高中生物同步備課系列【備課件】3.2.2 基因工程的基本操作程序-人教2019版選擇性必修3

第三章基因工程第2節(jié)基因工程的基本操作程序?qū)W習(xí)目標(biāo)掌握目的基因的篩選與獲取方法，簡(jiǎn)述PCR的原理、條件及過(guò)程（生命觀念、科學(xué)思維）0102學(xué)會(huì)基因表達(dá)載體構(gòu)建的方法和要求，簡(jiǎn)述基因表達(dá)載體的組成及構(gòu)建過(guò)程（科學(xué)探究）理解目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的具體過(guò)程，闡明將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法（科學(xué)探究）掌握并闡明目的基因檢測(cè)與鑒定的方法（科學(xué)探究、社會(huì)責(zé)任）掌握DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定的方法（科學(xué)探究）030405情境導(dǎo)入目的基因的篩選與獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞第一步第二步第三步第四步目的基因的檢測(cè)與鑒定基因工程的基本操作程序構(gòu)建好的Bt基因表達(dá)載體通過(guò)什么方式導(dǎo)入棉花細(xì)胞？

在獲得轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的過(guò)程中，受體細(xì)胞有植物、動(dòng)物、微生物之分，受體

細(xì)胞不同，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法也不完全相同。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法有哪些，分別適用于什么生物？新課講授1一、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（常用）花粉管通道法——顯微注射法——Ca2+處理法（我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)）轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，稱為轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化的實(shí)質(zhì)是將目的基因整合到受體細(xì)胞基因組中。基因槍法新課講授1一、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞這是我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的一種方法，是一種十分簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的方法，我國(guó)的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉就是用此種方法獲得的。操作方法：①用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；②在植物受粉后的一定時(shí)間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊。1.花粉管通道法2.基因槍法單子葉植物中常用的一種基因轉(zhuǎn)化方法，但是成本較高。將目的基因吸附在微小的金粒或鎢粒表面，然后將微粒用基因槍高速射入受體細(xì)胞或組織。3.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（1）農(nóng)桿菌的特點(diǎn)：農(nóng)桿菌能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，而對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有侵染能力；農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且將其整合到該受體細(xì)胞染色體DNA上。農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有

，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞時(shí)，Ti質(zhì)粒的_______可轉(zhuǎn)移至被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的

。（2）轉(zhuǎn)化原理：T-DNATi質(zhì)粒大型環(huán)狀DNA農(nóng)桿菌T-DNA染色體DNA上Ti質(zhì)粒（3）轉(zhuǎn)化過(guò)程：構(gòu)建表達(dá)載體含目的基因的重組Ti質(zhì)粒表現(xiàn)出新性狀的植株導(dǎo)入植物細(xì)胞植物細(xì)胞將目的基因插入染色體DNA中目的基因Ti質(zhì)粒T-DNA含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法示意圖（3）轉(zhuǎn)化過(guò)程：構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞目的基因插入植物細(xì)胞染色體DNA上表達(dá)新性狀轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌植物組織培養(yǎng)Ti質(zhì)粒目的基因第一次導(dǎo)入第二次導(dǎo)入第一次拼接第二次拼接植物組織培養(yǎng)第一次導(dǎo)入第二次導(dǎo)入第一次拼接第二次拼接將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的T-DNA上。(非人工操作)是指含目的基因的T-DNA被拼接到受體細(xì)胞的染色體DNA上。(非人工操作)含目的基因的T-DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。將含目的基因的Ti質(zhì)粒重新導(dǎo)入農(nóng)桿菌。（3）轉(zhuǎn)化過(guò)程：（4）轉(zhuǎn)化的具體方法：a.可以將新鮮的從葉片上取下的圓形小片__________________，然后________________，并_____________；受體細(xì)胞為_(kāi)______與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞再生成植株體細(xì)胞b.可以將_______直接浸沒(méi)在___________________中一段時(shí)間，然后培養(yǎng)植株并獲得____，再進(jìn)行_____、_____等；受體細(xì)胞為_(kāi)______花序含有農(nóng)桿菌的溶液種子篩選鑒定受精卵將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞（1）常用方法：顯微注射技術(shù)（2）常用受體細(xì)胞：受精卵（3）基本操作程序：目的基因的表達(dá)載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫眩╋@微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的動(dòng)物①個(gè)體大，易操作。②受精卵全能性高，易培養(yǎng)成完整個(gè)體。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞（1）原核生物的特點(diǎn)：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等。早期的基因工程操作都用原核生物作為受體細(xì)胞，其中以大腸桿菌應(yīng)用最為廣泛。（2）操作過(guò)程：對(duì)受體細(xì)胞的常用處理方法是氯化鈣法。首先用Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→將重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子。Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，可使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。注意說(shuō)明①將基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）導(dǎo)入農(nóng)桿菌的常用方法是Ca2+處理法。Ca2+（或CaCl2

