藥用植物種質資源保存規(guī)范

1藥用植物種質資源保存規(guī)范本文件規(guī)定了藥用植物種質資源保存原則、保存方法、質量監(jiān)測與更新以及技術檔案的要求。本文件適用于深圳市藥用植物種質資源的保存。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T2930.2草種子檢驗規(guī)程凈度分析GB/T2930.4草種子檢驗規(guī)程發(fā)芽試驗GB/T2930.8草種子檢驗規(guī)程水分測定GB/T2930.9草種子檢驗規(guī)程重量測定GB/T3543.3農作物種子檢驗規(guī)程凈度分析GB/T3543.4農作物種子檢驗規(guī)程發(fā)芽試驗GB/T3543.6農作物種子檢驗規(guī)程水分測定GB/T3543.7農作物種子檢驗規(guī)程其他項目檢驗GB/T14072—1993林木種質資源保存原則與方法GB/T20399自然保護區(qū)總體規(guī)劃技術規(guī)程SZDB/Z130—2015植物種質資源離體保存庫建設規(guī)范3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1種質資源germplasmresources具有不同遺傳基礎的植物個體和群體的各種繁殖材料總稱。[來源：GB/T14072-1993,2.2,有修改]3.2原地保存conservationinsitu又稱就地保存，指將種質資源在原生地保存。[來源：GB/T14072-1993,2.7]3.3遷地保存conservationexsitu又稱異地保存，指將種質資源遷移出原生地栽培保存。[來源：GB/T14072-1993,2.8]23.4種子保存seedconservation將成熟種子干燥至適宜的含水量，并在適宜的低溫條件下長期保存以維持種子活力的方法。3.5離體保存conservationinvitro將離體培養(yǎng)的小植株、器官、組織、細胞或原生質體等材料，采用適當?shù)姆椒ㄑ泳徎蛲Ｖ蛊渖L，需要時可立即恢復其生長，并再生植株的方法。[來源：SZDB/Z130-2015,3.6,有修改]3.6外植體explant用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細胞以及原生質體等起始培養(yǎng)材料。[來源：SZDB/Z130-2015,3.14]4種質資源保存原則4.1優(yōu)先保存原則優(yōu)先保存本地區(qū)分布的各級重點保護藥用植物、珍稀瀕危藥用植物、嶺南特色藥用植物和有科研價值、生態(tài)價值或經濟價值的藥用植物。4.2分類保存原則針對本地區(qū)珍稀瀕危藥用植物（見表A.1）、各級重點保護藥用植物、在深圳有分布的嶺南特色藥用植物以及其他有經濟和應用價值的藥用植物實施分類保存。對每個物種進行分類標記，特別需要重點保護的物種需要劃定嚴格限制的區(qū)域進行特殊保存。4.3因地制宜原則依據(jù)種質資源的生物學和生態(tài)學習性、瀕危程度、生境破壞程度以及環(huán)境特點等，因地制宜選擇原地保存、遷地保存、種子保存和離體保存等方法。5種質資源保存方法5.1原地保存5.1.1保護區(qū)選址原則依據(jù)不同情況設立兩類保護區(qū)：a）一類是以保護生物多樣性為主，重點關注其中的藥用植物；b）一類是對某一種或幾種藥用植物建立專屬保護區(qū)。保護區(qū)選址應同時滿足以下基本條件：a）植物生境受威脅嚴重，人為干擾加劇；b）生態(tài)系統(tǒng)、氣候環(huán)境、自然條件和種群數(shù)量具有代表性；c）遠離公路、礦區(qū)、工業(yè)設施所在地、規(guī)?；B(yǎng)殖區(qū)、潛在淹沒地、滑坡塌方或規(guī)劃中的建設用地。5.1.2保護區(qū)選址方法3對擬建立保護區(qū)的藥用植物進行全面調查，查明其地理分布，并取樣分析其遺傳多樣性；根據(jù)調查結果和遺傳多樣性分析的數(shù)據(jù)，確定某種藥用植物的遺傳多樣性分布中心；以其遺傳多樣性分布中心確定保護區(qū)具體地理位置。