2024年人乳頭瘤病毒檢測方法及其應(yīng)用進(jìn)展

第頁2024年人乳頭瘤病毒檢測方法及其應(yīng)用進(jìn)展[摘要]宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤，早發(fā)現(xiàn)、早治療是預(yù)防宮頸癌的關(guān)鍵。除細(xì)胞學(xué)檢查外，HPV檢測也是宮頸癌篩查的重要方法。最初的HPV檢測方法主要是基于形態(tài)學(xué)，如細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)、免疫組化及電鏡等，但因敏感度和特異度均不理想，操作較繁瑣，臨床使用較少。目前應(yīng)用于臨床的HPV檢測方法為基于現(xiàn)代分子生物學(xué)的核酸技術(shù)，靈敏度及特異度均較高。該文就國內(nèi)、外普遍應(yīng)用的HPV檢測方法及其應(yīng)用進(jìn)展作一簡述。

[關(guān)鍵詞]宮頸癌;宮頸上皮內(nèi)瘤變;人乳頭瘤病毒;檢測

[中圖分類號]R737[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號]1674-0742（2024）07（a）-0196-03

ProgressinDetectionofHumanPapillomavirusandItsApplication

PENGCai-jiao，XIONGZheng-ai

TheSecondAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing，400010China

[Abstract]Cervicalcancerisacommonmalignanttumorinwomen.Earlydetectionandearlytreatmentarethekeytopreventcervicalcancer.Inadditiontocytology，HPVtestingisalsoanimportantmethodforcervicalcancerscreening.TheoriginalHPVdetectionmethodismainlybasedonmorphology，suchascytology，histology，immunohistochemistryandelectronmicroscopy，butthesensitivityandspecificityarenotideal，theoperationiscumbersome，andtheclinicalapplicationsarefewer.ThecurrentHPVdetectionmethodappliedtotheclinicisbasedonmodernmolecularbiologynucleicacidtechnology，andthesensitivityandspecificityarehigh.ThispapergivesabriefintroductiontothedomesticandforeignHPVdetectionmethodsandtheirapplicationprogress.

[Keywords]Cervicalcancer;Cervicalintraepithelialneoplasia;Humanpapillomavirus;Detection

目前宮頸癌仍嚴(yán)重威脅全球女性的生命健康，仍是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一[1]，世界范圍內(nèi)宮頸癌居女性惡性腫瘤第4[2]，每年約有50萬的新發(fā)病例，每年死亡病例超過26萬，均主要發(fā)生于社會(huì)經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)[3]。隨著宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合HPV檢測的篩查模式的推廣及逐漸普及，全球?qū)m頸癌的死亡率和發(fā)生率下降明顯，但在發(fā)展中國家尤其是中低收入國家有上升趨勢，數(shù)據(jù)顯示我國則有逐漸上升[4]。

長期以來宮頸癌篩查以細(xì)胞學(xué)檢查為主，隨著HPV感染和宮頸腫瘤之間的直接因果關(guān)系被證實(shí)[5-7]，HPV檢測逐漸成為宮頸癌的重要部分。HPV檢測雖特異性較低，但高敏感性、高陰性預(yù)測值等特點(diǎn)更突出，近期研究提出，聯(lián)合篩查在預(yù)防宮頸癌發(fā)揮的重大意義可能在于HPV檢測[8]，HPV檢測在預(yù)防宮頸癌方面可提供更多的保護(hù)[9]。該文將對以下HPV檢測方法及其應(yīng)用進(jìn)展作一簡述。

1HPVDNA檢測

1.1雜交捕獲（HybridCapture，HC）技術(shù)

