《儀器分析》課件-模塊三 高效液相色譜法

儀器分析模塊三高效液相色譜法項目一高效液相色譜法目標掌握高效液相色譜法分離類型01掌握高效液相色譜法各分離原理02相關(guān)標題文字01項目一高效液相色譜法原理-2·高效液相色譜法主要分類類型·高效液相色譜法各分離原理HPLCHPLC01高效液相色譜法是以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜實驗和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜方法。高效液相色譜法（HPLC）02高效液相色譜法（HOLC）高效液相色譜儀的工作流程圖03高效液相色譜法的主要分離類型1.基本原理：利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力的差異.2.固定相：是固體吸附劑，有下列兩類：極性（硅膠、氧化鋁）、非極性（活性炭）。3.液固吸附色譜流動相：各種不同極性的一元或多元溶劑。一、液固吸附色譜法HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）04高效液相色譜法的主要分離類型3.流動相的基本要求：⑴能溶解被分離的樣品⑵與所用檢測器相匹配⑶粘度盡可能小，以獲得高的柱效⑷價格便宜、毒性小、易于純化一、液固吸附色譜法HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）05高效液相色譜法的主要分離類型4.流動相的基本要求：流動相的選擇原則：極性大的試樣用極性較強的流動相；極性小的則用低極性流動相。一、液固吸附色譜法HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）061.基本原理主要基于樣品分子在流動相和固定相間的溶解度不同（分配作用）而實現(xiàn)分離的液相色譜分離模式。分析對象：分析同系物及含有不同官能團的多組分的混合物。2.固定相固定相是固定液涂抹在載體上制成。載體有全多孔型載體、表面多孔型載體、全多孔型離子載體；固定液：β,β-氧二丙腈，聚乙二醇，十八烷和角鯊?fù)椤?.流動相要求：對固定相的溶解度盡可能小。對于親水性固定液，應(yīng)選擇疏水性流動相；反之，相反。二.液-液分配色譜HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）高效液相色譜法的主要分離類型07化學(xué)鍵合相色譜是在化學(xué)鍵合固定相上進行物質(zhì)分離的一種液相色譜方法。化學(xué)鍵合固定相：以化學(xué)反應(yīng)的方法將功能分子結(jié)合到惰性載體上(全多孔或薄殼型微粒硅膠)。化學(xué)鍵合固定相分類：根據(jù)在硅膠表面(具有≡Si－OH基團)的化學(xué)反應(yīng)不同，鍵合固定相可分為：硅氧碳鍵型(≡Si－O－C)；硅氧硅碳鍵型(≡Si－O－Si－C)硅碳鍵型（≡Si－C）和硅氮鍵型（≡Si－N）四種類型。三.化學(xué)鍵合相色譜HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）高效液相色譜法的主要分離類型081.離子交換色譜的分離原理在離子交換色譜中，樣品離子對離子交換劑上帶固定電荷的活性交換基團之間發(fā)生離子交換，不同的樣品離子對離子交換劑的親和力不同，或者說相互作用不同，作用弱的溶質(zhì)不易被保留，先從柱中被沖洗出來，反之，作用強的，保留較長，較晚淋洗出來。2.固定相：陽離子交換樹脂或陰離子交換樹脂。3.流動相：陰離子離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽離子離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液。四.離子交換色譜法HPLCHPLCHPLC高效液相色譜法（HPLC）高效液相色譜法的主要分離類型091.基本原理：立體排阻，按分子大小分離。小分子可以擴散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。2.固定相：凝膠(具有一定大小孔隙分布)。3.流動相：要求能溶解樣品，粘度低，與檢測器相匹配。4.分析對象：分離大分子物質(zhì)，分離范圍