血液分析儀器-袁汀

血細胞分析儀器血細胞的起源、分化、成熟PSC白細胞從原始細胞到成熟，變化是核算含量從多到少，從疏松到致密。一、 發(fā)展史手工計數(shù)儀器簡單計數(shù)兩分群三分群五分群五分群＋網(wǎng)織紅20世紀40年代末，電阻抗法微粒子計數(shù)專利。50年代，CoulterModelA型用于臨床60年代，測定參數(shù)達7項。70年代，全血細胞計數(shù)（CBC）。80年代，雙通道、白細胞兩分群、三分群、五分群。90年代以來，多功能、多參數(shù)。二、血細胞分析儀分類按自動化程度：半自動、全自動BCA；按檢測原理：電阻抗型、聯(lián)合檢測型、干式檢測型BCA；按對白細胞的分類水平：二分群、

三分群、五分群、五分群＋網(wǎng)織紅BCA。三、血細胞分析儀檢測原理一、庫爾特原理：①

血細胞與電解質(zhì)溶液相比,為相對的不良導體，其阻值大于稀釋液；②細胞通過檢測器的微孔時，內(nèi)外電極之間的恒流源電路上，電阻值瞬間增大，產(chǎn)生一個電壓脈沖信號；③脈沖信號數(shù)，等于通過的細胞數(shù)，脈沖信號幅度大小與細胞體積大小成正比。二、電阻抗基本原理

根據(jù)血細胞的非傳導性的性質(zhì)，以對電解質(zhì)溶液中懸浮顆粒在通過計數(shù)小孔時引起的電阻變化進行檢測為基礎，這一原理的應用實現(xiàn)了血細胞計數(shù)的自動化，此方法稱為庫爾特原理。電阻抗基本原理電阻抗法白細胞分群從電阻抗的原理可以看出不同體積的白細胞通過小孔時，產(chǎn)生的脈沖大小不同，而不同類型的白細胞(如淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞)經(jīng)溶血作用后有明顯的差異，因此根據(jù)脈沖的大小，即可人為地將血中的白細胞分成幾群電阻抗法白細胞分類原理經(jīng)過溶血劑處理后的白細胞根據(jù)體積大小可以初步確認其相應的種類：第一群〔小細胞群)是淋巴細胞(LYM)，第二群是單個核細胞區(qū)(MONO)，也被稱為中間細胞(MID)；相當于粒細胞的細胞群(GRAN)位于第三群(大細胞群)35-90fl的顆粒被計數(shù)為淋巴細胞，90-160fl的顆粒計數(shù)為單個核細胞，160fl以上的顆粒計數(shù)為粒細胞紅細胞計數(shù)原理原理同白細胞檢測，紅細胞通過小孔時，形成相應大小的脈沖，脈沖的多少即紅細胞的數(shù)目，脈沖的高低代表單個脈沖細胞的體積血紅蛋白測定原理被稀釋的血液加入溶血劑后，紅細胞溶解，釋放血紅蛋白，后者與溶血劑中有關成分結合形成血紅蛋白的衍生物，進入血紅蛋白測試系統(tǒng)，在特定波長(一般在530—550nm）下比色，吸光度變化與液體中血紅蛋白含量成正比血小板測定原理血小板隨紅細胞一起在一個系統(tǒng)中進行檢測根據(jù)不同的閾值、計算機分別給出血小板與紅細胞數(shù)目檢測流程聯(lián)合檢測型血細胞分析儀一、容量、電導、光散射（VCS）體積電阻抗血細胞計數(shù)、體積測量電導性電磁探針內(nèi)部結構光散射激光器顆粒的構型、質(zhì)量容量、電導、光散射（VCS）檢測VCS計數(shù)技術可使血細胞未經(jīng)任何處理，在與體內(nèi)形態(tài)完全相同的自然狀態(tài)下得出檢測結果。首先在標本中加入只作用紅細胞的溶血劑使紅細胞溶解，然后加入抗溶血劑起中和前溶血劑的作用，使白細胞表面、胞質(zhì)及細胞大小等特征仍然保持與體內(nèi)相同狀態(tài)，接受VCS三種技術同時檢測檢測原理體積（V）測量使用的是電阻抗法，脈沖峰大小決定細胞體積，脈沖的數(shù)量決定于細胞數(shù)量電導性（C）根據(jù)細胞壁能產(chǎn)生高頻電流的性能采用高頻電磁探針，測量細胞內(nèi)部結構，細胞核、細胞質(zhì)的比例，細胞內(nèi)質(zhì)粒大小和密度光散射（S）在10°~70°對每一個細胞掃描分析，提供細胞結構（核分葉、核形態(tài)），特別是對細胞顆粒的構型和質(zhì)量的鑒別VCS檢測VCS

