GB+14923-2022實驗動物 遺傳質(zhì)量控制

ICS65.020.30CCSB44中華人民共和國國家標準GB14923—2022代替GB14923—2010實驗動物遺傳質(zhì)量控制Laboratoryanimal—Geneticqualitycontrol2022-12-29發(fā)布2023-07-01實施國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB14923—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB14923—2010《實驗動物哺乳類實驗動物的遺傳質(zhì)量控制》'與GB14923—2010相比'除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外'主要技術變化如下:b)增加了應用CRISPR/Cas9等技術制備基因修飾動物的命名(見4.2.1.11);c)增加了微衛(wèi)星和SNP座位檢測法(見6.2.3)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由中華人民共和國科學技術部提出并歸口。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為:—1994年首次發(fā)布為GB14923—1994'2010年第一次修訂;—本次是第二次修訂。1GB14923—2022實驗動物遺傳質(zhì)量控制1范圍本文件給出了實驗動物的遺傳分類及命名、繁殖方法'以及近交系、遠交群、雜交群動物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測。本文件適用于實驗動物的遺傳質(zhì)量控制。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。近交系inbredstrain一個動物群體中'任何個體基因組中98.6%以上的座位為純合的品系。注:經(jīng)典近交系經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成。品系內(nèi)所有個體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對共同祖先。經(jīng)連續(xù)20代以上親子交配與全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系數(shù)3.2亞系substrain近交系內(nèi)各個分支。注:各個分支的動物之間'因遺傳分化而產(chǎn)生差異。3.3重組近交系recombinantinbredstrain;RI由兩個近交系雜交后'經(jīng)連續(xù)20代以上兄妹交配育成的近交系。3.4重組同類系recombinantcongenicstrain;RC由兩個近交系雜交后'子代與兩個親代近交系中的一個進行數(shù)次回交(通?；亟?次)'再經(jīng)不對特殊基因選擇的連續(xù)兄妹交配(通常大于14代)而育成的近交系。3.5同源突變近交系coisogenicinbredstrain除了某一個特定座位等位基因不同外'其他遺傳基因全部相同的兩個近交系。注:一般由近交系發(fā)生基因突變或者人工誘變(如基因剔除)形成。用近交代數(shù)表示出現(xiàn)突變的代數(shù)'如F110十F23'表示近交系在110代出現(xiàn)突變后再近交23代。3.6同源導入近交系congenicstrain同類系從供體品系中選擇一個特定標記'通過回交方式形成的一個與原近交系只在一個很小染色體片段GB14923—2022上有所不同的近交系。注:隨機挑選后代至少回交10個世代'供體品系的基因組占基因組總量在1%以下。3.7染色體置換系consomicstrainsorchromosomesubstitutionstrains為把某一染色體全部導入到近交系中'反復進行回交而育成的近交系。注:與同類系相同'將F1作為第1個世代'要求至少回交10個世代。3.8核轉(zhuǎn)移系conplasticstrains將某個品系的核基因組移到其他品系細胞質(zhì)后培育的品系。3.9混合近交系mixedinbredstrains由最多3個親本品系(其中一個是重組基因的ES細胞株)混合制作的近交系。互交系advancedintercrossli兩個近交系間繁殖到F2'采取非兄妹交配的互交方式所得到的多個近交系。注:由于其相近基因座位間的重組率較高而被應用于突變基因的精細定位分析?；蛐揎梽游飃eneticmodifiedanimals用基因修飾等技術手段對特定基因改造所獲得的動物。注:包括轉(zhuǎn)基因動物、基因定位突變動物等。遠交群outbredstock為了維持群體的最大雜合度、以非近親交配方式進行繁殖生產(chǎn)的實驗動物種群。不引進外部動物、在群體內(nèi)隨機選擇種動物進行繁殖'以維持有限雜合度的實驗動物種群。雜交群hybrids由兩個不同近交系雜交產(chǎn)生的后代群體。注:子一代簡稱F1。4實驗動物的遺傳分類及命名4.1遺傳分類根據(jù)遺傳特點的不同'實驗動物分為近交系、遠交群(封閉群)和雜交群。4.2命名4.2.1近交系近交系一般以大寫英文字母命名'亦可以用大寫英文字母加阿拉伯數(shù)字命名'符號應盡量簡短。如A系、TA1系等。23GB14923—20224.2.1.2近交代數(shù)近交系的近交代數(shù)用大寫英文字母F表示。例如當一個近交系的近交代數(shù)為87代時'寫成(F87)。如果對以前的代數(shù)不清楚'僅知道近期的近交代數(shù)為25'可以表示為(F?十25)。