高考生物復(fù)習(xí)生物技術(shù)實(shí)踐第39講微生物的培養(yǎng)及應(yīng)用全國(guó)公開課一等獎(jiǎng)百校聯(lián)賽示范課賽課特等獎(jiǎng)?wù)n件

第39講微生物培養(yǎng)及應(yīng)用備考·最新考綱1.微生物分離和培養(yǎng)。2.培養(yǎng)基對(duì)微生物選擇作用。第1頁(yè)考點(diǎn)一微生物試驗(yàn)室培養(yǎng)[自主梳理]1.培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對(duì)

不一樣需求,配制出供其

營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(2)營(yíng)養(yǎng)組成：普通都含有

和無(wú)機(jī)鹽。另外，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)

、氧氣以及

要求。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)繁殖水、碳源、氮源pH特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)固體液體第2頁(yè)2.無(wú)菌技術(shù)(1)關(guān)鍵：預(yù)防

入侵。(2)不一樣對(duì)象無(wú)菌操作方法[連一連]外來(lái)雜菌第3頁(yè)3.大腸桿菌純化培養(yǎng)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(2)純化大腸桿菌方法①純化培養(yǎng)原理：想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到

肉眼可見(jiàn)

，即可取得較純菌種。②純化大腸桿菌關(guān)鍵步驟：

。③慣用微生物接種方法有兩種a.平板劃線法：是經(jīng)過(guò)

在瓊脂固體培養(yǎng)基表面

操作，將聚集菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)稱量滅菌倒平板菌落接種接種環(huán)連續(xù)劃線第4頁(yè)b.

法：是將菌液進(jìn)行一系列

，然后將

菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基表面，進(jìn)行培養(yǎng)。(3)菌種保留方法①對(duì)于頻繁使用菌種，能夠采取

方法。②對(duì)于需要長(zhǎng)久保留菌種，能夠采取

方法。稀釋涂布平板梯度稀釋不一樣稀釋度暫時(shí)保藏甘油管藏第5頁(yè)[跟進(jìn)題組]1.微生物培養(yǎng)過(guò)程中，要十分重視無(wú)菌操作，當(dāng)代生物學(xué)試驗(yàn)中許多方面也要進(jìn)行無(wú)菌操作，預(yù)防雜菌污染，請(qǐng)分析以下操作中錯(cuò)誤是(

)①煮沸消毒能夠殺死微生物營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和部分芽孢

②接種操作要在酒精燈火焰附近進(jìn)行

③無(wú)菌繁殖脫毒苗時(shí)，植物外植體要進(jìn)行消毒

④家庭制作葡萄酒時(shí)要將容器和葡萄進(jìn)行滅菌

⑤培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

⑥加入培養(yǎng)基中指示劑和染料不需要滅菌A.①③ B.②④ C.③⑤ D.④⑥第6頁(yè)解析無(wú)菌操作包含消毒和滅菌。需進(jìn)行消毒處理有植物外植體及操作人員雙手等，需進(jìn)行滅菌有器皿、培養(yǎng)基、添加劑(指示劑或染色劑)等。煮沸能夠殺死微生物營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢，屬于消毒；為預(yù)防空氣中雜菌污染，接種時(shí)要在酒精燈火焰附近進(jìn)行；家庭制作葡萄酒時(shí)所利用微生物是葡萄表面酵母菌，故不能滅菌；培養(yǎng)基常進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。故④⑥操作錯(cuò)誤。答案

D第7頁(yè)2.下列圖甲、乙是微生物接種慣用兩種方法，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題。(1)圖甲是利用________法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用________法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用接種工具分別是________和________；對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒方法依次是________和酒精消毒。(2)接種操作為何一定要在火焰附近進(jìn)行？___________________________________________________。第8頁(yè)(3)下列圖是采取上述接種方法接種后培養(yǎng)效果圖解，其接種方法是________(填“圖甲”或“圖乙”)。答案

