云上黑山羊養(yǎng)殖規(guī)范 第2部分：人工授精

1DBFORMTEXT153/TFORMTEXT1XXXX—FORMTEXT1XXXX云上黑山羊養(yǎng)殖規(guī)范云上黑山羊養(yǎng)殖規(guī)范第2部分：人工授精本文件確立了人工授精采精用云上黑山羊種公羊選擇、采精、精液檢查、精液保存、凍精質(zhì)量評價、母羊發(fā)情鑒定和輸精等技術(shù)要求。本文件適用于云上黑山羊的人工授精操作。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。DB53/T760.2云南半細毛羊養(yǎng)殖第2部分：人工授精DB53/T860山羊細管凍精制作規(guī)程3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4采精4.1采精器具、試劑及地點4.1.1器具假陰道、電刺激采精儀、集精杯、15mL錐形離心管、移液器、注射器、水浴鍋、160℃~200℃的干燥箱、煮沸消毒器、顯微鏡、載玻片、溫度計、保溫杯。4.1.2試劑凡士林、75%酒精、生理鹽水。4.1.3地點符合DB53/T860的要求。4.2操作按DB53/T760.2的要求執(zhí)行。5精液檢查5.1檢查2DBFORMTEXT153/TFORMTEXT1XXXX—FORMTEXT1XXXX正常的公羊精液應(yīng)符合以下要求：a)呈乳白色，濃厚不透明；b)用肉眼能觀察到快速的云霧狀運動；c)射精量0.5mL～2.0mL。5.2活力評定精子活力采用0～1.0的10級評分標準。在顯微鏡視野里，100%的精子做活躍的直線前進運動評為1.0分，80%做直線前進運動評為0.8分，以此類推。5.3密度評定精子密度評定分為“密”、“中”、“稀”、“無”，具體要求如下：a)精子密度很大，精子與精子間的距離小于一個精子的長度為“密”；b)精子間有明顯的空隙，兩精子間的距離相當于1個～2個精子長度為“中”；c)精子數(shù)量少，精子之間超過兩個精子的長度為“稀”；d)若觀察不到精子則記為“無”。6精液保存6.1常溫保存6.1.1器具15mL或50mL錐形塑料離心管、0.22μm一次性濾器，0.45μm一次性濾器，水浴鍋。6.1.2試劑三羧甲基氨基甲烷（Tris）、檸檬酸、葡萄糖、大豆卵磷脂、青霉素、鏈霉素、蛋黃、脫脂奶粉、0.9%生理鹽水。6.1.3稀釋液精液常溫制作保存稀釋液配方見附錄A。6.1.4稀釋精液按照以下步驟進行稀釋：a)將稀釋液于水浴鍋（37℃)中平衡30min，至稀釋液溫度與精液相同；b)精液稀釋時，稀釋液沿管壁緩緩加入，切忌速度過快；c)輕輕晃動使精液和稀釋液混勻，不應(yīng)用力搖晃或攪拌。6.1.5常溫保存原則常溫保存應(yīng)遵循以下原則：a)避免強烈光線的照射及高溫；b)精液應(yīng)恒溫保存，降溫或升溫應(yīng)緩慢進行；c)宜減少精液與空氣的接觸。6.2冷凍保存3DBFORMTEXT153/TFORMTEXT1XXXX—FORMTEXT1XXXX按DB53/T860的規(guī)定執(zhí)行。7凍精質(zhì)量評價輸精凍精精液質(zhì)量應(yīng)滿足以下要求：a)解凍后精子活力不低于0.35，精子畸形率低于15%；b)質(zhì)膜完整率不低于40%，頂體完整率不低于50%；c)運動速度在100μm/s以上，每劑細管凍精解凍后有效精子數(shù)不低于1000萬個；d)鮮精活力不低于0.75，精子密度“中”以上。8母羊發(fā)情鑒定按DB53/T760.2的要求執(zhí)行。9輸精9.1輸精時間母羊發(fā)情后12h～24h第1次輸精，間隔8h～12h第2次輸精，若還持續(xù)發(fā)情的，可在第2次輸精后8h～12h進行第3次輸精。9.2輸精輸精按以下步驟進行：a)輸精前將母羊外陰部用0.1%新潔爾滅擦洗消毒，再用生理鹽水沖洗干凈；b)將用生理鹽水溫潤過的開膣器閉合按母羊陰門的形狀慢慢插入后輕輕轉(zhuǎn)動90度，打開開膣器，用額燈或手電筒光源尋找子宮頸口；c)將輸精槍慢慢插入子宮頸口內(nèi)1.0cm～2.0cm，將精液注入子宮頸口內(nèi)；d)輸精完畢使母羊繼續(xù)倒立2min，輕拍母羊背部，防止精液倒流出。9.3記錄人工授精記錄見表1。表1人工授精記錄表號數(shù)號量號量號量4DBFORMTEXT153/TFORMTEXT1XXXX—FORMTEXT1XXXX（資料性）精液常溫保存稀釋液配方A.1精液常溫保存稀釋液配方精液常溫保存稀釋液各配方如下：a)配方一，脫脂奶粉10g、葡萄糖0.2g溶于100mL蒸餾水，95℃加熱處理8min。冷卻至室溫后加入0.5g青霉素和0.5g鏈霉素。然后于8000g×30min離心取上清，用0.45μm濾器過濾備用；b)配方二，取Tris3.6g、葡糖糖0.5g、檸檬酸2g、青霉素0.006g、鏈霉素0.1g溶于90mL蒸餾水中，0.22μm濾器過濾除菌后于4℃保存。使用前加入1.5mL蛋黃，并定容至100ml，用0.45μm濾器過濾備用；c)配方三，取Tris2.71g、葡萄糖1.0g、檸檬酸1.4g、青霉素0.0627g、鏈霉素0.1335g溶于90mL蒸餾水中，0.22μm濾器過濾除菌后于4℃保存。使用前加入1.5mL蛋黃，并定容至100mL，用0.45μm濾器過濾備用；d)配方四：取Tris3.1g、檸檬酸1.7g、葡萄糖1.3g、青霉素0.062