溶液）對(duì)微生物細(xì)胞的作用是增加細(xì)胞壁的通透性。②目的基因能否在植物細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并表達(dá)的關(guān)鍵是目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體DNA上（原理是基因重組）。③不同種類的受體細(xì)胞：對(duì)于植物來(lái)說(shuō)，受體細(xì)胞可以是受精卵和體細(xì)胞；對(duì)于動(dòng)物來(lái)說(shuō)，受體細(xì)胞一般是受精卵，受精卵具有體積大、易操作、經(jīng)培養(yǎng)可直接表達(dá)性狀的優(yōu)點(diǎn)。種類項(xiàng)目植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；花粉管通道法顯微注射法Ca2＋處理法受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞DNA中→表達(dá)目的基因表達(dá)載體提純→取受精卵→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動(dòng)物Ca2＋處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子【小結(jié)】新課講授2二、目的基因的檢測(cè)與鑒定問(wèn)題：基因表達(dá)載體中已經(jīng)具備標(biāo)記基因（如抗生素抗性基因），對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行了篩選，為什么基因工程的第四步還要對(duì)目的基因進(jìn)行檢測(cè)和鑒定？在含抗生素的選擇培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)的是導(dǎo)入了載體的細(xì)胞，這里的載體可能是基因表達(dá)載體，也可能是未插入目的基因的空載體。因此第四步需要對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)。此外，即便在選擇培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)的細(xì)胞中導(dǎo)入的是基因表達(dá)載體，但是仍然不知道目的基因插入的位置、方向等是否正確，能否正確表達(dá)，因此也需要在轉(zhuǎn)錄和翻譯以及個(gè)體水平上進(jìn)行檢測(cè)和鑒定。新課講授2二、目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，只有通過(guò)檢測(cè)與鑒定才能知道1.分子水平的檢測(cè)（1）檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入如：檢測(cè)棉花的染色體DNA上是否插入了Bt基因或檢測(cè)Bt基因——通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物提取DNAPCR操作是否擴(kuò)增出目的基因M：marker；1-陽(yáng)性質(zhì)粒；2：原始品系；3-9轉(zhuǎn)Bt品系；

PCR瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果電泳操作1.分子水平的檢測(cè)（2）檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄如：檢測(cè)Bt基因是否翻譯出mRNA——通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)提取棉花細(xì)胞mRNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生DNA對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)用與Bt基因相關(guān)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增BtM3C0T-9T-2T-51T-5T-23T-11T-20T-21T-34T-1010個(gè)PCR陽(yáng)性棉花植株中，有四株Bt基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄1.分子水平的檢測(cè)（3）檢測(cè)目的基因是否翻譯如：檢測(cè)Bt基因是否翻譯成Bt抗蟲(chóng)蛋白——通過(guò)抗原-抗體雜交檢測(cè)蘇云金芽孢桿菌提取Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi)抗體標(biāo)記抗體提取蛋白電泳分離抗原抗體雜交2.個(gè)體生物學(xué)水平的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物鑒定方法成功標(biāo)志抗蟲(chóng)植物抗病毒（菌）植物抗鹽植物抗除草劑植物獲取目的基因產(chǎn)物的轉(zhuǎn)基因生物飼喂害蟲(chóng)（抗蟲(chóng)接種實(shí)驗(yàn)）害蟲(chóng)死亡病毒（菌）感染（抗病接種實(shí)驗(yàn)）未出現(xiàn)病斑鹽水澆灌正常生長(zhǎng)噴灑除草劑正常生長(zhǎng)提取細(xì)胞產(chǎn)物與天然產(chǎn)品進(jìn)行功能活性比較功能、活性正?？剐澡b定、活性鑒定等基因工程的基本操作程序用限制酶切割載體和含有目的基因的DNA片段，然后用DNA連接酶連接，構(gòu)建基因表達(dá)載體將含有目的基因的表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞檢測(cè)和鑒定目的基因是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性獲取質(zhì)粒、噬菌體等載體篩選和獲取目的基因DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定探究·實(shí)踐實(shí)驗(yàn)原理（1）利用PCR在體外進(jìn)行DNA片段擴(kuò)增的原理①利用PCR可以在體外進(jìn)行DNA片段的擴(kuò)增。②PCR利用了DNA的熱變性原理，通過(guò)調(diào)節(jié)溫度來(lái)控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合。③PCR儀實(shí)質(zhì)上就是一臺(tái)能夠自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器。一次PCR一般要經(jīng)歷30次循環(huán)。（2）DNA片段電泳鑒定的原理①DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，這個(gè)過(guò)程就是電泳。②PCR的產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。凝膠中的DNA分子通過(guò)染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)。材料用具（1）儀器PCR儀（自動(dòng)控溫，實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增）微量離心管（實(shí)際上是進(jìn)行PCR反應(yīng)的場(chǎng)所）微量移液器（用于向微量離心管轉(zhuǎn)移PCR配方中的液體）一次性吸液槍頭（微量移液器吸取一種試劑更換一次槍頭）電泳裝置（包括電泳儀電泳槽等）PCR儀微量離心管微量移液器電泳裝置材料用具（2）用具4種脫氧核苷酸的等量混合液2種引物Tap