5.1.3保護區(qū)建設根據(jù)主要保存植物的生長、繁殖特點和相關法規(guī)建立以保存藥用植物為核心的自然保護區(qū)，設立核心保護區(qū)和一般控制區(qū)。保護區(qū)的具體規(guī)劃和建設要求參照GB/T20399相關規(guī)定執(zhí)行。5.1.4數(shù)據(jù)觀測和記錄保護區(qū)的藥用植物觀察記錄項目見表B.1。所有的觀測記錄資料應建立詳細的檔案。5.2遷地保存5.2.1條件遵守國際和國內的相關政策和規(guī)定，不收集任何非法購買或不允許收集的物種，不引種攜帶病蟲害或入侵性植物，并具備下列條件之一：a）當藥用植物種群原有生境破碎成斑塊狀，或者原生境不復存在；b）當藥用植物種群數(shù)目下降到極低水平，個體難以繁殖；c）當藥用植物種群的生存環(huán)境突然變化導致面臨生存危機。5.2.2方法主要有傳統(tǒng)的花園、農場、種質資源圃和植物園等形式，參考遷地保存目標植物的生境，重點做好以下工作：a）引進的非本地物種需根據(jù)風險性分析報告決定隔離試種時間，從境外引入的一年生植物不得少于一個生長周期，多年生植物不得少于2年；b）加強栽培管理，保證植物正常生長繁殖，繁殖期管理要有利于促進種群自然繁殖更新；c）需進行復份異地保存，以防止因自然災害或意外導致資源丟失。5.2.3數(shù)據(jù)觀測和記錄建立永久檔案，按照表B.1規(guī)定的內容詳細記錄每個個體的采集情況及栽培管理措施。5.3種子保存5.3.1接納登記接納登記的種子材料按照表B.1規(guī)定的內容填寫基本信息。接納登記時需檢查種子質量、數(shù)量和健康狀況，選擇當季收獲的新種子。5.3.2去雜清選按照GB/T2930.2-2017第6章、GB/T3543.3-1995第5章的規(guī)定，清除雜質、其他植物種子和空癟、霉變種子，種子凈度不低于98%。5.3.3分類、排序、編號、建檔清選好的種子，按科屬分類，依次進行編號、登記，建立檔案。5.3.4重量測定4從凈度分析后并充分混合的凈種子中，分出一部分作為試驗樣品，按需求任選百粒法、千粒法、全量法中的一種測定種子重量，具體測量要求、方法應按照GB/T2930.9-2017第4章、GB/T3543.7-1995第12章中的規(guī)定執(zhí)行。5.3.5發(fā)芽率測定測定種子發(fā)芽率應按以下規(guī)定：a）從待測種子中隨機取數(shù)量相等的3份種子，數(shù)量根據(jù)種子大小而定，中小粒種子（千粒重<100g）每份100粒；大粒種子（100g≤千粒重≤500g）每份50粒；特大粒種子（千粒重>500g）每份25粒；b）種子發(fā)芽率檢測按GB/T2930.4-2017第5章、GB/T3543.4-1995第6章規(guī)定的試驗程序進行，若無規(guī)定，則參照相關文獻或研究獲得適宜方法后進行；c）種子入庫前，一般要求栽培種發(fā)芽率≥85%，野生種、稀有種及特殊遺傳材料發(fā)芽率≥70%。5.3.6干燥符合入庫的種子應及時干燥，干燥時間的長短依藥用植物種子的大小、數(shù)量、最初含水量和干燥條件而定：a）若干燥的種子份數(shù)少，將種子裝入粗紗布袋，按種子與硅膠的重量比為1:1，在干燥器中室溫下脫水干燥；b）若干燥的種子份數(shù)多，在溫度10℃~25℃,相對濕度10%～15%的干燥箱（間）干燥；c）頑拗型種子不耐脫水，需因具體植物材料而定。5.3.7含水量測定按照GB/T2930.8-2017第6章、GB/T3543.6-1995第5章中給出測定程序，根據(jù)植物種子的特性分別選擇低恒溫烘干法、高恒溫烘干法測定種子含水量。5.3.8包裝稱重經干燥處理的種子稱量記錄重量后，及時密封包裝，包裝材料可選擇玻璃罐、塑料瓶、螺紋鋁盒或鋁箔袋等。