4.2.1.3亞系的命名亞系的命名方法是在原品系的名稱后加一道斜線'斜線后標明亞系的符號。亞系的符號可以是以下幾種。a)培育或產(chǎn)生亞系的單位或個人的縮寫英文名稱'第一個字母用大寫'以后的字母用小寫。使用縮寫英文名稱應注意不要和已公布過的名稱重復。b)當保持者保持的某個近交系具有兩個以上亞系時'可在數(shù)字后再加保持者的縮寫英文名稱來表示亞系。c)一個亞系在其他機構(gòu)保種'形成了新的群體'在原亞系后加注機構(gòu)縮寫。d)一些建立及命名較早'并為人們所熟知的近交系'亞系名稱可用小寫英文字母表示。示例:BALB/c、C57BR/cd等'作為以上命名方法的例外情況。4.2.1.4重組近交系和重組同類系命名4.2.1.4.1重組近交系的命名在兩個親代近交系的縮寫名稱中間加大寫英文字母X命名。相同雙親交配育成的一組近交系用阿拉伯數(shù)字予以區(qū)分'雌性親代在前'雄性親代在后。示例:由BALB/c與C57BL兩個近交系雜交育成的一組重組近交系'分別命名為CXB1、CXB2…如果雄性親代縮寫為數(shù)字'如CX8'為區(qū)分重組近交組'則用連接符表示為CX8-1、CX8-2…4.2.1.4.2重組同類系的命名在兩個親代近交系的縮寫名稱中間加小寫英文字母c命名'用其中做回交的親代近交系(稱受體近交系)在前'供體近交系在后。相同雙親育成的一組重組同類系用阿拉伯數(shù)字予以區(qū)分。示例:CcS1表示以BALB/c(C)為親代受體近交系'以STS(S)品系為供體近交系'經(jīng)2代回交育成的編號為1的重組同類系。如果雄性親代縮寫為數(shù)字'如Cc8'為區(qū)分不同重組同類組'則用連接符表示為Cc8-1。4.2.1.5同源突變近交系的命名在發(fā)生突變的近交系名稱后加突變基因符號(用英文斜體)組成'二者之間以連接號分開。當突變基因必須以雜合子形式保持時'用“十”號代表野生型基因。示例1:DBA/Ha-D'表示DBA/Ha品系突變基因為D的同源突變近交系。示例2:129S7/SVEVBrd-Fyntm1Sor表示用來源129S7/SVEVBrd品系的AB1ES細胞株制作的Fyn基因變異的同源突變系。示例3:A/Fa—十/c。4.2.1.6同源導入近交系(同類系)的命名由以下幾部分組成:a)接受導入基因(或基因組片段)的近交系名稱;b)提供導入基因(或基因組片段)的近交系的縮寫名稱'并與a之間用英文句號分開;c)導入基因(或基因組片段)的符號(用英文斜體)'與b之間以連字符分開;4GB14923—2022d)經(jīng)第三個品系導入基因(或基因組片段)時'用括號表示;e)當染色體片段導入多個基因(或基因組片段)或座位'在括號內(nèi)用最近和最遠的標記表示出來。示例1:B10.129-H-12b表示該同源導入近交系的遺傳背景為C57BL/10sn(即B10)'導入B10的基因為H-12b'基因提供者為129/J近交系。示例2:C.129P(B6)-Il2tm1Hor為經(jīng)過第三個品系B6導入的。示例3:B6.Cg-(D4Mit25-D4Mit80)/Lt導入的片段標記為D4Mit25-D4Mit80。4.2.1.7染色體置換系的命名表示方法為HOSTSTRAIN-Chr#DONORSTRAIN'如C57BL/6J-Chr19SPR為M.spretus的第19染色體回交于B6的染色體置換系。4.2.1.8核轉(zhuǎn)移系的命名命名方法為NUCLEARGENOME-mtCyTOPLASMICGENOME'如:C57BL/6J-mtBALB/c指帶有C57BL/6J核基因組和BALB/c細胞質(zhì)的品系。這樣的品系是以雄的C57BL/6J小鼠和雌的BALB/c小鼠交配'子代雌鼠與C57BL/6J雄鼠反復回交10代而成。4.2.1.9混合近交系的命名混合近交系的命名分兩種情況:a)兩個品系縮寫之間用分號'如:B6;129-Acvr2tm1zuk為C57BL/6J和敲除Acvr2基因的129ES細胞株制作的品系;b)兩個以上親本品系制作的近交系'或者受不明遺傳因素影響的突變系'作為混合近交系'用STOCK空格后加基因或染色體異常來表示'如STOCKRb(16.17)5Bnr為具有Rb(16.17)5Bnr的、含有未知或復雜遺傳背景的混合系。4.2.1.10互交系的命名由實驗室縮寫編碼:母系親本'父系親本—G#表示。4.2.1.11基因修飾動物的命名基因修飾動物包括轉(zhuǎn)基因、基因定位突變等動物'其命名按照附錄A。4.2.2遠交群和封閉群的命名遠交群由2個~4個大寫英文字母命名'種群名稱前標明保持者的英文縮寫名稱'第一個字母需大寫'后面的字母小寫'一般不超過4個字母。保持者與種群名稱之間用冒號分開。示例1:N:NIH'表示由縮寫為N的機構(gòu)保持的NIH遠交群小鼠。某些命名較早'又廣為人知的遠交群動物'名稱與上述規(guī)則不一致時'仍可沿用其原來的名稱。示例2:wistar大鼠、ddy小鼠等。把保持者的縮寫名稱放在種群名稱的前面'而二者之間用冒號分開'是遠交群動物與近交系命名中最顯著的區(qū)別。除此之外'近交系命名中的規(guī)則及符號也適用于遠交群動物的命名。封閉群的命名組成包含了品系來源以及突變描述'再加上[cc]來表示封閉群。示例3:C57BL/6Tac-Bmp4tm1Blh[cc]表示了C57BL/6Tac近交系來源且攜帶Bmp4tm1Blh突變的封閉群。4.2.3雜交群的命名雜交群按以下方式命名:以雌性親代名稱在前'雄性親代名稱居后'二者之間以大寫英文字母“X”5GB14923—2022相連表示雜交。將以上部分用括號括起'再在其后標明雜交的代數(shù)(如F1、F2等)。對品系或種群的名稱常使用通用的縮寫名稱。示例:(C57BL/6XDBA/2)F1=B6D2F1B6D2F2指B6D2F1同胞交配產(chǎn)生的F2;B6(D2AKRF1)指B6為雌性親代'與(DBA/2XAKR/J)的F1雄性親代回交所得。