鐵皮石斛嫩莖液體培育生產技術規(guī)程

DB32/T××××1DB32/T××××—2019PAGE2鐵皮石斛嫩莖液體培育生產技術規(guī)程1范圍本標準規(guī)定了鐵皮石斛嫩莖液體培育的術語和定義、生產條件、種源培育、培育生產、規(guī)?；a、日常管理、采收、質量等劃分和包裝、運輸及貯存。

本標準適用于鐵皮石斛嫩莖液體培育。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期引用文件，僅所注日期版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1鐵皮石斛嫩莖液體培育（ThecultivationfortenderstemsofDendrobiumofficinaleinsubmergedculture）從鐵皮石斛中分離植物愈傷組織，經誘導分化及馴化篩選，利用離體培養(yǎng)生物技術擴增培育的無農藥殘留、重金屬含量較低、高醇浸出物含量鐵皮石斛幼嫩莖的培育技術。4生產條件室內環(huán)境為十萬級以上潔凈度的潔凈間。保持室溫25oC~28oC。均勻柔和人工光，增補4:1紅藍光，光照強度為2000Lux，光暗周期8h:16h。空氣相對濕度40%~70%。生產環(huán)境、生產用水和過濾水應分別符合GB5749和GB/T6682的規(guī)定。5種源培育與增殖5.1培養(yǎng)基配制采用MS培養(yǎng)基+0.5mg/LNAA+0.5mg/LKT+20g/L葡萄糖+10g/L瓊脂固體培養(yǎng)基進行種源細胞固體培養(yǎng)。采用MS培養(yǎng)基+0.5mg/LNAA+0.5mg/LKT+20g/L葡萄糖培養(yǎng)液進行種源細胞液體培養(yǎng)。5.2種源細胞增殖將成熟鐵皮石斛莖段插入固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得愈傷組織細胞。在相同固體培養(yǎng)基條件下增殖種源細胞。5.3種源細胞培育按照鮮重20g/L~30g/L接種量，采用無菌操作，將種源細胞轉接至2L~5L玻璃瓶中進行液體培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中向培養(yǎng)液中通入無菌空氣，空氣流速為0.75L/min~1L/min，培養(yǎng)周期為30d~45d。6培育生產6.1培養(yǎng)基配制采用MS培養(yǎng)基+0.5mg/LNAA+1mg/LKT+20g/L葡萄糖+5%麥芽糖培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。6.2培育操作按40g/L~50g/L接種量，將種源細胞轉接至10L玻璃瓶中。在培養(yǎng)過程中，將無菌空氣通入培養(yǎng)瓶中，空氣流速為0.75L/min~1L/min，培養(yǎng)周期為30d~45d。待嫩莖生長總體積至培養(yǎng)瓶總體積的2/3時，采收或留做下一階段種源。7規(guī)?；a按40g/L~50g/L接種量，將采收的種源細胞轉接至50L~100L生物反應器中培養(yǎng)生產，其它按本標準第6章的規(guī)定執(zhí)行。8日常管理一旦發(fā)現細菌或真菌的污染，立即將污染品移出培育生產間并進行濕熱高溫滅菌。9采收采收時剔除褐化植株，用過濾水緩慢沖洗嫩莖3min~5min，300rpm/min脫水離心3min，甩脫浮水后可直接制備成鐵皮石斛嫩莖鮮品，或65℃烘干制備為干品。10質量等級劃分鐵皮石斛嫩莖質量等級劃分要求見表1。表1鐵皮石斛嫩莖質量等級劃分要求等級要求特一級足干，形態(tài)規(guī)則，長度大于6mm，嫩莖分枝簇狀均一排列，翠綠色。特級足干，形態(tài)基本規(guī)則，長度在3~6mm，嫩莖偶見小嫩葉，黃綠或翠綠色。一級足干，形態(tài)相似，長度在1~3mm，嫩莖混有嫩葉，黃綠或翠綠色。工業(yè)級足干，形態(tài)相似，長度小于1mm，嫩莖混有嫩葉，黃綠或翠綠色。11包裝、運輸、儲存11.1包裝分級后分別密封包裝，包裝上應標注品名、規(guī)格、產地、生產批號、合格標