檢驗(yàn)技師考試《免疫檢驗(yàn)》重要考點(diǎn)

檢驗(yàn)技師考試《免疫檢驗(yàn)》重要考點(diǎn)免疫檢驗(yàn)科目重點(diǎn)總結(jié)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。免疫是機(jī)體識(shí)別和排斥抗原性異物的一種生理功能。免疫防御(對(duì)外);免疫自穩(wěn)(防自身免疫病);免疫監(jiān)視(防腫瘤)。中樞免疫器官包括骨髓、胸腺;外周免疫器官有淋巴結(jié)、脾臟(最大)、黏膜相關(guān)淋巴組織。B細(xì)胞通過(guò)識(shí)別膜免疫球蛋白來(lái)結(jié)合抗原，介導(dǎo)體液免疫;B細(xì)胞受體=BCR=mIg表面標(biāo)志包括膜免疫球蛋白(SmIg)、Fc受體、補(bǔ)體受體、EB病毒受體和小鼠紅細(xì)胞受體。成熟B細(xì)胞包括CD19、CD20、CD21、CD22(成熟B細(xì)胞的mIg主要為mIgM和mIgD)，同時(shí)檢測(cè)CD5分子，可分為B1細(xì)胞和B2細(xì)胞。B細(xì)胞功能檢測(cè)方法包括溶血空斑形成試驗(yàn)(體液免疫功能)。T細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫，共同表面標(biāo)志是CD3(多鏈糖蛋白);輔助T細(xì)胞的標(biāo)志是CD4;殺傷T細(xì)胞的標(biāo)志是CD8;T細(xì)胞受體=TCR。T細(xì)胞和NK細(xì)胞的共同表面標(biāo)志是CD2(綿羊紅細(xì)胞受體);T細(xì)胞功能檢測(cè)包括植物血凝素(PHA)刀豆素(CONA)刺激T細(xì)胞增殖。增殖試驗(yàn)有形態(tài)法、核素法。NK細(xì)胞具有細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用，直接殺傷靶細(xì)胞(腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞)。吞噬細(xì)胞包括單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)(MPS，表面標(biāo)志CD14，包括骨髓內(nèi)的前單核細(xì)胞、外周血中的單核細(xì)胞和組織內(nèi)的巨噬細(xì)胞)和中性粒細(xì)胞。(表達(dá)MHCⅡ類分子)人成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)(專職抗原呈遞功能)的表面標(biāo)志為CD1a、CD11c和CD83。免疫球蛋白可分為分泌型(sIg，主要存在于體液中，具有抗體功能)及膜型(mIg，作為抗原受體表達(dá)于B細(xì)胞表面，稱為膜表面免疫球蛋白)。10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG>IgA>IgM>IgD>IgE五類(按重鏈恒定區(qū)抗原性(CH)排序)免疫球蛋白含量測(cè)定：?jiǎn)蜗颦h(huán)狀免疫擴(kuò)散法、免疫比濁法。11、免疫球蛋白的同種型抗原決定簇位于恒定區(qū)(CH、CL)12、抗體由漿細(xì)胞產(chǎn)生?？贵w分子上VH和VL(高變區(qū))是抗原結(jié)合部位。13、IgG：血清中含量最高的免疫球蛋白(IgG1最高)，血液和細(xì)胞外液中的主要抗體。也是再次免疫應(yīng)答的主要抗體，是唯一能通過(guò)胎盤(pán)的抗體，大多數(shù)抗菌抗體、抗病毒抗體是IgG，某些自身抗體及超敏Ⅱ型抗體是IgG，免疫學(xué)檢測(cè)中第二抗體也以IgG為主。14、IgA：分血清型(單體存在)及分泌型;分泌型IgA(sIgA)為二聚體，性能穩(wěn)定，主要存在于胃腸道、支氣管分泌液、初乳、唾液、淚液中，局部濃度高，是參與黏膜局部免疫的主要抗體。15、IgM：為五聚體，主要存在于血液中，是Ig中分子量最大的(又稱巨球蛋白)。個(gè)體發(fā)育最早合成和分泌的抗體。抗原刺激后體液免疫應(yīng)答中最先產(chǎn)生的抗體，感染過(guò)程中血清IgM水平升高，說(shuō)明近期感染。新生兒臍血中若IgM增高，提示有宮內(nèi)感染。16、IgE：為單體結(jié)構(gòu)，正常人血清中含量最低。IgE為親細(xì)胞抗體，介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)。特異性過(guò)敏反應(yīng)和寄生蟲(chóng)早期感染患者血清中可升高。