5實驗動物的繁殖方法5.1近交系動物的繁殖方法選擇近交系動物繁殖方法的原則是保持近交系動物的同基因性及其基因純合性。作為繁殖用原種的近交系動物必須遺傳背景明確'來源清楚'有較完整的資料(包括品系名稱、近交代數(shù)、遺傳基因特點及主要生物學特征等)。引種動物應來自近交系的基礎群(foundationstock)或血緣擴大群(pedigreeexpansionstock)。5.1.3近交系動物的繁殖分為基礎群、血緣擴大群和生產(chǎn)群(productionstock)。當近交系動物生產(chǎn)供應數(shù)量不是很大時'一般不設血緣擴大群'僅設基礎群和生產(chǎn)群。5.1.4基礎群5.1.4.1設基礎群的目的'一是保持近交系自身的傳代繁衍'二是為擴大繁殖提供種用動物。5.1.4.2基礎群嚴格以全同胞兄妹交配方式進行繁殖。5.1.4.3基礎群應設動物個體記錄卡(包括品系名稱、近交代數(shù)、動物編號、出生日期、雙親編號、離乳日期、交配日期、生育記錄等)和繁殖系譜。5.1.4.4基礎群動物不超過5代~7代都應能追溯到一對共同祖先。5.1.5血緣擴大群5.1.5.1血緣擴大群的種源來自基礎群。5.1.5.2血緣擴大群以全同胞兄妹交配方式進行繁殖。5.1.5.3血緣擴大群動物應設繁殖記錄卡。5.1.5.4血緣擴大群動物繁殖3代后必須從基礎群重新引入新的種源。5.1.6生產(chǎn)群5.1.6.1設生產(chǎn)群的目的是生產(chǎn)供應實驗用近交系動物'生產(chǎn)群種源來自基礎群或血緣擴大群。5.1.6.2生產(chǎn)群動物一般以隨機交配方式進行繁殖。5.1.6.3生產(chǎn)群動物應設繁殖記錄卡。5.1.6.4生產(chǎn)群動物隨機交配繁殖代數(shù)不應超過4代。5.2遠交群和封閉群動物的繁殖方法選擇遠交群動物繁殖方法的原則是盡量保持遠交群的動物的基因異質(zhì)性及多態(tài)性'避免近交系數(shù)6GB14923—2022隨繁殖代數(shù)增加而過快上升。5.2.2引種作為繁殖用原種的遠交群動物應遺傳背景明確'來源清楚'有較完整的資料(包括種群名稱、來源、遺傳基因特點及主要生物學特性等)。為保持遠交群動物的遺傳異質(zhì)性及基因多態(tài)性'引種動物數(shù)量應足夠多'小型嚙齒類遠交群動物引種數(shù)目大于或等于25對。5.2.3繁殖為保持遠交群動物的遺傳基因的穩(wěn)定'種群應足夠大'并避免近親交配。根據(jù)遠交群的大小'選用循環(huán)交配法等方法進行繁殖。封閉群的繁殖方式同遠交群。具體方法見附錄B。5.3雜交群的繁殖方法將適齡的雌性親代品系動物與另一個品系雄性親代動物雜交'即可得到F1動物。雌雄親本交配順序不同'得到的F1動物也不一樣。F1動物自繁成為F2動物。除特殊需要外F1動物一般不進行繁殖。6近交系動物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測6.1近交系動物的遺傳質(zhì)量標準近交系動物應符合以下要求:a)具有明確的品系背景資料'包括品系名稱、近交代數(shù)、遺傳組成、主要生物學特性等'并能充分表明新培育的或引種的近交系動物符合近交系定義;b)用于近交系保種及生產(chǎn)的繁殖系譜及記錄卡應清楚完整'繁殖方法科學合理;c)經(jīng)遺傳檢測(生化標記'免疫標記基因、DNA多態(tài)性檢測法等)質(zhì)量合格。6.2近交系小鼠、大鼠遺傳檢測方法及實施6.2.1生化標記檢測對基礎群'凡在子代留有種鼠的雙親動物都應進行檢測。對生產(chǎn)群'按表1要求從每個近交系中隨機抽取成年動物'雌雄各半'一般不超過30只。表1抽樣數(shù)量單位為只雌性種鼠數(shù)量(N)抽樣數(shù)量≤1006>100N×6%6.2.1.2生化標記基因的選擇及常用近交系動物的遺傳概貌近交系小鼠選擇位于10條染色體上的14個生化座位'近交系大鼠選擇位于6條染色體上的11個生7GB14923—2022化座位'作為遺傳檢測的生化標記。以上生化標記基因的名稱及常用近交系動物的遺傳概貌見附錄C。6.2.1.3結(jié)果判斷按表2進行結(jié)果判定。表2檢測結(jié)果的判定檢測結(jié)果判斷處理與標準遺傳概貌完全一致未發(fā)現(xiàn)遺傳變異'遺傳質(zhì)量合格 有一個座位的標記基因與標準遺傳概貌不一致可疑增加檢測座位數(shù)目和增加檢測方法后重檢'確實只有一個標記基因改變可命名為同源突變系兩個或兩個以上座位的標記基因與標準遺傳概貌不一致不合格淘汰'重新引種6.2.2免疫標記檢測6.2.2.1皮膚移植法:每個品系隨機抽取至少10只相同性別的成年動物'進行同系異體皮膚移植。移植全部成功者為合格'發(fā)生非手術原因引起的移植物的排斥判為不合格。6.2.2.2微量細胞毒法:按照6.2.1.1的抽樣數(shù)量檢測小鼠H-2單倍型'結(jié)果符合標準遺傳概貌的為合格'否則為不合格。6.2.3DNA多態(tài)性檢測法6.2.3.1微衛(wèi)星檢測法:按6.2.1.1抽樣數(shù)量和6.2.1.3判定原則'選擇合適的微衛(wèi)星座位檢測動物'遺傳概貌見附錄D。6.2.3.2SNP檢測法:按6.2.1.1抽樣數(shù)量和6.2.1.3判定原則'選擇合適的SNP座位檢測動物'遺傳概貌見附錄E。6.2.4其他方法除以上兩種方法外'還可選用其他方法進行遺傳質(zhì)量檢測'如毛色基因測試(coatcolorgenetes-ting)、下頜骨測量法(mandiblemeasurement)、染色體標記檢測(chromosomemarkerstesting)、基因組測序法(genomicsequence)等。