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1鴨疫里默氏桿菌病診斷技術(shù)規(guī)程GB4789.28食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范24.1細(xì)菌分離4.1.1儀器和設(shè)備4.1.1.1生物安全柜。4.1.1.3顯微鏡。4.1.2試劑或材料4.1.2.4瑞氏染色液。4.1.3操作步驟4.1.3.1取樣4.1.3.2分離培養(yǎng)將接種環(huán)伸入組織內(nèi)部，然后劃線接種于血清瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板，平板的配制根據(jù)根據(jù)描述的典型菌落，劃線接種于血清瓊脂平板進(jìn)行純化培養(yǎng)。4.1.3.3菌落形態(tài)4.1.4結(jié)果判定34.2病原核酸檢測(cè)4.2.1.1儀器和設(shè)備4.2.1.1.1高速冷凍離心機(jī)。4.2.1.1.4紫外分析儀。4.2.1.2試劑或材料4.2.1.3樣品處理及核酸提取4.2.1.3.1組織樣品磨勻漿。-20℃保存?zhèn)溆谩Ｈ?00μL組織勻漿液加入400μLTE中充分混勻，再加終濃度為1%的SDS和4.2.1.3.2菌落樣品浴10min后離心取上清作為PCR模板樣品?；蛘哂蒙唐坊腄NA提取根據(jù)GenBank中發(fā)表的鴨疫里黙氏桿菌1物RA-001F:5’-TTAGATAGTTGGTGAGGTAA-3’。下游引物RA-002R:5’-ATCGGTGTTCTGAGTAAT-3’。4.2.1.5.1反應(yīng)體系44.2.1.5.2反應(yīng)程序4.2.1.6結(jié)果判定4.2.1.6.1試驗(yàn)成立的條件4.2.1.6.2結(jié)果的判定4.2.2.1儀器和設(shè)備4.2.2.1.2臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)。4.2.2.1.3渦旋振蕩器。4.2.2.2試劑或材料54.2.2.2.24.2.2.2.34.2.2.2.44.2.2.2.54.2.2.3樣品處理及核酸提取4.2.2.3.1組織樣品4.2.2.3.2菌落樣品4.2.2.5.1反應(yīng)體系采用20μL反應(yīng)體系，組成見表2。4.2.2.5.2反應(yīng)程序4.2.2.5.3結(jié)果判定4.2.2.5.3.1試驗(yàn)成立的條件4.2.2.5.3.2結(jié)果的判定6符合3.4臨床診斷規(guī)定的疑似病例經(jīng)4.2.1和4.2.2中的任一方法檢測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性者，可判定為鴨7水水水水A.550×TAE緩沖液羥基甲基氨基甲烷（Tris）242.0g82℃~8℃保存。
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