失肢體肌肉松弛疼痛反射消失呼吸變深變慢

5/11/202468第八節(jié)

給藥途徑與方法注射法分為：皮下注射、皮內注射、肌肉注射腹腔注射、靜脈注射腦膜下注射、腦內注射、胸腔內注射、腰椎內注射、關節(jié)腔注射和心內注射投入法經消化道投入：口腔、胃腔或腸管經呼吸道投入：鼻腔或氣管5/11/202469（一）皮下注射注射時以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號針頭的注射器刺入皮下。注射部位：狗、貓大腿外側兔背部/耳根部豚鼠后大腿內側/小腹部；大白鼠側下腹部（二）皮內注射局部脫毛——消毒——繃緊皮膚——30度進針挑起針頭稍刺入可注射——皮膚表面鼓起一小皮丘。5/11/2024705/11/202471

（三）肌肉注射選肌肉發(fā)達，無大血管通過的部位，一般多選臀部5/11/202472（四）腹腔注射用大、小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推

0.3～0.5cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內臟，可使動物處于頭低位，使內臟移向上腹。若實驗動物為家兔，進針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。5/11/2024735/11/202474（五）靜脈注射——注射時盡量使血管充盈

1．兔：兔耳緣靜脈

先拔毛，手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈固定：左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠端，無名指及小指墊在下面進針：6號針頭從靜脈的遠端進針，移動拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入結束：然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻5/11/2024755/11/2024762．小白鼠和大白鼠——尾靜脈注射固定動物（鼠筒或燒杯），露出尾巴，45～50℃溫水浸潤半分鐘或酒精擦拭，血管充盈，表皮角質軟化固定：以左手食指和中指捏住鼠尾，無名指從下面托起，以大拇指和小指夾住尾巴的末梢注射：進針，先緩注少量藥液，無阻力3．狗——前肢內側皮下頭靜脈、后肢小隱靜脈側臥固定，剪毛，用膠皮帶扎緊靜脈近端，從遠端進針，有回血后，松開綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。5/11/2024775/11/202478注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5靜脈0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～10幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）5/11/202479動物種類體重（g）最大容積（ml）小鼠>301.025-300.820-240.5大鼠>3008.0250-3006.0200-2494.0-5.0100-1993.0豚鼠>3006.0250-3004.0-5.0家兔>35002002500-35001502000-2400100貓>3000100-1502500-300050-80犬10,000-15,000200-500（六）經口給藥多用灌胃法常用動物一次灌胃能耐受的最大容積見右表5/11/202480

1．小鼠、大鼠（或豚鼠）灌胃針安注射器上固定動物成垂直體位——經口腔緩慢插入灌胃針——針插入時應無阻力——注射液體。灌胃針插入位置：小鼠3～4cm

大鼠或豚鼠4～6cm

灌胃量：小鼠為0.2～1ml，大鼠、豚鼠為1～5ml。5/11/2024815/11/202482

2．狗、兔、貓、猴

固定動物——將擴口器放入動物口中，用繩固定于嘴部——橡皮導管（如導尿管），經擴口器上的小圓孔插入——將藥液灌入。5/11/202483（七）其它途徑給藥1.呼吸道給藥揮發(fā)性類藥物：乙醚、氨氣等2.皮膚給藥藥液涂在皮膚上，經皮膚吸收用于鑒定藥物或毒物經皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等3.脊髓腔內給藥用于椎管麻醉或抽取腦脊液4.腦內給藥用于微生物學研究大小鼠正中額部刺入腦，豚鼠、兔、狗須先用穿顱鋼針穿透顱骨，再刺入腦部5.直腸內給藥用于動物麻醉6.關節(jié)腔內給藥常用于關節(jié)炎的動物模型復制5/11/202484人與各種動物及各種動物之間用藥劑量換算公式：B動物劑量（mg/kg）=W×A動物劑量（mg/kg）5/11/202485第九節(jié)處死方法處死原則：當實驗中途停止或結束時，實驗者應站在實驗動物的立場上以人道的原則去處置動物，原則上不給實驗動物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安樂死。安樂死是指實驗動物在沒有痛苦感覺的情況下死去。實驗動物安樂死方法的選擇取決于動物的種類與研究的課題。5/11/202486一、搗碎腦脊髓用于蛙類二、頸椎脫臼法用于鼠類三、放血法眼眶放血、心臟放血、動脈放血四、斷頭法五、擊打法六、藥物法有毒藥物或麻醉劑七、空氣栓塞法兔、貓等靜脈注入20～40ml

狗靜脈內注入80～150ml5/11/2024875/11/2024885/11/2024895/11/2024905/11/202491動物實驗常用手術器械5/11/202492手術刀握持方法5/11/2024935/11/202494

動物實驗常用方法

動物實驗的方法很多，下面舉一些動物實驗的常用方法：

1、復制動物模型法

采用人工的方法使動物在一定致病因素（機械、化學、生物和物理）作用下，造成動物的組織，器官或全身的一定損傷，復制成與人類疾