注射用醋酸去氨加壓素制備工藝及質(zhì)量考察

摘

要：目的：建立注射用醋酸去氨加壓素的最佳制備工藝。方法：采用真空冷凍干燥法，對注射用醋酸去氨加壓素的工藝條件，如藥液裝量、預凍溫度、升華干燥溫度、解吸干燥溫度等進行考察。結果：最佳制備工藝為藥液裝量0.8mL/瓶，選取-40℃為本產(chǎn)品預凍溫度，在真空狀態(tài)下，以-40～-25℃進行升華干燥，在35℃下進行解吸干燥。結論：經(jīng)驗證，該注射用醋酸去氨加壓素制備工藝適合批量生產(chǎn)，產(chǎn)品質(zhì)量符合國家標準規(guī)定。關鍵詞：注射用醋酸去氨加壓素；制備工藝；穩(wěn)定性0

引言醋酸去氨加壓素（desmopressinacetate）為天然精氨鹽加壓素的結構類似物，系對天然激素的化學結構進行兩處改動而得，即1-半胱氨酸脫去氨基，以8-D-精氨酸取代8-L-精氨酸，因此本品亦稱去氨精氨酸加壓素。其分子式為C46H64N14O12S2C2H4O2，分子量為1129.35，化學名為巰基丙酰-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-谷氨酰氨酰-L-天冬酰氨酰-L-半胱氨酰-L-脯氨酰-D-精氨酰-L-甘氨酰胺醋酸鹽（1,6-二硫環(huán)）。在常溫下，醋酸去氨加壓素為一種白色無嗅粉末。醋酸去氨加壓素是一種多肽類藥物，是手術及相關科室的新型止血藥，可有效減少出血量，并預防深靜脈血栓；是輕中度甲型血友病、血管性血友病的一線用藥，可用于治療肝硬化、尿毒癥及各種抗凝、抗血小板藥物所致的出血；也是中樞性尿崩癥及原發(fā)性遺尿癥的首選用藥。注射用醋酸去氨加壓素系真空冷凍干燥產(chǎn)品，真空冷凍干燥是指將含水樣品凍結到冰點以下，使樣品中的水分凍結成小冰晶，然后在真空狀態(tài)下通過加熱使水分由固態(tài)直接升華成氣態(tài)水蒸氣而逸出，使樣品中水分失去而得到的干燥樣品。凍干工藝主要包括預凍、升華干燥、解吸干燥3個階段，本文通過考察注射用醋酸去氨加壓素凍干工藝中的各條件，得到最佳制備工藝，并經(jīng)驗證該工藝適合批量生產(chǎn)。

1

材料與設備1.1

材料醋酸去氨加壓素；甘露醇；醋酸；注射用冷凍干燥用溴化丁基膠塞；模制西林瓶；抗生素瓶用鋁塑組合蓋。1.2

主要設備LYO-7.5真空冷凍干燥機；RZGSB西林瓶灌裝半加塞機；KSC-ⅡB隧道式超聲波玻璃瓶洗瓶機；STE100/2/100潔凈對開門滅菌烘箱；KGL250自動軋蓋機。

2

方法2.1

樣品制備將醋酸去氨加壓素用注射用水溶解后，與經(jīng)超濾的甘露醇水溶液合并，用注射用水稀釋至所需濃度，用RZGSB西林瓶灌裝半加塞機按照所需的相應體積進行灌裝，送入LYO-7.5真空冷凍干燥機，依據(jù)不同的凍干工藝條件進行凍干，凍干結束后充氮保護，壓塞，取出西林瓶，軋蓋。2.2

冷凍干燥方法將制備好的樣品分裝于2mL西林瓶中，放入凍干機干燥箱中進行預凍，并保證凍結完全。之后進行抽真空，在真空度為5～50Pa狀態(tài)下加熱升華干燥，使樣品水分含量≤5%。2.3

擴大批量驗證將3批注射用醋酸去氨加壓素配制液，按照試驗優(yōu)化后的凍干工藝進行冷凍干燥。3批半成品批量為27000瓶。分別按2015版《中華人民共和國藥典》二部及國家食品藥品監(jiān)督管理局《注射用醋酸去氨加壓素藥品標準》（YBH01702010）的相關規(guī)定，檢定各批次制品的殘余水分、細菌內(nèi)毒素、酸堿度以及含量，統(tǒng)計結果，以驗證該工藝的適用性。2.4

質(zhì)量考察本次試驗工藝生產(chǎn)的樣品及3批驗證工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品，由深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司QC部進行抽樣檢測。2.4.1

水分測定取本品，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0832）中的容量滴定法進行檢查，要求含水分不得超過5.0%。2.4.2

細菌內(nèi)毒素測定取本品，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（1143）中的細菌內(nèi)毒素檢測方法進行檢查，要求細菌內(nèi)毒素含量應小于0.6EU/μg。2.4.3

酸度取本品，加水溶解并稀釋制成每l

mL中含2.5

mg的溶液，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0631）中的pH值測定法進行檢查，要求pH值應為5.0～7.0。2.4.4

溶液澄清度檢查取本品，加水溶解并稀釋制成每l

mL中含2.5

mg的溶液，按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0902）中的溶液澄清度檢查法進行檢查，要求溶液應澄清無色。2.4.5