HC-II技術(shù)1999年成為美國FDA認(rèn)證的第一個(gè)用于宮頸癌篩查的HPV檢測方法，基因雜交基礎(chǔ)上利用化學(xué)發(fā)光對抗體捕獲的信號放大原理，對高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型進(jìn)行檢測，并可進(jìn)行病毒載量半定量檢測，因有統(tǒng)一的臨床判定標(biāo)準(zhǔn)，檢測結(jié)果客觀性較高，且重復(fù)性好，采用HPV全長堿基對設(shè)計(jì)避免了因靈敏度過高導(dǎo)致的假陽性，無需基因擴(kuò)增有效避免環(huán)境因素造成的假陰性。研究顯示HC-II法對CIN2及以上病變的敏感度及特異度分別為97.1%和85.6%[10]，因此HC-II法至今被作為HPV檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但該方法不能具體分型、缺乏內(nèi)質(zhì)控，且成本高，與低危型HPV型也存在交叉反應(yīng)[10-11]。

careHPV檢測是一種宮頸癌快速篩查技術(shù)，2024年8月獲世界衛(wèi)生組織資格認(rèn)證。careHPV檢測同樣基于HC-II的原理，但除能檢測常見13種高危型HPV外，還能檢測HPV66型，且操作簡易、價(jià)格低廉、檢測用時(shí)短，因此，該方法被認(rèn)為非常適用于衛(wèi)生資源匱乏地區(qū)等發(fā)展中國家，包括中國農(nóng)村。臨床結(jié)果顯示，CcareHPV對CIN2及以上病變的靈敏度為90%，特異度為84.2%，與HC-II檢測接近[12]。

1.2Invader酶切信號放大法

該方法采用Invader專利技術(shù)，通過分子雜交和化學(xué)信號放大，直接檢測特定HPVDNA序列。2024年美國FDA批準(zhǔn)使用的CervistaHPV檢測則基于該方法，對HPVDNA的L1、E6/E7區(qū)進(jìn)行檢測，這可避免僅檢測L1區(qū)所造成的假陰性，且與多數(shù)低危型HPV無交叉反應(yīng)，降低了假陽性率[13]，也能進(jìn)行內(nèi)質(zhì)控，其有兩種試劑盒：CervistaHRHPV和CervistaHPV16/18，前者能檢測14種高危型HPV，并將其分為A5/6、A7、A93組，但認(rèn)為分組檢測的臨床意義尚不能明確[14]，后者可對HPV16/18分型。Belinson等在中國廣東省納入1萬女性的研究中CervistaHRHPV對CIN3及以上病變的靈敏度為95.1%（95%，90%～98%），與HC-II法無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但特異度顯著高于HC-II法（P<0.05）[15]。

1.3聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）技術(shù)

這類方法多樣，包括常規(guī)PCR技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、PCR-酶聯(lián)免疫吸附測定檢測技術(shù)、PCR結(jié)合返向雜交技術(shù)等。2024年獲FDA批準(zhǔn)用于宮頸癌篩查的Cobas4800HPV檢測則以實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，可檢測14種高危型HPV，并提供HPV16、18同步基因分型，但對余12種不能具體分型，敏感性和特異性均較高，且不存在與低危型HPV的交叉反應(yīng)，但因敏感性過高，易導(dǎo)致假陽性率的增加。Mark等[16]的研究顯示，Cobas4800HPV檢測在靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值方面與HC-II法無明顯差異，且兩者一致性高，在CIN2以下和CIN2及以上的病變中的一致性分別為90.6%（95%，89.1%～92%）和96.2%（95%，89.5%～98.7%）。Lapierre等[17]研究發(fā)現(xiàn)，Cobas4800HPV檢測的重復(fù)性較好，多次檢測的一致率較高，降低了操作成本，同時(shí)能對是否行陰道鏡下活檢提供有效幫助信息?；贏THENA的研究結(jié)果[18]，2024年Cobas4800HPV檢測成為美國FDA唯一批準(zhǔn)用于25歲女性宮頸癌一線初篩的HPV檢測方法。隨著國內(nèi)外學(xué)者深入探索，發(fā)現(xiàn)HPV自取樣技術(shù)的參與率高于細(xì)胞學(xué)篩查，群眾可接受度更高[19]，HPV自取樣或許可作為宮頸癌初篩手段[20]，且應(yīng)用基于PCR的HPV檢測方法進(jìn)行自取樣標(biāo)本可獲得與醫(yī)生取材一樣的敏感性[21-22]，因此有學(xué)者認(rèn)為CobasHPV檢測技術(shù)也可用于HPV自取樣。