運用V、C、S三種探針,在流式通道的某一位點,對通過的單列白細胞，進行逐個的、同時的、三重的檢測，以及三維分析,以確定其亞群性質(zhì)。激光---分析細胞的顆粒特性低頻波---分析細胞體積高頻波---分析細胞核型三維分析技術將檢測過的8,192個細胞分布到一個以V、C、S為三維坐標的空間內(nèi)，顯示出細胞群特征。高智能的計算機軟件分析細胞群的位置、相對密度、輪廓和大小。三維坐標的數(shù)據(jù)分析位點多過16×106個。DIFF通道散點圖WBC-D幼稚細胞有核紅細胞聯(lián)合檢測型血細胞分析儀二、電阻抗、射頻嗜酸性粒細胞檢測系統(tǒng)嗜堿性粒細胞檢測系統(tǒng)淋巴、單核和粒細胞檢測系統(tǒng)幼稚細胞檢測系統(tǒng)淋巴、單核和粒細胞檢測系統(tǒng)

采用電阻抗與射頻聯(lián)合檢測直流電及射頻兩種電流．直流電不能透過細胞漿，僅能測量細胞大小，而射頻可透入細胞內(nèi)，測量核大小及顆粒的多少，因此細胞進入小孔時產(chǎn)生兩個不同的脈沖信號脈沖的高低分別代表細胞的大小(Dc)和核及顆粒的密度(RF)，以DC信號為橫坐標，RF為縱坐標，就可根據(jù)兩個信號作為一個細胞定位于二維的細胞散射圖電阻抗與射頻法（能透入細胞內(nèi)，測量核的大小及顆粒的多少）。RF:射頻電流細胞內(nèi)部結構信息DC:直流電細胞大小的信息幼稚細胞檢測系統(tǒng)原理幼稚細胞膜上脂質(zhì)較成熟細胞少，在細胞懸液中加入硫化氨基酸，結合在幼稚細胞上的氨基酸較成熟細胞多，且對溶血劑有抵抗作用，當加入溶血劑，成熟細胞溶解，而幼稚細胞不受破壞聯(lián)合檢測型血細胞分析儀三、多角度激光散射、電阻抗

檢測細胞在多個角度的散射光的強度，反映細胞的大小、核形、核質(zhì)比以及顆粒的性質(zhì)多角度激光反應細胞分類原理采用半導體激光及流式原理從兩個角度分析白細胞，低角度（1°~6°）散射光分析白細胞體積大小，高角度散射光（8°~20°）分析白細胞的內(nèi)部結構--0/10/90/90D內(nèi)部1°-6°

8°-20°DIFF通道FSC：前向散射光：體積SSC：側向散射光：復雜程度SFL：側向熒光：DNA/RNA含量多角度激光反射原理白細胞分類通道全血在加入溶血劑(FD-I)作用后，嗜酸性粒細胞內(nèi)顆粒染色，而且除嗜酸性粒細胞外其他白細胞有些皺縮，儀器從低角度及高角度分析白細胞，獲得白細胞四個亞群（LYM、MONO、EO、NEU+BASO）白細胞分類通道WBC/BASO通道STROMATOLYSER-FB嗜堿細胞保持原狀除嗜堿細胞以外的白細胞溶解為裸核完全溶解紅細胞、血小板嗜堿其他WBC縱坐標：前向散射光（FSC），反映細胞大小橫坐標：側向散射光（SSC），反映細胞復雜程度DIFF通道WBC-B四、激光與細胞化學檢測原理