(1)平板劃線稀釋涂布平板接種環(huán)涂布器灼燒滅菌(2)火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域(3)圖乙第9頁(yè)1.試驗(yàn)室慣用消毒和滅菌方法項(xiàng)目概念慣用方法應(yīng)用范圍消毒使用較為溫和物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物(不包含芽孢和孢子)煮沸消毒法：在100℃下煮沸5～6min普通物品巴氏消毒法：在70～75℃下煮30min或在80℃下煮15min一些不耐高溫液體，如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等紫外線消毒法：紫外燈照射30min接種室、操作臺(tái)第10頁(yè)滅菌使用強(qiáng)烈理化原因殺死物體內(nèi)外全部微生物(包含芽孢和孢子)灼燒滅菌：酒精燈火焰接種工具滅菌和試管口滅菌干熱滅菌：在160～170℃下滅菌1～2h玻璃器皿、金屬工具滅菌高壓蒸汽滅菌：在壓力為100kPa，溫度為121℃條件下，滅菌15～30min培養(yǎng)基及容器滅菌第11頁(yè)2.兩種純化細(xì)菌方法比較項(xiàng)目?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍平板劃線法能夠觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離不能計(jì)數(shù)適適用于好氧菌稀釋涂布平板法能夠計(jì)數(shù)，能夠觀察菌落特征吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，輕易蔓延適適用于厭氧菌和兼性厭氧菌第12頁(yè)3.平板劃線操作3個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)(1)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行取種，以免溫度太高殺死菌種(2)劃線時(shí)最終一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(3)劃線用力要大小適當(dāng)，預(yù)防用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破第13頁(yè)考點(diǎn)二微生物篩選和計(jì)數(shù)[自主梳理]1.土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)項(xiàng)目詳細(xì)內(nèi)容試驗(yàn)原理(1)能合成細(xì)菌才能分解尿素(2)配制以為唯一氮源培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)細(xì)菌就是能分解尿素細(xì)菌數(shù)量統(tǒng)計(jì)(1)

法(顯微鏡下用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板)(2)間接計(jì)數(shù)法：試驗(yàn)流程土壤取樣→配制土壤溶液和制備培養(yǎng)基→

→涂布平板與培養(yǎng)→菌落

脲酶尿素直接計(jì)數(shù)稀釋涂布平板法系列稀釋計(jì)數(shù)第14頁(yè)2.分解纖維素微生物分離(1)纖維素酶①組成：纖維素酶是一個(gè)

，普通認(rèn)為它最少包含三種組分，即

。②作用復(fù)合酶C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶纖維二糖葡萄糖(2)纖維素分解菌篩選①原理紅色復(fù)合物透明圈第15頁(yè)②篩選方法：

染色法，即經(jīng)過(guò)是否產(chǎn)生

來(lái)篩選纖維素分解菌。③培養(yǎng)基：以

為唯一碳源選擇培養(yǎng)基。④試驗(yàn)流程土壤取樣：富含

環(huán)境↓選擇培養(yǎng)：用

培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌濃度↓

：制備系列稀釋液↓涂布平板：將樣品涂布到

培養(yǎng)基上↓挑選產(chǎn)生

菌落剛果紅透明圈纖維素纖維素選擇培養(yǎng)基梯度稀釋判別纖維素分解菌透明圈第16頁(yè)3.判斷正誤(1)選擇培養(yǎng)基能夠判定某種微生物種類(

)(2)從物理性狀角度看，選擇培養(yǎng)基多屬于固體培養(yǎng)基(

)(3)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)只能采取稀釋涂布平板法，而不能用平板劃線法(

)(4)篩選能分解尿素細(xì)菌所利用培養(yǎng)基中，尿素是唯一氮源(

)(5)分解尿素細(xì)菌在分解尿素時(shí)，能夠?qū)⒛蛩剞D(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基酸堿度降低(

)(6)纖維素是組成植物細(xì)胞壁主要成份在纖維素酶作用下，纖維素能夠水解成葡萄糖(

)答案

(1)×

(2)√

(3)×

(4)√

(5)×

(6)√第17頁(yè)[跟進(jìn)題組]1.苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚微生物。某工廠產(chǎn)生廢水中含有苯酚，為了降解廢水中苯酚，研究人員從土壤中篩選取得了只能降解利用苯酚細(xì)菌菌株，篩選主要步驟如圖所表示，①為土壤樣品。請(qǐng)回答以下問(wèn)題：第18頁(yè)(1)②中培養(yǎng)目標(biāo)菌株選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入________作為碳源，②中不一樣濃度碳源培養(yǎng)基________(A.影響；B.不影響)細(xì)菌數(shù)量，假如要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采取________法。(2)④為對(duì)照，微生物在④中不生長(zhǎng)，在⑤中生長(zhǎng)，④與⑤培養(yǎng)基主要區(qū)分在于___________________________________；使用____________________法能夠在⑥上取得單菌落。采取固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)進(jìn)行倒置培養(yǎng)原因是_______________________________________________________________________。(3)試驗(yàn)過(guò)程中怎樣預(yù)防其它微生物污染？___________________________________________________。第19頁(yè)答案

