(高清版)DB43∕T 987-2015 辣椒品種純度鑒定SSR分子標記法_第1頁
(高清版)DB43∕T 987-2015 辣椒品種純度鑒定SSR分子標記法_第2頁
(高清版)DB43∕T 987-2015 辣椒品種純度鑒定SSR分子標記法_第3頁
(高清版)DB43∕T 987-2015 辣椒品種純度鑒定SSR分子標記法_第4頁
(高清版)DB43∕T 987-2015 辣椒品種純度鑒定SSR分子標記法_第5頁
已閱讀5頁，還剩5頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

辣椒品種純度鑒定SSR分子標記法2015-01-23發(fā)布2015-03-23實施I前言 Ⅱ 3.1主要儀器設備 3.2主要試劑 3.3主要耗材 2 24.4銀染、顯影試劑 24.5顯影液 36操作步驟 36.1供試品種樣品制備 3 36.3PCR反應體系和程序 36.4變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 6.5染色和顯色 4 附錄A(資料性附錄)部分SSR引物信息 本標準按照GB/G1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準的某些內容可能涉及專利，本標準的發(fā)布機構不應承擔識別這些專利的責任。本標準由湖南省農業(yè)標準化技術委員會提出并歸口。本標準主要起草單位：湖南省蔬菜研究所。本標準主要起草人：鄭井元、劉峰、鄒學校、張竹青、馬艷青、戴雄澤、李雪峰。1本標準適用于采用SSR分子標記法進行辣椒品種純度鑒定。2原理簡單重復序列(Simplesequencerepeats:S研缽、液氮罐、電子天平、恒溫水浴鍋、高速臺式離心機(14000r/min)、紫外分光光度計、高數碼相機、膠片觀察燈、冰箱(4℃和-20℃)。3.2主要試劑4試劑配制4.1DNA提取試劑4.1.10.5mol/LEDTA(乙二胺四乙酸二鈉鹽)(pH8.0)溶液稱EDTA186.1g,加入已有800mL雙蒸水的燒杯中，用氫氧化鈉調節(jié)pH值至8.0,補雙蒸水2稱121.1gTris加入含有800mL雙蒸水的燒杯中，用鹽酸調節(jié)pH值至8.0,補雙蒸水定容取160mL三氯甲烷，8mL異戊醇和32mL無水乙醇加在一起混勻，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。稱取溴酚藍0.25g,二甲苯青0.25g,加98mL甲酰胺溶液和2mL0.5mol/LEDTA(pH8.0)溶3后10,000rpm離心5min;將上清仔細移至另一2mL離心管，加入1倍體積異丙醇，混勻，室溫靜500μL60℃預熱的雙蒸水，再加入5μLRNaseA(10μg/μL),37℃溫浴10min,最后加入1/10序：94℃5min;94℃30s,58℃30s,72℃30s,35個循環(huán)后72℃延伸5min,擴增完后4℃保46.4.3封膠6.4.5灌膠每個PCR產物中加5μL6×加樣緩沖液，混勻，每個加樣孔加入(3~4)μL樣品。180V恒溫電6.5.1固定6.5.2染色倒掉蒸餾水，加入200mL染色液，在30r/min的水平搖床中，搖10min,倒出染色液，用蒸餾水漂洗2次。6.5.3顯色加400mL顯影液，輕輕搖動，待條帶清晰后，倒掉顯影液，迅速加入固定液定影5min,用蒸餾子純度(Pure:P)的數值以%表示，按公式(1)計算：5公式中：

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論