6.3其他動物遺傳檢測方法其他近交系動物參照6.2建立遺傳檢測方法'小型豬的微衛(wèi)星座位信息見附錄F。6.4檢測時間間隔近交系動物生產(chǎn)群每年至少進行一次遺傳質(zhì)量檢測。7遠交群動物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測7.1遠交群動物的遺傳質(zhì)量標準遠交群動物應符合以下要求:a)具有明確的遺傳背景資料'來源清楚'有較完整的資料(包括種群名稱、來源、遺傳基因特點及8GB14923—2022主要生物學特性等);b)用于保種及生產(chǎn)的繁殖系譜及記錄卡清楚完整'繁殖方法科學合理;c)封閉繁殖'保持動物的基因異質(zhì)性及多態(tài)性'避免近交系數(shù)隨繁殖代數(shù)增加而過快上升;d)經(jīng)遺傳檢測[生化標記基因檢測法'DNA多態(tài)性檢測法(DNAPolymorPhisms)等]基因頻率穩(wěn)定'下頜骨測量法(Mandiblemeasurement)判定為相同群體。7.2遠交群動物小鼠、大鼠遺傳檢測方法及實施7.2.1生化標記基因檢測隨機抽取雌雄各25只以上動物進行基因型檢測。7.2.1.2生化標記基因的選擇選擇代表種群特點的生化標記基因'如小鼠選擇位于10條染色體上的14個生化座位'大鼠選擇位于6條染色體上的11個生化座位'作為遺傳檢測的生化標記。7.2.1.3群體評價按照哈代-溫伯格(Hardy-weinberg)定律'無選擇的隨機交配群體的基因頻率保持不變'處于平衡狀態(tài)。根據(jù)各座位的等位基因數(shù)計算封閉群體的基因頻率'進行X2檢驗'判定是否處于平衡狀態(tài)?；蛘哂萌后w內(nèi)遺傳變異采用平均雜合度指標進行評價'當平均雜合度在0.5~0.7時'且期望雜合度與觀測雜合度經(jīng)X2檢驗無明顯差異時'群體為合格。處于非平衡狀態(tài)的群體應加強繁殖管理'避免近交。7.2.2微衛(wèi)星和SNP檢測法按6.2.1.1數(shù)量進行抽樣。7.2.2.2座位的選擇選擇能夠代表種群遺傳特征的座位進行檢測'見附錄D。7.2.2.3群體評價7.2.3其他方法除以上方法外'還可選用其他方法進行群體遺傳質(zhì)量檢測'如下頜骨測量法、DNA多態(tài)性檢測法以及統(tǒng)計學分析法等。統(tǒng)計項目包括生長發(fā)育、繁殖性狀、血液生理和生化指標等多種參數(shù)'通過連續(xù)監(jiān)測把握群體的正常范圍。7.3他動物遺傳檢測方法其他動物根據(jù)遺傳特性'參照6.2建立遺傳檢測方法。小型豬和長爪沙鼠的微衛(wèi)星標記基因見附錄F和附錄G;檢測數(shù)量100以下'不少于15頭(只)'100以上群體不少于30頭(只)。7.4檢測時間間隔遠交群動物每年至少進行1次遺傳質(zhì)量檢測。9GB14923—20227.5封閉群動物遠交群動物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測方法也適用于封閉群動物。8雜交群動物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測由于F1動物遺傳特性均一'不進行繁殖而直接用于試驗'一般不對這些動物進行遺傳質(zhì)量監(jiān)測'需要時參照近交系的檢測方法進行質(zhì)量監(jiān)測。10GB14923—2022附錄A(規(guī)范性)基因修飾動物A.1分類與定義用基因修飾等技術手段對特定基因改造所獲得的動物。主要分為轉(zhuǎn)基因、基因定位突變等。以小鼠為例定義如下:示例1:轉(zhuǎn)基因小鼠(transgenicmouse)通過原核顯微注射、電轉(zhuǎn)或逆轉(zhuǎn)錄病毒感染等方式將DNA片段隨機整合或插入到目的小鼠的基因組中形成的小鼠。示例2:基因定位突變小鼠(mousewithtargetedmutations)通過同源重組或核酸酶(如ZFN、TALEN或CRISPR等)介導的對特定靶基因位點進行破壞、置換或插入外源序列而建立的小鼠。A.2命名A.2.1轉(zhuǎn)基因動物命名轉(zhuǎn)基因動物的命名遵循以下原則:背景品系加連接符加轉(zhuǎn)基因符號。符號:一個轉(zhuǎn)基因符號由以下三部分組成'均以羅馬字體表示:Tgx(YYYYYY)#####ZZZ'其中各部分符號表示含意為:Tgx=方式(mode)(YYYYYY)=插入片段標示(insertdesignation)#####=實驗室指定序號(laboratory-assignednumber)及ZZZ=實驗室注冊代號(laboratorycode)以上各部分具體含意及表示如下:a)方式轉(zhuǎn)基因符號通常冠以Tg字頭'代表轉(zhuǎn)基因(transgene)。隨后的一個字母(x)表示DNA插入的方式:H代表同源重組'R代表經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體感染的插入'N代表非同源插入。b)插入片段標示插入片段標示是由研究者確定的表明插入基因顯著特征的符號。通常由放在圓括號內(nèi)的字符組成:可以是字母(大寫或小寫)'也可由字母與數(shù)字組合而成'不用斜體字'上標、下標、空格及標點等符號。研究者在確定插入標示時'應注意:標示應簡短'一般不超過6個字符。如果插入序列源于已經(jīng)命名的基因'在插入標示中使用基因的標準命名或縮寫'但基因符號中的連字符應省去。確定插入片段指示時'使用一些標準的命名縮寫'目前包括:An匿名序列Ge基因組Im插入突變Nc非編碼序列RP報告基因11GB14923—2022sn合成序列Et增強子捕獲裝置pt啟動子捕獲裝置插入片斷標示只表示插入的序列'并不表明其插入的位置或表型。