5.3.9入庫保存根據(jù)種子的特性及保存需求可選擇以下保存方法：a）長期庫保存：貯藏溫度為零下18℃~零下20℃,相對濕度小于50%，種子含水量5%~7%，一般可保存50年以上；b）中期庫保存：貯藏溫度為零下4℃~4℃,相對濕度小于65%，種子含水量5%～9%，一般可保存15年以上；c）短期庫保存：貯藏溫度為10℃~15℃,相對濕度小于65%，種子含水量5%～9%，一般可保存5年；d）頑拗型種子保存：該類種子不耐脫水及低溫，在不影響種子發(fā)芽率的前提下，應盡可能降低貯藏溫度及種子含水量，并添加殺菌劑保存種子，以達到短期貯存的目的；或利用超低溫保存技術（液氮）長期保存頑拗性種子或其離體胚或胚軸，具體的保存方法參照相關文獻或研究獲得適宜方法后進行。5.3.10入庫定位根據(jù)種質庫保存材料的特點，制定庫編號和庫位號的編碼規(guī)則，可以種子入庫年份+采集地首字母+種子入庫先后順序號的格式編號（見圖1），對符合入庫條件的每一份材料編碼后入庫定位保存，并輸入種質資源管理數(shù)據(jù)庫。5圖1入庫編號示例5.4孢子保存孢子的采集和保存需符合以下要求：a）需注意孢子的成熟度和采收時期，避免同時采集不同種類的孢子時出現(xiàn)相互混雜現(xiàn)象；b）采集時將覆有成熟孢子的葉片剪下，蒸餾水沖洗干凈，濾紙吸干水分，紙袋包裝后置于通風干燥處陰干；孢子自然干燥、脫落后收集孢子，容器密封；c）依據(jù)不同植物的特性，選擇4℃、零下15℃~零下20℃或是超低溫（液氮）保存。5.5離體保存5.5.1保存材料選擇來源可靠、種源純正的外植體材料，參照SZDB/Z130－2015中5.3的規(guī)定進行外植體消毒和離體培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)產生的材料作為離體保存的材料。5.5.2保存容器依材料情況選擇不同規(guī)格大小的試管或組培瓶，塑料蓋封口，用標簽寫明種質編號。5.5.3保存條件與數(shù)量根據(jù)保存需求，參照SZDB/Z130－2015中5.4、5.5描述的要求，可選擇以下兩種保存方法：a）常溫保存：保存溫度25℃,環(huán)境相對濕度適宜，光照強度1500lx～3000lx，光照時間10h～16h，培養(yǎng)基依種質資源而定，每份種質資源保存10管（或瓶）以上，每管（或瓶）1~10個繁殖材料，每2～3個月繼代一次；b）低溫保存：保存溫度5℃~18℃,環(huán)境相對濕度適宜，光照強度1500lx～3000lx，光照時間8h～12h，培養(yǎng)基依種質資源而定，每份種質資源保存10管（或瓶）以上，每管（或瓶）1～10個繁殖材料，每12～15個月繼代一次。6種質資源質量監(jiān)測與更新6.1長期庫保存種子材料種子發(fā)芽率測定方法見5.3.5，種子發(fā)芽率監(jiān)測間期為10年；當種子發(fā)芽率低于85%時，種子發(fā)芽率監(jiān)測間期依據(jù)種類的不同而縮短。6.2中期庫保存種子材料種子發(fā)芽率測定方法見5.3.5，種子發(fā)芽率監(jiān)測間期為5年。6.3種子材料更新當入庫保存的種子材料出現(xiàn)下列情況之一時，應繁殖更新：6a）藥用植物種子發(fā)芽率降至50%以下；b）自花授粉藥用植物每份活種子數(shù)量低于600粒，異花授粉藥用植物每份活種子數(shù)量低于800粒；c）當種子在中期庫絕種時，長期庫應繁殖更新。6.4離體保存材料離體保存材料受培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件等影響，培養(yǎng)出的組培苗遺傳特性發(fā)生變化，其形態(tài)上也表現(xiàn)出不同于原種質的特征時（如葉片變細長或不規(guī)則扭曲、植株黃化、白化、植株變矮等），應更新離體保存材料。離體保存的材料變異率應≤2%。7技術檔案種質資源保存相關單位須及時記錄、收集、整理和分析當年的各項技術資料，建立系統(tǒng)的技術檔案；所有檔案資料應同時保存紙質文檔和電子文檔，紙質文檔內容應清晰明確，電子文檔應有備份；每年分類整理，編號目錄，裝訂成冊，歸檔保存。