T-QGCML 4274-2024 銀杏葉中總黃酮的測定

ICS71.040.40CCSX04DeterminationoftotalflavonoidsinGinkgobilobaleavesIT/QGCML4274—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術語和定義 4原理 5試劑與材料 6儀器設備 27試樣制備 28分析步驟 29結果計算與表達 310精密度 3T/QGCML4274—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由運城市綜合檢驗檢測中心提出。本文件由全國城市工業(yè)品貿(mào)易中心聯(lián)合會歸口。本文件起草單位：運城市綜合檢驗檢測中心、運城市市場監(jiān)管綜合行政執(zhí)法隊、山西大學、玖零零幺質(zhì)量研究院（山西）有限公司。本文件主要起草人：曹本男、韓珍珍、竇夢璇、李宣英、張志斌、谷文建、王彬、薄濤。本文件為首次發(fā)布。1T/QGCML4274—2024銀杏葉中總黃酮的測定本文件規(guī)定了銀杏葉中總黃酮測定的術語和定義、原理、試劑與材料、儀器設備、試樣制備、分析步驟、結果計算與表達、精密度。本文件適用于銀杏葉中酮類化合物總含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1總黃酮totalflavonoids廣泛存在于植物界的一類具有苯并芘喃環(huán)結構的黃酮類化合物的總稱，包括黃酮、黃酮醇、雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色昔及新黃酮類等。3.2銀杏葉ginkgobilobaleaf銀杏科植物銀杏的干燥葉。4原理銀杏葉中的總黃酮（以蘆丁計）經(jīng)乙醇溶液提取后，在弱堿性條件下與鋁鹽生成螯合物，加入氫氧化鈉溶液后顯色，在波長510mm處測定吸光度值。在一定濃度范圍內(nèi)，該螯合物的吸光度值與總黃酮含量成正比，采用標準曲線法定量。5試劑與材料5.1一般規(guī)定除另有說明外，所用試劑均為分析純和GB/T6682中規(guī)定的一級水。5.2試劑5.2.1無水乙醇（CH3CH2OH）：分析純。5.2.2亞硝酸鈉（NANO2）：分析純。5.2.3硝酸鋁（AI（NO3）3）：分析純。5.2.4氫氧化鈉（NaOH）：分析純。2T/QGCML4274—20245.3溶液配制5.3.1乙醇溶液（7+3）：量取70mL無水乙醇加入30mL純化水中，混勻備用。5.3.2亞硝酸鈉溶液（50g/L）：準確稱取5.00g亞硝酸鈉于100mL容量瓶中，加適量水溶解，加水定容至刻度，搖勻，備用。5.3.3硝酸鋁溶液（100g/L）：準確稱取10.00g硝酸鋁于100mL容量瓶中，加適量水溶解，加水定容至刻度，搖勻，備用。5.3.4氫氧化鈉溶液（40g/L）：準確稱取8.00g氫氧化鈉于200mL容量瓶中，加適量水溶解，用水定容至刻度，搖勻，備用。5.4標準品蘆丁標準品（C27H30O16，CAS號：153-18-4）純度大于或等于98.0或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。5.5標準溶液配制準確稱蘆丁標準品13.40mg（精確至0.0001g）至50mL容量瓶中，加乙醇溶液（5.3.1）適量并超聲使溶解，定容至刻度，搖勻，配制成0.268mg/mL的蘆丁標準溶液。5.6材料微孔濾膜：0.45μm，有機系。6儀器設備6.1紫外可見分光光度計。6.2分析天平，感量為0.01g和0.0001g。6.3粉碎機。6.4超聲波清洗器。6.5水浴鍋。6.6干燥箱。7試樣制備7.1試樣處理將采集來的銀杏葉除去灰塵、病害葉，用清水洗凈，瀝干，于50℃的干燥箱內(nèi)烘24h。取烘干后的樣品約20g，將其放入粉碎機中粉碎，過80目標準篩，裝袋置于低溫避光處保存?zhèn)溆谩?.2試樣提取取銀杏葉干粉末約1g（精確至0.0001g），置三角瓶中，加50mL的乙醇溶液（5.3.1）冷浸水浴回流提取1h，過濾，合并濾液，用乙醇溶液（5.3.1）洗滌濾渣并定容至100mL的量瓶中，搖勻，濾過（5.6）作為試液，待用。8分析步驟8.1標準曲線的繪制3T/QGCML4274—20248.1.1精密量取蘆丁標準溶液（5.5）0mL、0.1mL、0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2.0mL分別置10mL容量瓶中，分別加乙醇2.0mL，各加亞硝酸鈉溶液(5.3.2)0.4mL，搖勻，放置6min，加硝酸鋁溶液(5.3.3)0.4mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉溶液(5.3.4)4.0mL，加水至刻度搖勻，放置15min，即得到蘆丁含量分別為0.00mg/L、2.68mg/L、10.72mg/L、21.44mg/L、32.16mg/L、42.88mg/L和53.60mg/L的標準系列濃度。8.1.2以相應試劑作空白，在510mm波長處測定吸光度值，以蘆丁質(zhì)量濃度x（mg/L）為橫坐標，相應的吸光度值y為縱坐標，繪制標準曲線，得到標準曲線回歸方程。8.2測定步驟8.2.1精密量取待測液1.0mL，置10mL容量瓶中，加水至2.0mL，加亞硝酸鈉溶液（5.3.2）0.4mL搖勻，放置6min，加硝酸鋁溶液（5.3.3）0.4mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉溶液（5.3.4）4mL，加水至刻度，搖勻，放置15min。8.2.2試樣于510mm波長處測定，以測得吸光值由標準曲線查得試樣待測液中總黃酮的含量，同時做空白實驗。8.3空白試驗分取1.0mL乙醇溶液（5.3.1）于10.0mL量瓶中，加水至2.0mL，其他操作步驟同8.2。9結果計算與表達試樣中總黃酮含量以蘆丁的含量（百分含量）計，按公式（1）計算，測定結果保留三位有效數(shù)字：式中：ω——試樣中總黃酮含量的數(shù)值，單位為毫克每克(mg/g)；p——從標準曲線上查得試樣待測液中總黃酮的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每升(mg/L)；p0——從標準曲線上查得空白待測液中總黃酮的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每升(mg/L)；V1——試樣中加入并定容的提取溶液體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；V3——試樣的最終定容體積的數(shù)值，單位為