c)實驗室指定序號及實驗室注冊代號實驗室指定序號是由實驗室對已成功的轉(zhuǎn)基因系給予的特定編號'最多不超過5位數(shù)字。而且'插入片斷標示的字符與實驗室指定序號的數(shù)字位數(shù)之和不能超過11。實驗室注冊代號是對從事轉(zhuǎn)基因動物研究生產(chǎn)的實驗室給予的特定符號。示例:C57BL/6J-TgN(CD8Ge)23Jwg來源于J實驗室的C57BL/6品系小鼠被轉(zhuǎn)入人的CD8基因組(Ge);轉(zhuǎn)基因在JonW.Gordon(Jwg)實驗室完成'獲取于一系列顯微注射后得到的序號為23的小鼠。TgN(Gp-DHIm)1Bir是以人的甘油磷酸脫氫酶基因(GpDH)插入(C57BL/6JXsJL/J)F1代雌鼠的受精卵中'并引起插入突變(Im)'這是EdwardH.Birkenmeier(Bir)實驗室命名的第一只轉(zhuǎn)基因小鼠。根據(jù)轉(zhuǎn)基因動物命名的原則'如果轉(zhuǎn)基因動物的遺傳背景是由不同的近交系或封閉群之間混合而成時'則以sTOCK表示未知的背景或2個以上親代品系。轉(zhuǎn)基因符號的縮寫:轉(zhuǎn)基因符號可以縮寫'即去掉插入片斷標示部份'例如TgN(GpDHIm)1Bir可縮寫為TgN1Bir。一般第一次出現(xiàn)時使用全稱'其后再次出現(xiàn)時可使用縮寫名稱。A.2.2基因定位突變動物的命名原則:背景品系—基因名tm/em[實驗室序號][實驗室代號]'其中tm/em為定位突變基因'是targetmutation的縮寫'em是endonuclease-mediatedmutation的縮寫。示例1:B6/N-Ctnnb1tm1C(s45p)/Gtp為C57BL/6N小鼠背景上完成'Ctnnb1是基因名稱'tm后面的數(shù)字代表founder鼠的編號'(s45p)表明在Ctnnb1基因處敲入的突變基因'Gtp是實驗室注冊代碼。示例2:NOD-prkdcem26Cd52/Gtp、NOD-prkdcem26Td52/Gtp、NOD-prkdcem26Zd52/Gtp'其中'在NOD/shiLtJ背景上完成'prkdc是基因名稱;且上角標中大寫C代表Cas9方法制作'大寫T代表Talen方法制作'大寫Z代表ZFN方法制作'em后面的數(shù)字代表founder鼠的編號'Gtp是實驗室注冊代碼。此外'通常d代表deletion'in代表insert'd或in后面的數(shù)字代表敲除或者敲入片段的大小。A.3鑒定與質(zhì)量控制A.3.1轉(zhuǎn)基因動物A.3.1.1陽性動物的鑒定通過pCR、DNA印跡等檢測方法確認陽性基因在子代動物中整合成功。經(jīng)鑒定為陽性的小鼠成為首建鼠(founder)。將首建鼠與野生型小鼠交配'檢測子代中攜帶轉(zhuǎn)基因序列的為陽性鼠'子代陽性鼠繼續(xù)與野生型小鼠交配傳代'轉(zhuǎn)基因小鼠以雜合方式繁育保種。每一只首建鼠來源的后代作為一個系(Line)'同一轉(zhuǎn)基因的不同首建鼠來源的后代不相互交配。A.3.1.3外源基因的表達鑒定外源基因的穩(wěn)定表達是轉(zhuǎn)基因成功的關鍵環(huán)節(jié)之一'采用RT-pCR、Northern雜交、Westernblot及免疫組化等方法確認外源基因的表達。明確表達的靶器官(細胞)、表達水平。GB14923—2022A.3.1.4質(zhì)量控制在建系過程需要檢測每代陽性鼠'確認轉(zhuǎn)入基因在后代中穩(wěn)定遺傳。選擇純合子或雜合子交配的方式進行繁殖'同時檢測靶器官表達水平'確保轉(zhuǎn)基因的穩(wěn)定表達和遺傳。同一個轉(zhuǎn)基因系至少連續(xù)檢測3代'確認遺傳及表達的穩(wěn)定性。A.3.2基因定位突變動物通過分子生物學技術(southernbolt'PCR或測序等)檢測純合子或雜合子小鼠靶位點突變'選用純合子或雜合子進行建系繁殖'建立突變品系。12GB14923—2022附錄B(資料性)遠交群的繁殖方法B.1基本要求保持遠交群條件'無選擇'以非近親交配方式進行繁殖'每代近交系數(shù)上升不超過百分之一。B.2方法的選擇遠交群的種群大小、選種方法及交配方法是影響遠交群的繁殖過程中近交系數(shù)上升的主要因素'應根據(jù)種群的大小'選擇適宜的繁殖交配方法。具體方法如下:a)當遠交群中每代交配的雄種動物數(shù)目為10只~25只時'一般采用最佳避免近交法'也可采用循環(huán)交配法;b)當遠交群中每代交配的雄種動物數(shù)目為26只~100只時'一般采用循環(huán)交配法'也可采用最佳避免近交法;c)當遠交群中每代交配的雄種動物數(shù)目多于100只時'一般采用隨選交配法'也可采用循環(huán)交配法。B.3交配方法B.3.1最佳避免近交法每只雄種動物和每只雌種動物'分別從子代各留一只雄性動物和雌性動物'作為繁殖下一代的種動物。動物交配時'盡量使親緣關系較近的動物不配對繁殖'編排方法盡量簡單易行。a)對某些動物品種'如小鼠'大鼠等'生殖周期較短'易于集中安排交配'可按下述方法編排配對進行繁殖:假設一個遠交群有16對種動物'分別標以籠號1、2、3、…、16。設n為繁殖代數(shù)(n為自1開始的自然數(shù))。n代所生動物與n十1代交配編排見表B.1。表B.1最佳避免近交法的交配編排n十1代籠號雌種來自n代籠號雄種來自n代籠號112234356::::::8151692110431314GB14923—2022表B.1最佳避免近交法的交配編排(續(xù))n十1代籠號雌種來自n代籠號雄種來自n代籠號::::::161615b)某些動物品種如犬、貓、家兔等'生殖周期較長'難于按上述方式編排交配。只要保持種群規(guī)模不低于10只雄種'20只雌種的水平'留種時每只雌、雄種各留一只子代雌、雄動物作種'交配時盡量避免近親交配'則可以把繁殖中每代近交系數(shù)的上升控制在較低的程度。