(高清版)GBT 40899-2021 化妝品中禁用物質(zhì)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的測(cè)定 高效液相色譜法

化妝品中禁用物質(zhì)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的測(cè)定高效液相色譜法2021-11-26發(fā)布2022-06-01實(shí)施國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中國(guó)輕工業(yè)聯(lián)合會(huì)提出。本文件由全國(guó)香料香精化妝品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC257)歸口。本文件起草單位：中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院、上海香料研究所。Ⅱ本文件的被測(cè)物質(zhì)是我國(guó)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范(2015年版)》規(guī)定的禁用原料。禁用原料是指不得作為化妝品原料使用的物質(zhì)。《化妝品安全技術(shù)規(guī)范(2015年版)》規(guī)定：若技術(shù)上無(wú)法避免禁用物質(zhì)作為雜質(zhì)帶入化妝品時(shí)，國(guó)家有限量規(guī)定的應(yīng)符合其規(guī)定；未規(guī)定限量的，應(yīng)進(jìn)行安全性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，確保在正常、合理及可預(yù)見(jiàn)的使用條件下不得對(duì)人體健康產(chǎn)生危害。目前我國(guó)尚未規(guī)定這些物質(zhì)的限量值。本文件的制定，僅對(duì)化妝品中測(cè)定這些物質(zhì)提供檢測(cè)方法。1化妝品中禁用物質(zhì)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的測(cè)定高效液相色譜法警示——使用本文件的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本文件并未指出所有可能的安全問(wèn)題。使用者有責(zé)任采用適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?，并保證符合國(guó)家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。本文件描述了化妝品中禁用物質(zhì)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的高效液相色譜測(cè)定方法的原理、試本文件適用于水劑類、乳液類和膏霜類化妝品中溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的測(cè)定。本文件的方法檢出限和定量限： 溴米索伐與卡溴脲：方法檢出限均為1mg/kg,定量限均為5mg/kg:——卡立普多：方法檢出限為10mg/kg,定量限為20mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理樣品經(jīng)溶劑超聲提取后，提取液經(jīng)離心、氮吹、重新定容并過(guò)濾，以配備二極管陣列檢測(cè)器(用于檢測(cè)溴米索伐、卡溴脲)和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(用于檢測(cè)卡立普多)的高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)保留時(shí)間初步定性，外標(biāo)法定量。5試劑和材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?.540%乙腈溶液：量取40mL乙腈(5.3)加入100mL容量瓶中，加水稀釋并定容至刻度。5.6溴米索伐、卡溴脲和卡立普多標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度不小于98%。三種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的英文名稱、CAS號(hào)、分2子式、相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附錄A中表A.1。5.7溴米索伐標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取溴米索伐標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(5.6)100mg,精確到0.1mg,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用40%乙腈溶液(5.5)溶解并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4℃避光保存，有效期2個(gè)月。5.8卡溴脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取卡溴脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(5.6)100mg,精確到0.1mg,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用40%乙腈溶液(5.5)溶解并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4℃避光保存，有效期2個(gè)月。5.9卡立普多標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取卡立普多標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(5.6)100mg,精確到0.1mg,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用40%乙腈溶液(5.5)溶解并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4℃避光保存，有效期2個(gè)月。6.1高效液相色譜(HPLC)儀：配有二極管陣列檢測(cè)器和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。6.2液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)儀：配有電噴霧離子源(ESI)。6.3分析天平：感量0.0001g和0.001g。6.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min。6.6氮吹儀。稱取1.0g樣品，精確全0.001g,置于10mL具塞比色管(6.7)中，加入甲醇(5.2)定容至10mL,超聲提取20min,冷卻至室溫。取定容液1mL氮吹至干，用流動(dòng)相重新定容至1mL,經(jīng)微孔濾膜(5.11)過(guò)濾后待測(cè)。稱取1.0g樣品，精確至0.001g,置于10mL具塞比色管(6.7)中，加入甲醇(5.2)定容至10mL,混勻，加入2g氯化鈉(5.4)破乳，超聲提取20min,冷卻至室溫。移取所得懸浮液5mL于15mL具塞塑料離心管(5.10)中，5000r/min離心5min。取上清液1mL氮吹至干，用流動(dòng)相重新定容至1mL,經(jīng)微孔濾膜(5.11)過(guò)濾后待測(cè)。平行做兩份試驗(yàn)。3GB/T40899—20217.2測(cè)定條件高效液相色譜測(cè)定的參考條件如下：b)流動(dòng)相：乙腈+水=40+60(體積比),等度洗脫；f)二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)條件：檢測(cè)波長(zhǎng)210nm;g)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)條件：霧化器冷卻模式；漂移管溫度50℃;載氣為氮?dú)?