MALDI-TOF-MS的原理和應(yīng)用-1226

周春喜博士布魯克·道爾頓公司應(yīng)用工程師基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜的原理和應(yīng)用簡介MALDI-TOF質(zhì)譜的基本原理蛋白鑒定和蛋白質(zhì)組分析定量蛋白質(zhì)組學(xué)細(xì)菌鑒定血清多肽譜分析分子成像內(nèi)容提要什么是質(zhì)譜儀？+++樣品離子源質(zhì)量分析器生物質(zhì)譜儀的離子源與質(zhì)量分析器離子源

ElectroSprayIonization(ESI) Matrix-AssistedLaserDesorptionIonization(MALDI)質(zhì)量分析器

TimeofFlight(TOF) IonTrap(IT) Quadrapoles(Q) FourierTransformIonCyclotronResonance(FT-ICR)生物質(zhì)譜儀的類型離子源

MALDI ESI質(zhì)量分析器TOFIonTrap(IT)Quadrupoles(Q)FTMS+質(zhì)譜儀的類型MALDI-TOF;MALDI-TOF/TOFESI-TOFESI-Qq-TOFESI-IonTrapESI-tripleQuadrupolesESI(orMALDIor….)FTMSESI(orMALDIor….)Q-qFTMS ………E=U·z=1/2mv2

和

t=L/V

E：離子在加速電場獲得的動(dòng)能;U：加速電場電壓z：離子所帶電荷;m：離子質(zhì)量v：離子飛行速度;L：飛行管道長度t：離子飛行時(shí)間;c：常數(shù)質(zhì)量分析范圍：500Da---100KDaMALDI-TOF質(zhì)譜的原理t=c·m/zLaserMALDI-TOF-MS線性模式檢測Sample

plateAnalytemolecules

inmatrixAccelerationgridsDrifttubeIondetectorMassspectrumVacuumsystemVacuum

lock幾秒鐘即可得到結(jié)果triggerdiodelaservariableattenuator250l/sturbo250l/sturboreflectorlinearMALDITOF質(zhì)譜的組成一級質(zhì)譜質(zhì)譜圖提供的信息分子量(定性信息)峰強(qiáng)度(定量信息)400006000080000100000m/z

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2800a.i.多肽和蛋白質(zhì)分子量的測定BovineSerumAlbumin多肽的序列分析IntensityM/ZParentIonPeptideChainAr,HeorLaser571131289714787+7918699GlyLeuorIleLysProPheSer+P*TrpValDaughterIonGlyLeuorIleLysProPheSer+P*TrpVal肽鏈的裂解方式及碎片離子的命名a1b1c1a2b2c2a3b3c3z1y1x1z2y2x2z3y3x3MALDITOF-TOF串聯(lián)質(zhì)譜的原理質(zhì)譜圖離子檢測器離子反射器母離子選擇器MALDI離子源LIFT

子離子加速器LIDLaser高靈敏度，分析濃度至低

fmol

軟電離方式，主要產(chǎn)生單電荷離子，譜圖易解析

能容忍一定的鹽濃度：PBS<20mM線性TOF分析器可測定大分子的分子量反射式TOF具有高分辨率,可進(jìn)行PMF分析通過串聯(lián)質(zhì)譜可進(jìn)行序列分析MALDI-TOF質(zhì)譜的優(yōu)點(diǎn)MALDI-TOF質(zhì)譜的基本原理蛋白鑒定和蛋白質(zhì)組分析定量蛋白質(zhì)組學(xué)細(xì)菌鑒定血清多肽譜分析內(nèi)容提要400006000080000100000m/z

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2800a.i.多肽和蛋白質(zhì)分子量的測定BovineSerumAlbuminBSA的肽質(zhì)量指紋圖(PMF)BSA的氨基酸序列Mascot檢索結(jié)果多肽的二級質(zhì)譜圖931.5131046.555354.201400.216110.064517.260647.358756.390263.14701000200030004000500060001002003004005006007008009001000m/z多肽的序列匹配931.5131046.555354.201400.216110.064517.260647.358756.390263.14701000200030004000500060001002003004005006007008009001000m/zMascot檢索結(jié)果蛋白質(zhì)組分析的常用技術(shù)路線基于二維電泳分離的蛋白質(zhì)鑒定LC-MALDI:基于液相色譜分離的蛋白質(zhì)鑒定Proteineerfc

MALDIfractioncollectorLCAnchorChipTOF/TOFMALDI-TOF質(zhì)譜的基本原理蛋白鑒定和蛋白質(zhì)組分析定量蛋白質(zhì)組學(xué)細(xì)菌鑒定血清多肽譜分析內(nèi)容提要二維電泳分離后,確定差異蛋白,再進(jìn)行鑒定NormalStageCancerStageSubtractionDisplayPeptideMassFingerprint(PMF)蛋白質(zhì)的搜庫鑒定MascotSearchResultsProteinIDMALDI-TOF質(zhì)譜的基本原理蛋白鑒定和蛋白質(zhì)組分析定量蛋白質(zhì)組學(xué)細(xì)菌鑒定血清多肽譜分析分子成像內(nèi)容提要如何快速鑒別不同種類的微生物？BioTyper：微生物的鑒別與分類待檢樣品克隆選擇樣品制備質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)分析菌種鑒定?Bacillus

globigiiProfiling

results

fromdifferentBacillus

strains-6000-4000-20000200040006000a.i.B.globigiiB.licheniformisB.subtilisB.thuringiensis實(shí)驗(yàn)流程ResultReport|Detected

Species|Ranking|actSc|maxSc|RelScore|PNk|PNb|PNm|RelP-Num.|I-Corr.|1000*Pro---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Spectrum#12|Ps.mendocinaDSM50017|1|3813|4271|0.89|41|10|83|0.55|0.88|438|Ps.oleovoransB396|2|1671|3450|0.48|14|8|83|0.22|0.39|41|Ps.fluoreszensB340|3|868|4186|0.21|6|7|83|0.11|0.19|4|Ps.veroniiDSM11331|4|847|4250|0.20|5|7|83|0.10|0.14|3|Ps.putidaDSM291|5|374|2821|0.13|3|3|83|0.05|0.12|1|Ps.putidaB401|6|329|2638|0.12|3|2|83|0.05|0.11|1基于譜圖模式比對的細(xì)菌鑒定細(xì)菌鑒定結(jié)果的報(bào)告MALDI-TOF質(zhì)譜的基本原理蛋白鑒定和蛋白質(zhì)組分析定量蛋白質(zhì)組學(xué)細(xì)菌鑒定血清多肽譜分析分子成像內(nèi)容提要患者血清樣品磁珠分離過程數(shù)據(jù)分析臨床結(jié)果***疾病正常正常BindingWashingElutionMALDITOF檢測血清多肽譜的分析流程可選擇的磁珠類型HydrophobicInteractionMB-HIC1MB-HIC3

MB-HIC8

MB-HIC18ImmobilizedMetalAffinity

ChromatographyMB-IMAC-Fe

MB-IMAC-CuIonExchangeMB-WCX

MB-WAX磁珠捕獲低豐度蛋白的過程疾病診斷標(biāo)志物的篩查正常組疾病組疾病診斷結(jié)果的報(bào)告3000400050006000m/z

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