B.3.2循環(huán)交配法B.3.2.1應用范圍循環(huán)交配法廣泛適用于中等規(guī)模以上的實驗動物遠交群'其優(yōu)點一是可以避免近親交配'二是可以保證種動物對整個遠交群有比較廣泛的代表性。B.3.2.2實施辦法循環(huán)交配實施辦法如下:a)將遠交群劃分成若干個組'每組包含有多個繁殖單位(一雄一雌單位'一雄二雌單位'一雄多雌單位等);b)安排各組之間以系統(tǒng)方法進行交配。示例:一遠交群每代有48籠繁殖用種動物(一雄一雌'或一雄多雌)。先將其分成8個組'每組有6籠。各組內(nèi)隨機選留一定數(shù)量的種動物'然后在各組之間按以下排列方法進行交配'見表B.2。表B.2循環(huán)交配法組間交配編排新組編號雄種動物原組編號雌種動物原組編號112234356478521643765887B.3.3隨選交配法B.3.3.1應用范圍當遠交群的動物數(shù)量非常多(繁殖種動物在100個繁殖單位以上)'不易用循環(huán)交配法進行繁殖時'可用隨選交配法。B.3.3.2實施辦法從整個種群中隨機選取種動物'然后任選雌雄種動物交配繁殖。15GB14923—2022(資料性)常用近交系小鼠、大鼠的遺傳生化標記基因C.1常用近交系小鼠的遺傳標記基因'見表C.1。表C.1常用近交系小鼠的遺傳標記基因遺傳標記主要近交系小鼠的標記基因生化座位染色體中文名稱AAKRC3H/HeC57BL/6CBA/JAkp11堿性磷酸酶-1bbbaaCar23碳酸酐酶-2bababCe217過氧化氫酶-2abbabEs18酯酶-1bbbabEs311酯酶-3cccacEs1014酯酶-10abbabGpd14葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-1bbbabGpi17葡萄糖磷酸異構(gòu)酶-1aabbbHbb7血紅蛋白β鏈dddsdIdh11異檸檬酸脫氫酶-1abaabMod19蘋果酸酶-1ababbpgm15磷酸葡萄糖變位酶-1aabaapep31肽酶-3bbbabTrf9轉(zhuǎn)鐵蛋白bbbbaH-2D17組織相容性抗原-2D kkbkH-2K17組織相容性抗原-2K kkbk遺傳標記主要近交系小鼠的標記基因生化座位染色體中文名稱BALB/cDBA/1DBA/2TA1/TMTA2615Akp11堿性磷酸酶-1baabbaCar23碳酸酐酶-2babbaaCe217過氧化氫酶-2ababbbEs18酯酶-1bbbabbEs311酯酶-3accaccEs1014酯酶-10abbbaaGpd14葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-1babbbbGpi17葡萄糖磷酸異構(gòu)酶-1aaaabaHbb7血紅蛋白β鏈dddsdsIdh11異檸檬酸脫氫酶-1abbaaaMod19蘋果酸酶-1aaabbbpgm15磷酸葡萄糖變位酶-1abbabbpep31肽酶-3abbcbaTrf9轉(zhuǎn)鐵蛋白bbbbbbH-2D17組織相容性抗原-2DdqdbbkH-2K17組織相容性抗原-2Kdqdbbk16GB14923—2022C.2常用近交系大鼠的生化標記基因'見表C.2。表C.2常用近交系大鼠的生化標記基因遺傳標記主要近交系大鼠的標記基因生化座位染色體中文名稱ACIBNF344LEW/MLOU/CSHRWKYAKP19堿性磷酸酶-1baaaaabAlP9血清堿性磷酸酶bbbbbabCs12過氧化氫酶aaaaabbEs119酯酶-1baaaaaaEs311酯酶-3adadabdEs419酯酶-4bbbbbabEs68酯酶-6bbaabaaEs819酯酶-8babbbbaEs919酯酶-9acacaacEs1019酯酶-10abaaaabHbb1血紅蛋白baabaaa17GB14923—2022附錄D(資料性)常用小鼠、大鼠的微衛(wèi)星座位信息D.1常見近交系小鼠微衛(wèi)星座位'見表D.1。表D.1常見近交系小鼠微衛(wèi)星座位座位片段大小/bpC57BL/6JBALB/CJT739SCIDDBA/2FVBNCPC/2D1Mit3659292104~1081041049292D2Mit15140140158140140170160D3Mit29144196144144~202180144144D4Mit235112969696969696D5Mit48202196208198204198196D6Mit102141131139131121171135D7Mit281110136136136136136136D8Mit33224222222226216224224D9Mit23206204208204204208204D10Mit12237237237237237215237D11Mit4251245251245285251295D12Mit7106122106~122106106~120106106~122D13Mit3162188172188196188196D15Mit5959511195111111111D16Mit9143123131123123123111~131D17Mit11169145169145145173169D18Mit19154160154152156158158D19Mit16132132132~135132114128132DXMit161118993931079393D6Mit8163185173185143~185143~185149~185D6Mit15252194152194152152252D7Mit12201201233201207201211D8Mit14138162138138~162162134134D9Mit21193193193193