17、補(bǔ)體：具有酶樣活性的球蛋白(肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生);激活途徑主要有三種：經(jīng)典途徑(以結(jié)合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑(雙鏈DNA)，C1～C9全部參與)、替代途徑(病原微生物細(xì)胞壁成分(脂多糖)直接激活補(bǔ)體C3，然后完成C5～C9的激活過(guò)程)、MBL途徑(由急性炎癥期產(chǎn)生的甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)與病原體結(jié)合后啟動(dòng)激活)。18、補(bǔ)體系統(tǒng)中C3含量最多，C2含量最少。19、滅活：加熱56℃30分鐘，補(bǔ)體喪失活性20、補(bǔ)體清除免疫復(fù)合物的方式：吞噬調(diào)理;免疫粘附;免疫復(fù)合物抑制。21、完全抗原=反應(yīng)原性+免疫原性。半抗原=反應(yīng)原性(無(wú)免疫原性)22、抗原抗體結(jié)合力(分子間引力)：靜電吸引、范德華力、氫鍵、疏水作用力(最強(qiáng))23、抗原抗體反應(yīng)的四大特點(diǎn)：特異性、可逆性、比例性、階段性;受反應(yīng)條件(如溫度、pH、電解質(zhì)、抗原抗體比例等)的影響。24、抗體過(guò)量——前帶;抗原過(guò)量——后帶(鉤狀效應(yīng))25、抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段：第一階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，此階段反應(yīng)快，僅需幾秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng);第二階段為可見(jiàn)反應(yīng)階段，此階段反應(yīng)慢，往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)。26、顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng)?？扇苄钥乖霈F(xiàn)沉淀反應(yīng)。單價(jià)抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。27、木瓜酶水解IgG為2Fab+Fc;胃蛋白酶水解IgG為F(ab)2+nFc。28、最常用于免疫動(dòng)物的'佐劑是弗氏佐劑，弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑(弗氏不完全佐劑加卡介苗)和弗氏不完全佐劑兩種。29、R(兔子)型抗血清是用家兔及其他動(dòng)物免疫產(chǎn)生的抗體，抗原抗體反應(yīng)比例合適范圍較寬，適于作診斷試劑。H(馬)型抗血清是用馬等大動(dòng)物免疫獲得的抗體，抗原抗體反應(yīng)比例合適范圍較窄，一般用作免疫治療。30、抗血清常見(jiàn)保存條件：2-8℃保存;冷凍保存(最常用);真空干燥保存(5-10年)。31、雜交瘤細(xì)胞放入液氮(-196℃)前，需要逐步降溫。復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)，從液氮罐內(nèi)取出凍存管，立即浸入37℃水浴。32、凝集反應(yīng)分為兩個(gè)階段：①抗原抗體的特異性結(jié)合;②出現(xiàn)可見(jiàn)的顆粒凝聚。33、直接凝集反應(yīng)的原理是細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)(0.85%氯化鈉)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集。抗原=凝集原，抗體=凝集素。34、玻片凝集試驗(yàn)：主要用于抗原的定性分析，AB0血型的測(cè)定。試管凝集試驗(yàn)：肥達(dá)氏試驗(yàn)、外斐試驗(yàn)、輸血交叉配血試驗(yàn);35、紅細(xì)胞包被抗原，用以檢測(cè)抗體的血凝反應(yīng)，稱為正向間接血凝反應(yīng)(PHA)。紅細(xì)胞包被抗體，用以檢測(cè)抗原的血凝反應(yīng)，稱為反向間接血凝反應(yīng)(RPHA)。36、間接血凝抑制試驗(yàn)：可用于檢測(cè)抗體、自身抗體、變態(tài)反應(yīng)性抗體，也可測(cè)定抗原。37、金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)38、血凝試驗(yàn)可在微量滴定板或試管中進(jìn)行，將標(biāo)本倍比稀釋，一般為1:64，同時(shí)設(shè)不含標(biāo)本的稀釋液為對(duì)照孔。