BayerADVIA120利用激光散射和過氧化物酶染色技術白細胞計數(shù)及分類嗜堿性粒細胞/分葉核粒細胞測量紅細胞/血小板測量血紅蛋白測量聯(lián)合檢測型血細胞分析儀ADVIA120過氧化物酶通道：由于嗜酸性細胞有很強的過氧化物酶活性，中性粒細胞有較強的過氧化物酶活性，單核細胞次之，而淋巴細跑和嗜堿性粒細胞無此酶。將血液經(jīng)過過氧化物酶染色，胞質(zhì)即出現(xiàn)不同酶化學反應血小板檢測原理根據(jù)同質(zhì)性球體光散射的Mie理論，當球形化的血小板通過激光照射區(qū)時，在兩個角度測定激光的散射強度：高角度（5°~15°）測細胞的折射指數(shù)，與細胞密度有關；低角度（2°~3°）測量細胞大小血小板檢測原理網(wǎng)織紅細胞檢測原理1.非熒光染料：新亞甲藍對RET染色，使紅細胞內(nèi)Hb溢出后變?yōu)椤坝凹毎?，減少對RET的干擾，采用VCS計術測定。2、熒光染料染色法：聚次甲基染RNA、噁嗪染DNA法，氧氮雜己750染RNA法，非對稱菁染RNA法，噻唑橙染RNA法等。以氧氮雜芑750為染料，與網(wǎng)織紅細胞中的RNA結合，激光（670nm）以低角度和高角度散射測量一個網(wǎng)織紅細胞，分別測定網(wǎng)織紅細胞的體積和總數(shù)及血紅蛋白，同時在測量染色后網(wǎng)織紅細胞發(fā)出的熒光網(wǎng)織紅細胞檢測原理血紅蛋白測定原理

除干式、無創(chuàng)型外，各型BCA對血紅蛋白測定都采用光電比色原理血細胞懸液中加入溶血劑后，紅細胞溶解釋放出血紅蛋白，后者與溶血劑中有關成分結合形成血紅蛋白衍生物，進入血紅蛋白測試系統(tǒng)特定波長(530～550nm)下進行光電比色二、儀器分型檢測原理基本結構四、儀器基本結構機械系統(tǒng)電學系統(tǒng)血細胞檢測系統(tǒng)血紅蛋白測定系統(tǒng)計算機鍵盤控制系統(tǒng)二、儀器分型檢測原理基本結構

1.機械系統(tǒng)包括機械裝置（如全自動有進樣針、分血器、稀釋器、混勻器、定量裝置等）和真空泵，以完成樣本的定量吸取、稀釋、傳送、混勻，以及將樣本移入各種參數(shù)的檢測區(qū)二、儀器分型檢測原理基本結構

2.電學系統(tǒng)包括主電源、電壓元器件、控溫裝置、自動真空泵電子控制系統(tǒng)，以及儀器的自動監(jiān)控、故障報警和排除等二、儀器分型檢測原理基本結構

3.血細胞檢測系統(tǒng)國內(nèi)常用的血細胞分析儀，使用的檢測技術可分為電阻抗檢測技術和光散射檢測技術兩大類二、儀器分型檢測原理基本結構電阻抗檢測技術：由檢測器、放大器、甄別器、閾值調(diào)節(jié)器、檢測計數(shù)系統(tǒng)和自動補償裝置組成流式光散射檢測技術：由激光光源、檢測裝置和檢測器、放大器、甄別器、閾值調(diào)節(jié)器、檢測計數(shù)系統(tǒng)和自動補償裝置組成二、儀器分型檢測原理基本結構4.血紅蛋白測定系統(tǒng)由光源、透鏡、濾光片、流動比色池和光電傳感器等組成。