DNA聚合酶模板DNA擴(kuò)增緩沖液無(wú)菌水電泳緩沖液凝膠載樣緩沖液瓊脂糖和核酸染料等方法步驟（1）DNA片段的擴(kuò)增用微量移液器按照PCR反應(yīng)體系配方或PCR試劑盒的說(shuō)明書(shū)，在微量離心管中依次加入各組分參照下表的參數(shù)，設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。將裝有反應(yīng)液的微量離心管放入PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。待所有組分都加入后，蓋嚴(yán)離心管的蓋子，將微量離心管放入離心機(jī)里，離心約10s，使反應(yīng)液集中在離心管的底部（提高反應(yīng)速率）循環(huán)程序變性復(fù)性延伸預(yù)變性94℃，5min//30次94℃，30s55℃，30s72℃，1min最后1次94℃，1min55℃，30s72℃，1min10倍濃縮的擴(kuò)增緩沖液5μL20mmol/L的4種脫氧核苷酸的等量混合液1μL20μmol/L的引物I2.5μL20μmol/L的引物II2.5μLH2O28-33μL1~5U/μL的TaqDNA聚合酶1~2U模板DNA5~10μL總體積50μL（2）DNA片段的電泳鑒定配制瓊脂糖溶液制備凝膠加樣電泳觀察記錄根據(jù)待分離DNA片段的大小，用電泳緩沖液配制瓊脂糖溶液，（一般配制質(zhì)量體積比0.8%～1.2%）。在沸水浴或微波爐內(nèi)加熱至瓊脂糖熔化。稍冷卻后，加入適量的核酸染料混勻?qū)責(zé)岬沫傊侨芤貉杆俚谷肽＞?，并插入合適大小的梳子，以形成加樣孔。待凝膠溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝膠放入電泳槽內(nèi)。將電泳緩沖液加入電泳槽中，電泳緩沖液沒(méi)過(guò)凝膠1mm為宜將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液（內(nèi)含指示劑）混合，再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)。留一個(gè)加樣孔加入指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物接通電源，根據(jù)電泳槽陽(yáng)極至陰極之間的距離來(lái)設(shè)定電壓，一般為1～5V/cm。待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時(shí)，停止電泳取出凝膠置于紫外燈下觀察和照相，并與核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物比較被擴(kuò)增產(chǎn)物的大小注意說(shuō)明1.為避免外源DNA等因素的污染，PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理。2.該實(shí)驗(yàn)所需材料可以直接從公司購(gòu)買，緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在-20℃儲(chǔ)存。使用前，將所需試劑從冰箱拿出，放在冰塊上緩慢融化。3.在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時(shí)，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換。4.在進(jìn)行操作時(shí)，一定要戴好一次性手套。PCR擴(kuò)增不能隨意加大試劑用量。結(jié)果分析與評(píng)價(jià)(1)你是否成功擴(kuò)增出DNA片段？判斷的依據(jù)是什么？(2)你進(jìn)行電泳鑒定的結(jié)果是幾條條帶？如果不止一條條帶，請(qǐng)分析產(chǎn)生這個(gè)結(jié)果的可能原因。

可以在紫外燈下直接觀察到DNA條帶的分布及粗細(xì)程度來(lái)評(píng)價(jià)擴(kuò)增的結(jié)果。進(jìn)行電泳鑒定的結(jié)果應(yīng)該是一條條帶，該片段大小約為750bp。

如果擴(kuò)增不成功，可能的原因有：漏加了PCR的反應(yīng)成分，各反應(yīng)成分的用量不當(dāng)，PCR程序設(shè)置不當(dāng)?shù)?。如果擴(kuò)增結(jié)果不止一條條帶，可能的原因有：引物設(shè)計(jì)不合理，它們與非目的序列有同源性或容易形成二聚體；退火溫度過(guò)低；DNA聚合酶的質(zhì)量不好等。1.在實(shí)際種植過(guò)程中，棉鈴蟲(chóng)是否對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因的抗蟲(chóng)棉產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗性？證據(jù)是什么？

