(公開課)微生物的實驗室培養(yǎng)(人教版選修1)

課題1微生物的實驗室培養(yǎng)專題2微生物的培養(yǎng)與應用1.提供營養(yǎng)和條件2.防止污染一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質1.根本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無機鹽⑴碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源無機氮源：有機氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有機物是異養(yǎng)型微生物的：碳源、氮源、能源。一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質2.特殊營養(yǎng)：維生素〔如乳酸桿菌〕、堿基等〔牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有〕3.pH、氧氣的需求：霉菌〔pH調至酸性〕細菌〔pH調至中性或微堿性〕厭氧生物需提供無氧條件。一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質4.培養(yǎng)基種類固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無凝固劑瓊脂別離鑒定工業(yè)生產化學成分：物理性質：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基考點1、微生物的實驗室培養(yǎng)一、培養(yǎng)基的分類

選擇培養(yǎng)基的應用參加青霉素的培養(yǎng)基——別離酵母菌、霉菌等真菌參加高濃度食鹽的培養(yǎng)基——別離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基——別離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基——別離自養(yǎng)型微生物伊紅美藍培養(yǎng)基——鑒別大腸桿菌問題討論假設硝化細菌、圓褐固氮菌、不固氮的藍藻混合在一起，我們配置什么樣的培養(yǎng)即可以將三種微生物別離？碳源氮源能源硝化細菌CO2氨氨圓褐固氮菌糖類等含碳有機物N2有機物不固氮的藍藻CO2銨鹽、硝酸鹽光不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方調節(jié)pH2、成分水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子(生長因子即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)真菌：5～6細菌：6.5～

7.5有時會加一定量的氯化鈉以維持一定的滲透壓5.配制原那么⑴目的明確：⑵營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當⑶適宜的pH值：有機碳源異養(yǎng)型：根據微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源參加緩沖劑細菌偏堿，真菌偏酸〔CO2碳源〕生產科研2.無菌范圍：實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實驗用具滅菌實驗操作過程二.無菌技術：防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺比較消毒與滅菌(原理相同〕比較項理化因素的作用強度消滅微生物的數量芽孢和孢子能否被消滅消毒滅菌較為溫和局部生活狀態(tài)的微生物不能能全部微生物強烈高壓蒸汽滅菌〔濕熱滅菌〕灑精燈灼燒滅菌干熱滅菌〔1〕滅菌方法：3、常用的滅菌和消毒的方法培養(yǎng)基、無菌水、各種耐高溫的玻璃金屬器具100kPa、121℃下維持15-30min需要保持枯燥耐高溫的玻璃金屬器皿160-170℃下加熱1-2h接種環(huán)等金屬器具1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(2)消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇適宜的方法?！?〕培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿〔2〕玻棒、試管、燒瓶和吸管〔3〕實驗操作者的雙手思考單個或少數菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細胞群體1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNaCl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：培養(yǎng)基用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補水定容4.調pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個細胞,形成單個菌落7．無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么方法來估計培養(yǎng)基的溫度？問題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基外表的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基外表的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。⑴平板劃線法：二.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：1.接種：⑵稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h后，觀察并記錄形成單個菌落分散成單個細胞,〔三〕平板劃線別離法主要器具：操作過程：注意：無菌操作方法：同前。將培養(yǎng)皿______〔蓋在下〕，放于_____℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)__________小時。在作第二次以及其后的劃線操作時，要從上一次劃線的開始________劃線。接種環(huán)、思考：假設如上圖所示進行劃線別離，那么接種環(huán)總共進行幾次灼燒滅菌？恒溫培養(yǎng)箱。每次劃線前接種環(huán)都要灼燒滅菌，再冷卻。末端１２～２４倒置３７

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到單個菌落。2、在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？劃線結束后灼燒接種環(huán)，及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細菌污染環(huán)境和感染操作者。3.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。4.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。5、如何判斷接種操作是否符合無菌要求？如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小根本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，那么說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現了其他菌落，那么說明接種過程中，無菌操作還未到達要求。〔四〕稀釋涂布平板法主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管操作過程：先將培養(yǎng)菌液稀釋〔10-5~10-7倍〕用移液管或吸管取0.1ml稀釋度不同的菌液，加在平板上，用無菌玻璃三角刮刀均勻涂布在培養(yǎng)基平面上。在適當稀釋度下，可培養(yǎng)得到相互分開的的菌落。將培養(yǎng)皿倒置〔蓋在下〕，放于３７℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)１２～２４小時。劃線別離方法簡單；涂布別離，易形成單菌落，且可計數，但操作復雜些。6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量移液器⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍10g土樣從土壤中別離微生物稀釋涂布法三.菌種的保藏：1.臨時保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上4℃2.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃思考：菌種保存為何采用斜面而不是平板？試管斜面培養(yǎng)基密閉效果比平面的好很多,不容易進入雜菌，同時能用來做純細菌的長期保存。