5.計算機和鍵盤控制系統(tǒng)

二、儀器分型檢測原理基本結構儀器的性能指標、評價與調(diào)校（一）血細胞分析儀的性能指標

1.測試參數(shù)

2.細胞形態(tài)學分析

3.測試速度

4.樣本量

5.精密度與示值范圍

6.打印

（二）血細胞分析儀的評價

ICSH公布了電子血細胞分析儀的評價方案：在細胞計數(shù)、血紅蛋白測定方面，要評價儀器測試樣本的總變異、攜帶污染率、線性范圍、可比性和準確性等三、儀器的性能指標、評價與調(diào)校（三）血細胞分析儀的調(diào)校

出廠前已經(jīng)過廠方技術鑒定合格，但由于運輸振動或因故障維修后或長時間停用后再啟用等原因，以及正常使用半年以上或認為有必要時，都必須對儀器進行調(diào)校及性能測試，這對了解儀器性能，發(fā)現(xiàn)問題，確保檢驗質(zhì)量有重要意義三、儀器的性能指標、評價與調(diào)校五、血細胞分析儀的維護與常見故障處理

（一）血細胞分析儀的維護1.儀器的保養(yǎng)（1）日保養(yǎng)（2）周保養(yǎng)（3）月保養(yǎng)2.儀器的維護（1）檢測器維護（2）液路維護（3）機械傳動部件維護（4）其他維護1.儀器的保養(yǎng)（1）日保養(yǎng)★檢查廢液桶，去除廢液★在準備菜單下按保養(yǎng)程序★關機過夜1.儀器的保養(yǎng)（2）周保養(yǎng)★在準備狀態(tài)下進入保養(yǎng)程序菜單，對進入檢測器的閥門和檢測器進行徹底清洗。★查看廢液桶，將廢液桶中的廢液全部倒出，清洗廢液桶；若有問題，應及時更換新的廢液桶。1.儀器的保養(yǎng)（3）月保養(yǎng)★在準備狀態(tài)下進入保養(yǎng)程序菜單，對檢測器和廢液容器進行徹底清洗★清洗左右進樣池、分析通道、進樣架。2.儀器的維護（1）檢測器維護全自動血細胞分析儀：只需在管理菜單中雙擊“保養(yǎng)”鍵，即可完成儀器的自動保養(yǎng)。另外，還要在光學檢測部件中清除流動室氣泡和清洗流動室。2.儀器的維護（1）檢測器維護半自動血細胞分析儀：①每天關機前必須將小孔管浸泡于新的稀釋液中；②每日工作完畢，需用清洗劑清洗檢測器至少3次；③需定期卸下檢測器，用專用毛刷，蘸取3%～5%次氯酸鈉溶液旋轉清洗，必要時浸泡清洗，再用放大鏡觀察微孔的清潔度。2.儀器的維護（2）液路維護★在樣品杯中專用加酶清洗液，按動幾次計數(shù)鍵，使比色池和定量裝置及管路內(nèi)充滿清洗液，停機浸泡一夜，再換用稀釋液反復沖洗后使用?！飪x器如長期不用，應將稀釋液導管、清洗劑導管、溶血劑導管等置于去離子水或純水中，按數(shù)次計數(shù)鍵，沖洗掉液體管道內(nèi)的稀釋液，充滿去離子水后關機。2.儀器的維護（2）液路維護2.儀器的維護（3）機械傳動部件維護先用細毛刷將機械傳動裝置周圍的灰塵和污物去除，再按要求加潤滑油，防止機械疲勞、磨損。機械傳動部位的維護2.儀器的維護（4）其他維護★清洗進樣槽★清洗清洗杯★如果分析標本數(shù)達萬次時，應按照要求清洗標本旋轉閥。（二）血細胞分析儀的常見故障處理1.開機時常見故障（1）開機指示燈及顯示屏不亮（2）“WBC”或“RBC”吸液錯誤（3）“WBC”或“RBC”電路錯誤（4）“測試條件需設置”常見故障故障原因處理方法開機指示燈及顯示屏不亮一般屬于電源問題應檢查電源插座是否插好、電源引線是否完好、保險絲是否熔斷。應將電源插座插好，若保險絲熔斷，應更換新的保險絲“WBC”或"RBC"吸液錯誤①稀釋液量不足