科研人員對(duì)長(zhǎng)江流域種植的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，2011年的數(shù)據(jù)顯示，大部分轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉品種的抗蟲(chóng)性屬于中抗及高抗水平；2013年的數(shù)據(jù)表明，如果棉田周圍存在大量天然庇護(hù)所，靶標(biāo)害蟲(chóng)棉鈴蟲(chóng)、紅鈴蟲(chóng)等并未對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因的抗蟲(chóng)棉產(chǎn)生明顯抗性。在我國(guó)、澳大利亞、印度等國(guó)的多個(gè)實(shí)驗(yàn)室中，通過(guò)毒素的連續(xù)抗性篩選，已經(jīng)培育出多個(gè)高抗水平的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉品種。

到社會(huì)中去2.科研工作者在沒(méi)有發(fā)現(xiàn)棉鈴蟲(chóng)出現(xiàn)抗性之前，就應(yīng)該想辦法應(yīng)對(duì)。他們想出的延緩棉鈴蟲(chóng)對(duì)Bt抗蟲(chóng)蛋白產(chǎn)生抗性的措施有哪些？這些措施的原理是什么？有效嗎？

科研人員想出的延緩棉鈴蟲(chóng)對(duì)Bt抗蟲(chóng)蛋白產(chǎn)生抗性的措施有很多，主要可以分為以下幾個(gè)方面。（1）基因策略。該策略是在分子水平上提高轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的抗蟲(chóng)性和抗蟲(chóng)持久性。包括在棉花中轉(zhuǎn)入多個(gè)殺蟲(chóng)基因、構(gòu)建組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子、提高殺蟲(chóng)基因的表達(dá)量等。例如，最早種植的抗蟲(chóng)棉中只轉(zhuǎn)入了一種Bt基因，抗性比較單一；現(xiàn)在經(jīng)常將兩種或兩種以上的Bt基因(如CrylAa和CrylAc基因)同時(shí)轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞，這樣既可以提高殺蟲(chóng)活性，又可以延緩害蟲(chóng)抗性的產(chǎn)生和發(fā)展，還可以通過(guò)不同基因間的互補(bǔ)作用擴(kuò)大抗蟲(chóng)范圍。

到社會(huì)中去（2）田間策略。這是在種植時(shí)采取的措施，如提供庇護(hù)所、與其他作物輪作或套種等。例如，在澳大利亞和美國(guó)等地普遍采取的措施是在轉(zhuǎn)基因棉田中，總面積的4%種植不使用任何殺蟲(chóng)劑的非轉(zhuǎn)基因棉花，或在轉(zhuǎn)基因棉田周圍種植20%～30%面積的可使用化學(xué)殺蟲(chóng)劑的非轉(zhuǎn)基因棉花；在印度，一些地區(qū)要求，在轉(zhuǎn)基因棉田周圍至少種植5行或者20%面積的非轉(zhuǎn)基因棉花。我國(guó)除新疆棉區(qū)及大型農(nóng)場(chǎng)需設(shè)計(jì)專門(mén)的庇護(hù)所外，其他棉區(qū)如長(zhǎng)江、黃河流域棉區(qū)多采用多種作物混作的耕作制度(如將轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉與番茄、向日葵、高梁、玉米、辣椒等棉鈴蟲(chóng)寄主作物混作)，這些作物可以構(gòu)成天然的庇護(hù)所，一般無(wú)須種植非轉(zhuǎn)基因棉花作為庇護(hù)所。

到社會(huì)中去

這樣做的原理是為少部分害蟲(chóng)提供一個(gè)正常的取食環(huán)境，始終保持一定的敏感目標(biāo)害蟲(chóng)種群。這樣，即使目標(biāo)害蟲(chóng)對(duì)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉產(chǎn)生了抗性，但是因?yàn)槠渑c敏感目標(biāo)害蟲(chóng)交配，后代抗性基因會(huì)發(fā)生分離，所以抗性目標(biāo)害蟲(chóng)的種群也不至于迅速增加。（3）國(guó)家宏觀調(diào)控策略。該策略包括實(shí)施分區(qū)種植管理、加強(qiáng)抗性監(jiān)測(cè)、進(jìn)行嚴(yán)格的安全生評(píng)價(jià)等。網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建思維導(dǎo)圖基礎(chǔ)檢測(cè)1我國(guó)科學(xué)家將富含賴氨酸的蛋白質(zhì)編碼基因?qū)肽持参?，富含賴氨酸的蛋白質(zhì)編碼基因編碼區(qū)共含678個(gè)堿基對(duì)，科學(xué)家利用了XbaⅠ和SacⅠ兩種限制酶，并運(yùn)用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將富含賴氨酸的蛋白質(zhì)編碼基因?qū)胫参锶~片細(xì)胞，再