目前在中國廣泛使用的HPV基因分型檢測結(jié)合PCR技術(shù)、導(dǎo)流雜交及基因芯片技術(shù)為一體，可同時(shí)檢測21種HPV基因型別，包括13種常見的高危型HPV、5種低危型HPV（6、11、42、43、44、81型）和中國人常見基因型（HPV53、66、81型），并具體分型，判斷多重感染[23]。

今年美國FDA批準(zhǔn)的BDOnclarityHPV檢測系統(tǒng)，同樣基于PCR技術(shù)。大多數(shù)HPV檢測方法針對的是HPV基因組L1區(qū)，而該方法針對E6/E7DNA癌基因，其中樣品處理、核酸提取、即時(shí)PCR擴(kuò)增、檢測以及結(jié)果報(bào)告均為自動(dòng)化處理，同樣可檢測14種高危型HPV，但其報(bào)告為：6種高危型HPV（16、18、31、45、51和52型）為獨(dú)立結(jié)果和其余8種高危型HPV另分為三個(gè)獨(dú)立報(bào)告：（33、58型）、（35、39、68型）和（56、59、66型），可降低人為干預(yù)，大幅度提高實(shí)驗(yàn)室的工作效率。

2HPVmRNA檢測

該方法利用轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)張技術(shù)，提取HPVE6/E7mRNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下將mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增，分別對16型、18/45型和其他11種高危型HPV進(jìn)行檢測。研究數(shù)據(jù)顯示該方法既具備HPVDNA的敏感性，又有與細(xì)胞學(xué)檢查相似的特異性[24]，能較好平衡HPV檢測的敏感性和特異性，同時(shí)可降低傳統(tǒng)HPVDNA檢測對于一過性HPV感染的檢出率。E6/E7為HPV的致癌基因，在大量HPV持續(xù)被轉(zhuǎn)錄為E6/E7mRNA，表達(dá)大量癌蛋白時(shí)，可增加細(xì)胞惡變的風(fēng)險(xiǎn)[25-26]，因此較HPVDNA檢測，HPVmRNA檢測或許更能發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的HPV感染[27]，真正識(shí)別高風(fēng)險(xiǎn)的宮頸癌前病變?nèi)巳篬28]。AptimaHPV檢測即為一種HPVmRNA檢測，包括AptimaHPV和AptimaHPV16/18/45Genotype，后者可對前者陽性結(jié)果進(jìn)一步分型，兩者均在2024年獲得美國FDA批準(zhǔn)。但該方法同樣缺乏內(nèi)質(zhì)控，不能具體分型，也可能與低危型HPV有交叉感染。

3結(jié)語

宮頸癌篩查的目的在于盡可能識(shí)別出真正的癌前病變，避免對HPV一過性感染的過度檢查及過渡治療。HPV檢測作為作為宮頸癌的重要篩查手段，基于HPV檢測的優(yōu)勢，在發(fā)展中國家，尤其是經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)可能有更高的應(yīng)用前景，若合理利用，將對全球的宮頸癌防控產(chǎn)生重大意義。

[參考文獻(xiàn)]

[1]劉萍.中國大陸13年宮頸癌臨床流行病學(xué)大數(shù)據(jù)評價(jià)[J].中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2024，34（1）：41-45.

[2]BrayF，F(xiàn)erlayJ，SoerjomataramI，etal.GlobalCancerStatistics2024：GLOBOCANEstimatesOfIncidenceAndMortalityWorldwidefor36Cancersin185Countries[J].CACancerJClin，2024：1-31.

[3]TsuV，JerónimoJ.SavingtheWorld"swomenfromcervicalcancer[J].NewEnglJMed，2024，374（26）：2509.

[4]ChenWQ，ZhengR，BaadePD，etal.CancerStatisticsinChina2024[J].CACancerJClin，2024，66（2）：115-132.

[5]SmithJS，LindsayL，HootsB，etal.HumanPapillomavirusTypeDistributionInInvasiveCervicalCancerAndHigh-gradeCervicalLesions：Ameta-analysisupdate[J].IntJCancer，2024（121）：621-632.

[6]StensenS，KjaerSK，JensenSM，etal.FactorsAssociatedWithType-specificPersistenceOfHigh-riskHumanPapillomavirusInfection：Apopulation-basedstudy[J].IntJCancer，2024，138（2）：361-368.