(1)苯酚A稀釋涂布平板(2)④培養(yǎng)基沒(méi)有加入苯酚作為碳源，⑤培養(yǎng)基加入苯酚作為碳源稀釋涂布平板法或平板劃線預(yù)防冷凝后形成水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基(3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過(guò)程無(wú)菌操作第20頁(yè)2.(·新課標(biāo)全國(guó)卷Ⅰ)植物秸稈中纖維素可被一些微生物分解?；卮鹨韵聠?wèn)題。(1)分解秸稈中纖維素微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成復(fù)合酶，其中葡萄糖苷酶可將________分解成________。(2)在含纖維素培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌菌落為中心________。第21頁(yè)(3)為從富含纖維素土壤中分離取得纖維素分解菌單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成份見(jiàn)下表)：

酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培養(yǎng)基甲＋＋＋＋－＋＋培養(yǎng)基乙＋＋＋－＋＋＋注：“＋”表示有，“－”表示無(wú)。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和判別纖維素分解菌，原因是____________________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和判別纖維素分解菌，原因是____________________________________。第22頁(yè)答案

(1)纖維二糖葡萄糖(2)紅透明圈(3)不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR—纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌第23頁(yè)1.選擇培養(yǎng)基與判別培養(yǎng)基比較種類制備方法原理用途舉例選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入一些化學(xué)物質(zhì)依據(jù)一些微生物對(duì)一些物質(zhì)或環(huán)境條件癖好、抗性而設(shè)計(jì)從眾多微生物中分離所需微生物加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌判別培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品依據(jù)微生物產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生顯著特征改變而設(shè)計(jì)判別不一樣種類微生物伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基能夠判別大腸桿菌第24頁(yè)2.選擇培養(yǎng)基四種常見(jiàn)制備方法或?qū)嵗?5頁(yè)3.分離纖維素分解菌所用兩種培養(yǎng)基比較分離纖維素分解菌試驗(yàn)中先用選擇培養(yǎng)基，再用判別培養(yǎng)基。(1)選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，以纖維素作為碳源和能源微生物能夠正常生長(zhǎng)，而其它絕大多數(shù)微生物不能正常生長(zhǎng)；因培養(yǎng)基中無(wú)凝固劑，為液體培養(yǎng)基，利用液體培養(yǎng)基能使?fàn)I養(yǎng)成份被充分消耗，以增加纖維素分解菌濃度。(2)判別培養(yǎng)基含瓊脂，為固體培養(yǎng)基，細(xì)菌可在培養(yǎng)基上形成肉眼可見(jiàn)菌落。剛果紅染色法應(yīng)用就是判別培養(yǎng)基。第26頁(yè)易錯(cuò)易混防范清零[易錯(cuò)清零]易錯(cuò)點(diǎn)1誤認(rèn)為全部微生物培養(yǎng)基中均需加入“生長(zhǎng)因子”點(diǎn)撥碳源、氮源、水分、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子是微生物生長(zhǎng)必需五大營(yíng)養(yǎng)成份，但大多數(shù)培養(yǎng)基中都含碳源、氮源水分、無(wú)機(jī)鹽四類物質(zhì)，可能不需額外添加“生長(zhǎng)因子(如維生素)”，這是因?yàn)樵S多微生物可自行合成這些生長(zhǎng)因子，而對(duì)那些合成能力有限或不能合成生長(zhǎng)因子微生物(如乳酸菌)，則需在培養(yǎng)基中添加諸如維生素等生長(zhǎng)因子第27頁(yè)易錯(cuò)點(diǎn)2混同兩種“對(duì)照組”與“重復(fù)組”點(diǎn)撥

(1)兩種對(duì)照組作用比較①判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”，需將未接種培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。②判斷選擇培養(yǎng)基“是否含有篩選作用”，需設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。(2)重復(fù)組設(shè)置及作用為排除偶然原因?qū)υ囼?yàn)結(jié)果干擾，在每一稀釋度下宜設(shè)置3個(gè)平板作重復(fù)組，選擇菌落數(shù)均在30～300且數(shù)目相差不大三個(gè)平板，用“平均值”代入計(jì)數(shù)公式給予計(jì)算菌落數(shù)第28頁(yè)易錯(cuò)點(diǎn)3不明確每次劃線操作中“灼燒接種環(huán)”目標(biāo)或誤認(rèn)為劃線結(jié)束后“無(wú)須灼燒接種環(huán)”點(diǎn)撥平板劃線法純化大腸桿菌時(shí)不一樣階段灼燒接種環(huán)目標(biāo)不一樣①第一次操作：殺死接種環(huán)上原有微生物。②每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留菌種，使下次劃線菌種直接起源于上次劃線末端。③劃線結(jié)束后：殺死接種環(huán)上殘余菌種，防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第29頁(yè)易錯(cuò)點(diǎn)4不知道菌落計(jì)數(shù)比實(shí)際值“偏高”還是“偏低”點(diǎn)撥稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中菌落數(shù)目往往比實(shí)際數(shù)目“低”。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到