7（資料性）深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄表A.1列出了深圳市珍稀瀕危藥用植物名單。表A.1深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄序號植物書1AngiopterisfokiensisHieron.2BraineainsignisⅡⅡ3欏AlsophiladenticulateBakerⅡⅡ4AlsophilaspinulosaⅡ√Ⅱ5DipterischinensisⅡⅡ6眾Cyrtomiumfalcatum7Phlegmariurusfordii8蕨Loxogramesalicifolia(Makino)9OphioglossumreticulatumLinn.Ⅱ萁OsmundaangustifoliaOsmundajaponicaCeratopterisⅡ柏Selaginellapulvinata(Hook.Amentotaxus√ActinidiafulvicomaⅡActinidiahenryiActinidialatifoliaⅡ8表A.1深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄（續(xù)）序號植物書青IlexgracilifloraCalophyllummembranaceumGardn.瑚AucubachinensisArgyreiaacutaLour.Erycibeobtusifolia蕷DioscoreapersimilisAdenantheramicrospermaTeijsm.檀DalbergiabalansaeEntadaphaseoloides豆OrmosiaemarginataSpatholobussuberectusDunn.SemiliquidambarcathayensisH.T.Ⅱ√IlliciumternstroemioidesA.楠Beilschmiediabrevipaniculata木DysoxylumhongkongenseTonaciliateRoem.Ⅱ√TinosporasagittataArtocarpushypargyreusHance.√ArtocarpusstyracifoliusNepenthesmirabilisCamptothecaacuminateDecne.Ⅱ9表A.1深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄（續(xù)）序號植物書蘭AcamperigidaⅡⅡAnoectochilusⅡⅡAppendiculacornutaⅡⅡArundinagraminifolia(D.ⅡⅡBulbophyllumafineⅡⅡBulbophyllumambrosia(Hance)ⅡⅡBulbophyllumkwangtungenseⅡⅡBulbophyllumⅡⅡCalantheformosanaⅡⅡCalanthetriplicataⅡⅡCleisostomapaniculatumⅡⅡCleisostomaⅡⅡCleisostomasimondiivar.guangdongenseⅡⅡCoelogynefimbriataⅡⅡCymbidiumgoeringiiⅠⅡ蘭EriacorneriRchb.f.ⅡⅡEulophiagramineaⅡⅡGeodorumdensiflorumⅡⅡGodyerafoliosaⅡⅡ表A.1深圳市珍稀瀕危藥用植物資源名錄（續(xù)）序號植物書蘭GodyeraproceraⅡⅡGodyeraseikoomontanaⅡⅡGodyeraviridifloraⅡⅡHabenariadentataⅡⅡHabenariarhodocheilaHance.ⅡⅡHabenarialinguellaⅡⅡLiparisbotanensisⅡⅡLiparisnervosaⅡⅡLiparisnigraⅡⅡLiparisstricklandianaRchb.ⅡⅡLudisiadiscolo