含量測定按照2015版《中華人民共和國藥典》四部通則（0512）中的高效液相色譜法測定含量。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽溶液（取0.O67

mol/L磷酸氫二鈉與0.O67

mol/L磷酸二氫鉀等混合，調(diào)節(jié)pH值至7.0）-乙腈（80:20)為流動相；檢測波長為220

nm。取醋酸去氨加壓素、雜質(zhì)A與縮宮素對照品適量，加水溶解并稀釋制成每lmL中各約含20

μg的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。理論板數(shù)按醋酸去氨加壓素峰計算不低于2

000。測定方法：取本品10支，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每l

mL中約含8μg的溶液，精密量取50

μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取醋酸去氨加壓素對照品適量，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

3

結果3.1

裝量的確定將稀釋好的醋酸去氨加壓素溶液分別裝入2mL西林瓶中，每瓶裝量分別為0.5

mL、0.8

mL、1.1

mL、1.4mL，每瓶含量都是15μg，進行凍干試驗，對樣品進行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度檢查，結果如表1所示。從表1結果對比可知：裝量規(guī)格為0.8mL/瓶和1.1mL/瓶時，樣品性狀、餅狀物外觀最好；0.5

mL/瓶裝量規(guī)格的樣品餅狀物出現(xiàn)萎縮；1.4mL/瓶裝量規(guī)格的樣品餅狀物過于疏松，容易散開。4種裝量規(guī)格的凍干樣品的溶液澄清度沒有明顯差異，均符合質(zhì)量要求。綜合考慮，本試驗確定0.8mL/瓶為本產(chǎn)品最適宜的凍干裝量，既節(jié)約物料，裝在2mL西林瓶中又顯得美觀。3.2

預凍溫度的確定設置好相應的板層溫度，開動壓縮機對前箱制冷，使制品溫度迅速降溫（降溫時間≤2h），制品溫度分別在-20℃、-30℃、-40℃、-45℃以下保持2h以上，對樣品進行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度檢查，結果如2所示。從表2結果對比可知：-20℃和-30

℃預凍溫度的樣品均出現(xiàn)不同程度的餅狀物外觀萎縮，可能是由于溫度較高，樣品沒有完全凍結，在真空升華階段極易溶解周圍樣品所致。而-40

℃和-45

℃預凍溫度的樣品試驗結果沒有明顯差別，均符合質(zhì)量要求。由于過低的預凍溫度會使能耗增加，因此本試驗選擇-40

℃為本產(chǎn)品最適宜的預凍溫度。3.3

升華溫度的確定在真空度為5～50Pa狀態(tài)下加熱升華干燥，使制品最終溫度分別控制在-15℃、-20℃、-25℃、-30℃，整個升華干燥階段需要8h，對樣品進行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度檢查，結果如表3所示。從表3結果對比可知：當升華溫度為-15℃時，凍干樣品性狀為類白色結晶，凍干餅狀物有萎縮現(xiàn)象，溶解后溶液渾濁。這是因為該溫度在其共晶點附近時，冰晶部分溶解成液態(tài)，吸熱蒸發(fā)，使樣品顏色加深、餅狀物出現(xiàn)萎縮。升華溫度過低，制冷能耗增加，成本提高。真空冷凍干燥是通過升高板層溫度，相應地使干燥物表面溫度升高，用以加快升華速度。但是，板層溫度并非越高越好，必須考慮樣品的性狀因素。綜合表明，-25℃為本產(chǎn)品最適宜的凍干升華溫度。3.4

解吸溫度的確定在真空度為1～10Pa狀態(tài)下加熱進行解吸干燥，使制品最終溫度分別控制在25℃、30℃、35℃、40℃，整個解吸干燥階段需要5h，對樣品進行性狀、餅狀物外觀、溶液澄清度、水分檢查，結果如表4所示。從表4結果對比可知：解吸干燥溫度為30

℃時，雖然樣品各方面指標基本合格，但水分接近標準規(guī)定的上限。解吸干燥溫度為25℃時，樣品水分不合格。解吸干燥溫度為40℃時，樣品餅狀物外觀、性狀不合格。故選擇35℃為本產(chǎn)品最適宜的解吸干燥溫度。3.5

擴大批量驗證為了驗證優(yōu)選的凍干工藝的穩(wěn)定性，車間連續(xù)生產(chǎn)了20120301、20120302、20120303這3批注射用醋酸去氨加壓素配制液，按照上述試驗優(yōu)選后的凍干工藝進行冷凍干燥工藝的驗證。3批半成品的裝量均為0.8mL/瓶，批量為27000瓶，結果如表5所示。從表5結果可以看出：這3批凍干制品的檢定結果均符合國家標準，表明該凍干工藝符合生產(chǎn)要求，穩(wěn)定性良好。

4

結語凍干制劑主要存在產(chǎn)品萎縮、自溶、分層等缺陷。其主要原因是：預凍溫度高，制品尚未完全凍結；升華干燥溫度高、速度快，使部分制品融化。本試驗中，注射用醋酸去氨加壓素溶液的共晶點為-14℃，溶液共晶點在凍干工藝中很重要，它是制定凍干工藝的主要依據(jù)。預凍時，必須冷凍到共晶點以下，為了確保產(chǎn)品在預凍時完全凍結，本試驗選擇-40

℃為其預凍溫度。在升華干