凡紅細(xì)胞沉積于孔底，集中呈一圓點(diǎn)的為不凝集。如紅細(xì)胞凝集，則分布于孔底周?chē)?9、明膠凝集試驗(yàn)(間接)：HIV-1抗體和抗精子抗體檢測(cè)40、抗球蛋白試驗(yàn)，又稱Coombs試驗(yàn)，是檢測(cè)抗紅細(xì)胞不完全抗體的一種很有用的方法。包括直接Coombs試驗(yàn)(檢測(cè)紅細(xì)胞上的不完全抗體)和間接Coombs試驗(yàn)(游離在血清中的不完全抗體)41、沉淀反應(yīng)分兩個(gè)階段：第一階段為抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合，幾秒到幾十秒即可完成，出現(xiàn)可溶性小的復(fù)合物，肉眼不可見(jiàn)。第二階段為形成可見(jiàn)的免疫復(fù)合物，約需幾十分鐘到數(shù)小時(shí)才能完成，如沉淀線、沉淀環(huán)。42、免疫比濁：最適pH為6.5～8.5，磷酸鹽緩沖液。43、對(duì)流免疫電泳：抗體流向負(fù)極，抗原流向正極44、免疫固定電泳也用予尿液中本-周蛋白的檢測(cè)及κ、λ分型，腦脊液中寡克隆蛋白的檢測(cè)及分型。45、RIA(放免)核素(125Ⅰ)標(biāo)記抗原，競(jìng)爭(zhēng)抑制(標(biāo)記抗原和非標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)限量抗體);IRMA(免疫放射)核素標(biāo)記抗體，非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合(過(guò)量標(biāo)記抗體，反應(yīng)速率比RIA快，靈敏度明顯高于RIA。)RIA可以測(cè)定大分子和小分子抗原，但I(xiàn)RMA則只能測(cè)定至少有兩個(gè)抗原決定簇的抗原。46、常用的熒光素有：異硫氰酸(FITC)黃綠色，最常用;四乙基羅丹明(RB200)橘紅色;四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)橙紅色;藻紅蛋白(R-RE)橙色。其他：銪(Eu3+)47、熒光標(biāo)記蛋白的常用方法：攪拌法和透析法。熒光抗體效價(jià)鑒定：抗原含量為1g/L時(shí)，抗體效價(jià)>1：1648、時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定(TRFIA)以鑭系元素(如：銪)化合物為熒光標(biāo)記物。49、偏振免疫測(cè)定的偏振波長(zhǎng)是485nm(藍(lán)光)。50、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)：底物(1)鄰苯二胺(OPD)，(2)四甲基聯(lián)苯胺(TMB)ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。堿性磷酸酶(ALP)：底物：對(duì)-硝基苯磷酸脂(p-NPP)β-半乳糖苷酶(β-Gal)：底物：4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)51、異相法：先分離，后測(cè)定;均相法：不分離，直接測(cè)。52、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：必要的試劑：①固相的抗原或抗體;②酶標(biāo)記的抗原或抗體;③酶反應(yīng)的底物?？乖瓬y(cè)定：蛋白大分子抗原用得最多的是雙抗體夾心法(HBsAg)。只有單個(gè)抗原決定簇的小分子，則使用競(jìng)爭(zhēng)抑制法?？贵w測(cè)定：通常使用間接法(HCV、HIV)、雙抗原夾心法(HBsAb)、競(jìng)爭(zhēng)法(HBcAb、HBeAb)和捕獲法(IgM)等*待測(cè)孔最后顯示的顏色深淺與標(biāo)本中的待測(cè)抗原或抗體呈正相關(guān)的是：雙抗體夾心法、雙位點(diǎn)一步法、間接法測(cè)抗體;53、化學(xué)發(fā)光底物有：直接化學(xué)發(fā)光劑：吖啶酯和三聯(lián)吡啶釕;酶促反應(yīng)發(fā)光劑：(標(biāo)記酶HRP)魯米諾及其衍生物、(標(biāo)記酶為堿性磷酸酶)AMPPD;54、免疫印跡實(shí)驗(yàn)中常選用多克隆抗體。55、外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離的分層液常用：Ficoll(由上到下為血漿，單個(gè)核細(xì)胞，粒，紅)和Percoll(由上至下：死細(xì)胞，單個(gè)核細(xì)胞，淋