[7]YangY，RenJ，ZhangQ.Distributionofhumanpapillomavirustype16E/E7genemutationincervicalprecancerorcancer：acasecontrolstudyinGuizhouProvince，China[J].JMedViol，2024，88（2）：345-350.

[8]GageJ，KatkiHA，SchiffmanM，etal.ReassuranceAgainstFutureRiskofPrecancerandCancerConferredbyaNegativeHumanPapillomavirusTest[J].JNatlCancerInst，2024，106（8）：1-4.

[9]RoncoG，DillnerJ，ElfstromKM，etal.EfficacyofHPV-basedscreeningforpreventionofinvasivecervicalcancer：follow-upoffourEuropeanrandomisedcontrolledtrials[J].Lancet，2024，383（9916）：524-532.

[10]吳文湘，劉朝暉.62種人乳頭瘤病毒臨床檢測技術(shù)點(diǎn)評[J].中國計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科，2024，8（9）：1-3.

[11]ClavelC，MasureM，BoryJP，etal.HybridCaptureII-basedHumanPapillomavirusDetection，aSensitiveTestTodetectInRoutineHigh-gradeCervicalLesions：Apreliminarystudyon1518women[J].BrJCancer，1999，80（9）：1306-1311.

[12]QiaoYL，SellorsJW，EderPS，etal.AnewHPV-DNAtestforcervical-cancerscreeningindevelopingregions：across-sectionalstudyofclinicalaccuracyinruralChina[J].LancetOncol，2024，9（10）：929-936.

[13]呂攀攀，邢志芳.人乳頭瘤病毒實(shí)驗(yàn)室檢測方法的研究進(jìn)展[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2024，38（5）：660-664.

[14]魏麗惠.下生生殖道上皮內(nèi)病變的診治和管理[M].北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2024：43.

[15]BelinsonJL，WuR，BelinsonSE，etal.Apopulation-baseclinicaltrialcomparingendocervicalhigh-riskHPVtestingusingHybridCapture2andcervistafromtheSHENCCASTIIstudy[J].AmJAlinPathol，2024（13）：790-795.

[16]MarkH，StolerMD，WrightTC，etal.High-riskHumanPapillomavirusTestingInWomenWithASC-USCytology：TesultsFromtheATHENAHPVstudy[J].AmJClinPathol，2024，135（3）：468-475.

[17]LapierreSG，SauthierP，MayrandMH，etal.Humanpapillomavirus（HPV）DNATriageOfWomenWithAtypicalSquamousCellsOfUndeterminedSignificancewithcobas4800HPVandHybridCapture2testsfordetectionofhigh-gradelesionsoftheuterinecervix[J].JClinMicrobiol，2024，50（4）：1240-1244.

[18]WrightTC，StolerMH，BehrensCM，etal.PrimaryCervicalCancerScreeningWithHumanPapillomavirus：EndOfStudyResultsFromTheATHENAStudyUsingHPVAstheFirst-lineScreeningTest[J].GynecolOncol，2024，136（2）：189-197.

[19]RaceyCS，WithrowDR，GesinkD，etal.Self-collectedHPVtestingimprovesparticipationincervicalcancerscreening：asystematicreviewandmeta-analysis[J].CanJPublicHealth，2024，104（2）：e159-166.

[20]ArbynM，CastlePE.Offeringself-samplingkitsforHPVtestingtoreachwomenwhodonotattendintheregularcervicalcancerscreeningprogram[J].CancerEpidemiolBiomarkersPrev，2024（24）：769-772.

[21]ArbynM，VerdoodtF，SnijdersPJF，etal.AccuracyOfHumanPapillomavirusTestingOnSelf-collectedVersusClinician-collectedSamples：Ameta-analysis[J].LancetOncol，2024，15（2）：172-183.

[22]ArbynM，SmithSB，TeminS，etal.Detectingcervicalprecan-cerandreachingunderscreenedwomenbyusingHPVtestingonselfsamples：updatedmeta-analyses[J].BMJ，2024（363）：k4823.

[23]TaoP，ZhengW，WangY，etal.SensitiveHPVgenotypingbasedontheflow-throughhybridizationandgenechip[J].JBiomedBiotechnol，2024（2024）：938780.

[24]CuschieriK，