②進液管連接錯誤①及時補充稀釋液。

②正確連接進液管“WBC”或“RBC”電路錯誤一般為計數(shù)電路中的故障應參照使用說明書檢查內(nèi)部電路，必要時聯(lián)系廠家工程師更換電路板測試條件需設置一般為備用電池沒電或電路斷電，導致系統(tǒng)儲存的數(shù)據(jù)丟失時有該信息提示應更換電池，重新設置定標系數(shù)或其他條件開機時常見故障、原因及處理方法2.測試過程中常見的錯誤信息（1）堵孔（2）氣泡（3）噪音（4）溫度異常（5）試劑池錯誤（6）進樣錯誤（7）溶血劑錯誤（8）樣本分析錯誤（9）質(zhì)控錯誤（10）其他錯誤常見故障故障原因處理方法堵孔（包括完全堵孔和不完全堵孔）1.儀器長時間不用，試劑中的水分蒸發(fā)、鹽類結晶堵孔1.對于鹽類結晶，可用去離子水浸泡，待結晶完全溶解后，按“CLEAN”鍵進行清洗2.末梢采血不順或用棉球擦拭微量取血管2.對于其他原因造成的堵孔，一般按“CLEAN”鍵進行清洗即可3.抗凝劑量與全血不匹配或靜脈采血不順，有小凝塊3.若以上方法不行，需小心卸下檢測器進行進一步的清理：①用特制的專用小毛刷輕輕反復刷洗微孔去除堵塞物；②將檢測器加水后用洗耳球從其頂端加壓，從而將堵塞物沖走。若無效果，應先用粗細合適的細絲對著微孔來回穿入拉出幾次，再用洗耳球加壓沖出堵塞物；③若以上兩種方法均不行，需用3%～5%的次氯酸鈉溶液清洗，將檢測器內(nèi)裝入該溶液浸泡5～10分鐘，取出，再用洗耳球從其頂端加壓去除堵塞物，最后用蒸餾水將檢測器沖洗干凈，小心裝上，按“CLEAN”鍵清洗4.小孔管微孔蛋白沉積多，需清洗5.樣品杯未蓋好，空氣中的灰塵落入杯中4.若以上三種方法均無效，說明“堵孔”是由泵管損壞造成，應聯(lián)系廠家工程師進行更換血細胞分析儀的常見故障、原因及處理方法血細胞分析儀的常見故障、原因及處理方法常見故障故障原因處理方法氣泡多為壓力計中出現(xiàn)氣泡按“CLEAN”鍵進行清洗噪音由于接地線不良或泵管較臟引起清洗泵管或小孔管，確認接地良好，并且與其他噪音大的儀器設備分開溫度異常1.儀器所在房間溫度不合適1.將房間溫度設定在18～25℃2.其他原因2.若其他原因造成，應聯(lián)系廠家工程師進行維修血細胞分析儀的常見故障、原因及處理方法常見故障故障原因處理方法試劑池錯誤1.一般是由于試劑不足造成的1.需盡快補足試劑2.由于浮動開關缺陷或者液壓系統(tǒng)不正常造成的2.聯(lián)系廠家工程師進行維修進樣錯誤一般是由于標本操作中血量太少未被吸入造成的重新采集標本或手工法進行計數(shù)溶血劑錯誤一般為溶血劑與樣本未充分混合造成的重新測定新的樣本血細胞分析儀的常見故障、原因及處理方法常見