179179193D12Nds11169~174179179174~179179179179D14Mit3226226226226226226226D15Mit15158158158158144144150D17Nds3136114156~158118122114132D18Mit9166156164156156166156D19Mit3197~201197~201197197~201197~207197~20121518GB14923—2022D.2常見近交系大鼠微衛(wèi)星引物序列及常見品系帶型'見表D.2o表D.2近交系大鼠微衛(wèi)星引物序列及常見品系帶型引物名稱序列(5l-3l)常用品系帶型LewisBNF344D3WOX9(F)TTCAGGTATGATTCGGGAACbbaATTGGCGATATCATTTCACTAACAPOC3(F)GATTTGAAGCGATTGTCCATbabGTCTAGCTGCCCACAGGAGD11mgh3(F)GGAGCTGAAATACGAGAGAAATAAacbGTCCTGCTGGCTGTGCATD12Mit2(F)GTGGCTCTTTTCCTTAGGGAbbaTCGGCTTCTGAATGTATTGGRATIL6G(F)ACTCTACAAGGACCAGAAAGTGaabGCATCTTAGCTGGGCTGACCPA2S(F)AGTGTTGCCCTCCTATGCATACabbAGAACATGCTGTTGTCAGGCTC注:按泳動快慢將條帶依次命名為a、b、c…帶'泳動最快的命名為a帶oD.3遠交群大鼠微衛(wèi)星座位'見表D.3o表D.325個遠交群大鼠微衛(wèi)星引物序列序號座位引物序列(5l-3l)染色體1D1Rat345TTCACACAAATGCCACCAGT1CAAAGAGATAGGGCGACAGG2D1Mgh14CCGCACTGAGCTCTCAGAG1CCCAACCATTGAGCTAGTAAGG3D2WOX15GGTGCTAGTAGACAATAAGATAGAT2TTCATGAGTTTTCACTGTTTGC4D2Mgh26ATTGGTGATCAGATTTTTTTCTCC2CCCAACCATTGAGCTAGTAAGG5D3WOX9TTCAGGTATGATTCGGGAAC3ATTGGCGATATCATTTCACTAAC6D4Arb10ACTCATCTTCTGAGGAGTAGCG4TTCACAGTCTATTTGGTAGGGC7D4Mit15CCTAATGACAGCAATAGAAACTACG4TTTTGGTACTGGAGAAAGTTGGGB14923—2022表D.325個遠交群大鼠微衛(wèi)星引物序列(續(xù))序號座位引物序列(5/-3/)染色體8D5Hmgc2ATGTTCCCTGATGTCCCTTC5AAACCATGCCACGTGAAC9D6Mit1TTAGGAGAGAACTGAAAGTTGTCC6ATGGTGCACTATGGTGGTCA10D7Mgh3CGGCATGTGTCTCTGTGTG7TGACTTCTGGTGTCCTCACG11D8Rat14GGCCGGTCTAATTATTTCTTCA8GCCCATACGTTGCATCAAGT12D9Mit2TGACCAGTTAGCCCTTTCCA9GGGAGCAGGGTTCTACACAG13D10wox12CGCTGGGAGGAAAGAGAG10AGGCTTGCACTCTGTGTTTG14D11Mgh3GGAGCTGAAATACGAGAGAAATAA11GTCCTGCTGGCTGTGCAT15D11wox3CACTTTGAGGCCATTCTGAA11CCTTCTCTTTGTGAAAAATAAAGTC16D12Mit2GTGGCTCTTTTCCTTAGGGA12TCGGCTTCTGAATGTATTGG17LCATACAGAGCAAGCTCCAGGAC13TGTTTCTAATCCATAGGAAGTGC18ALBTTTTCGTAGTAACGGAAGCC14TAAGGATTCTCAGATGCAAATG19D15Mit3GACCTGACCTGTTGTGGGAT15GTTGCTCTCTGGCCTCCTC20MBPAACCTACACGGACACATGGTG16GTTGTACTTCCTGATTTCCCTTT21ACRMAGGAAATTAAGAGAAGTTGGGACT17TATGCTCTTTGGGCAGCTTA22TILPAATCACTGGATGCTGGAAGA18AGGGAGCAGAACTACTAAAGATACA23AGTTATGTAACTCAACGCCAGCC19TAAGGATTCTCAGATGCAAATG24TNFAGGAAATGGGTTTCAGTTCC20CAGGATTCTGTGGCAATCTG25PRPS2GTTTTCCCGCTTCACCAGXAGAAGGAGAAAGCGACCG1920GB14923—2022附錄E(資料性)常用近交系小鼠SNP標記基因常用近交系小鼠SNP標記基因'見表E.1。