，壓力?76kPa(40psi);放大系數(shù)為500。7.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制7.3.1溴米索伐和卡溴脲標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制使用吸量管分別移取0.5mL、1mL、5mL、10mL、25mL溴米索伐標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.7)和卡溴脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.8)于50mL容量瓶中，使用流動(dòng)相定容至刻度，得到質(zhì)量濃度為10mg/L、20mg/L、100mg/L、200mg/L和500mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按7.2給出的測(cè)定條件以濃度由低到高順序進(jìn)樣，使用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，以質(zhì)量濃度為自變量，以峰面積為因變量進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.3.2卡立普多標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制使用吸量管分別移取2.5mL、5mL、10mL、15mL、25mL卡立普多標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.9)于50mL容量瓶中，使用流動(dòng)相定容至刻度，得到質(zhì)量濃度為50mg/L、100mg/L、200mg/L、300mg/L和500mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按7.2給出的測(cè)定條件以濃度由低到高順序進(jìn)樣，使用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，以質(zhì)量濃度的常用對(duì)數(shù)值為自變量，以色譜峰面積的常用對(duì)數(shù)值為因變量進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。三種待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖見(jiàn)附錄B中圖B.1。7.4測(cè)定按7.2測(cè)定條件對(duì)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)保留時(shí)間初步定性，外標(biāo)法定量。待測(cè)物含量應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍之內(nèi)，超出線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)行分析。注：若檢出陽(yáng)性樣品，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行確證試驗(yàn)(見(jiàn)附錄C)。7.5空白試驗(yàn)除不稱取樣品外，按7.1～7.4步驟與測(cè)試平行進(jìn)行測(cè)定。8結(jié)果計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量按式(1)計(jì)算：式中：o;——樣品中待測(cè)物的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);…………4p;——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的樣品溶液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L)p?——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的空白溶液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L)V——樣品溶液最終定容體積，單位為毫升(mL);m——樣品質(zhì)量，單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。9回收率在添加濃度5mg/kg～50mg/kg范圍內(nèi)，溴米索伐的回收率為87.2%～105.3%,卡溴脲的回收率為90.1%～103.9%;在添加濃度20mg/kg～200mg/kg范圍內(nèi)，卡立普多的回收率為90.1%~10精密度在重復(fù)性條件下獲得兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過(guò)算術(shù)平均值的10%。5(資料性)溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)式見(jiàn)表A.1。序號(hào)中文名稱英文名稱CAS號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量結(jié)構(gòu)式1溴米索伐BromisovalC?H?BrN?O?HNH?2卡溴脲C?H??BrN?O?3卡立普多6almALslIimVGB/T40899—2021almALslIimV溴米索伐、卡溴脲和卡立普多標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖溴米索伐、卡溴脲和卡立普多標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖見(jiàn)圖B.1。時(shí)問(wèn)/mina)溴米索伐和卡溴脲的高效液相色譜圖b)卡立普多的高效液相色譜圖注：三種待測(cè)物質(zhì)量濃度均為100mg/L;溴米索伐的保留時(shí)間為5.34min,卡溴脲為8.36min,卡立普多為10.96min。圖B.1溴米索伐、卡溴脲和卡立普多標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖(資料性)確證試驗(yàn)C.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：b)流動(dòng)相：乙腈(5.3)-0.1%甲酸水溶液(50+50,體積比),等度洗脫；C.2質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：g)數(shù)據(jù)采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。C.3定性測(cè)定按液相色譜-質(zhì)譜條件測(cè)定樣液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。樣品溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值需在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，如超過(guò)線性范圍則稀釋后再進(jìn)樣測(cè)定。如果所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇的離子比與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)豐度一致，允許相對(duì)偏差不超過(guò)表C.1規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中含有溴米索伐、卡溴脲或卡立普多。三種待測(cè)物的選擇