表E.1常用近交系小鼠SNP標記基因序號染色體SNP標記基因C57BL/6JBALB/CCBA/JC3H/HeJ11AF-067836350A1--TATT21M223811692--TTTC32M-090111-AACC43M-027071-TTCC54 M-016091 CTTT65 M-021872 GGTT75M-052333-AAAA86M-020941-GTTT97M-057821-TGGG108M-115592-CAAA119M-055371-AAGA129 M-048191 TCCC1310 M-095262 TGTT1410 M-057991 GGGG1511M-089241-ACAC1611M-057271-TCCC1712M-074033-TCCC1813M688961511--CTTT1913M-054952-TGGG2014 M-072511 TTTT2115 M-076461 GGAA2216 M-013222 ATTA2317 M-046591 AAGG2417AF0278651-TCCC2518M-098441-GAGG2619M-021621-GAAG27XM-058101-TTCT28808-015199792-MTC—C291111-004367508-MGAAA301313-041017317-MTCC 311515-057561875-MA G321919-049914266-MG 33101-032174982-MGT 34404-063116157-MTC—T351818-064780780-MGA—G附錄F（資料性）小型豬微衛(wèi)星標記基因GBF.1實驗用五指山小型豬近交系、廣西巴馬小型豬和貴州小型豬近交系培育過程中，遺傳質(zhì)量控制的微衛(wèi)星座位及優(yōu)勢等位基因，見表F.1。GB群體等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%CGASW769SW857SW240SW72SW24五指山小型豬近交系五指山小型豬近交系等位基因頻率合計廣西巴馬小型豬廣西巴馬小型豬等位基因頻率合計GBGB表F.1實驗用五指山小型豬近交系、廣西巴馬小型豬和貴州小型豬近交系培育過程中，遺傳質(zhì)量控制的微衛(wèi)星座位及優(yōu)勢等位基因（續(xù)）群體等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%CGASW769SW857SW240SW72SW24貴州小型豬貴州小型豬等位基因頻率合計23GB14923—2022F.2各微衛(wèi)星座位的引物序列、染色體位置、最佳擴增條件、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍'見表F.2o表F.2各微衛(wèi)星座位的引物序列、染色體位置、最佳擴增條件、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍座位引物序列(5l-3l)所在染色體鎂離子濃度mmol/L退火溫度℃等位基因數(shù)等位基因范圍SW974GGTGAAGTTTTTGCTTTGAACCGAAAGAAATCCAAATCCAAACC12.05817129~175S0091TCTACTCCAGGAGATAAGCCAGATCAGTGACTCCATGCACAGTTATGA2551496~174SW240AGAAATTAGTGCCTCAAATTGGAAACCATTAAGTCCCTAGCAAA2581192~114SW1066GCAGGATGAACCACCCTGCTCTTGAGGCAACCTGCTG32.06019166~214SW1089TTTTCCCCTTCACTCACCCGATCAAAGTCCCTTACTCCGG45810142~190S0005TCCTTCCCTCCTGGTAACTAGCACTTCCTGATTCTGGGTA52.05411204~244SW1057TCCCCTGTTGTACAGATTGATGTCCAATTCCAAGTTCCACTAGC62.05814142~191SW632TGGGTTGAAAGATTTCCCAAGGAGTCAGTACTTTGGCA72.0549148~173OPNCCAATCCTATTCACGAAAAAGCCAACCCACTTGCTCCCAC82.05912138~170SW29AGGGTGGCTAAAAAAGAAAAGGATCAAATCCTTACCTCTGCAGC82.06112133~187SW911CTCAGTTCTTTGGGACTGAACCCATCTGTGGAAAAAAAAAGCC92.06014151~178SW511AAGCAGGAATCCCTGCATCCCCAGCCACCAGTCTGAC96212161~196SWr158TCCAATTCAACTCCTGGCTCGAATGTGCACATACCACATGC102.06018158~200SW951TTTCACAACTCTGGCACCAGGATCGTGCCCAAATGGAC105814108~142SW271TTCCAGTGGCTTTCTGTGCCATTCATTCCCAGTGAAACTTG35813111~144S0386TCCTGGGTCTTATTTTCTATTTTTATCTCCAACAGTAT112.04812155~178S0068CCTTCAACCTTTGAGCAAGAACAGTGGTCTCTCTCCCTCTTGCT132.06210210~25624GB14923—2022表F.2各微衛(wèi)星座位的引物序列、染色體位置、最佳擴增條件、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍(續(xù))座位引物序列(5/-3/)所在染色體鎂離子濃度mmol/L退火溫度℃等位基因數(shù)等位基因范圍Swr1008ACAGCCACCAACAGTGTTTGGAACTTCCATATGCTGCAAGTG132.0621698~256S0007TTACTTCTTGGATCATGTCGTCCCTCCTCATAATTTCTG142.05415142~192Sw857TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACCGATCCTCCTCCAAATCCCAT142.05816129~173Swr312ATCCGTGCGTGTGTGCATCTGGTGGCTACAGTTCCGAT156411116~136Sw81GGGGCTCTCAGGAAGGAG16608128~144Swr1120CAAATGGAACCCATTACAGT