淋巴細(xì)胞表面抗原檢測(cè)1113碩士班課件

淋巴細(xì)胞外表抗原檢測(cè)--免疫熒光法2021-11-13碩士班2根本概念

所有參與免疫應(yīng)答以及與免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞均被稱為免疫細(xì)胞。

包括淋巴細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、DC、各種粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、肥大細(xì)胞、干細(xì)胞。3免疫細(xì)胞別離方法：根據(jù)不同免疫細(xì)胞外表標(biāo)志:FACS、MACS根據(jù)細(xì)胞理化性質(zhì)：1〕根據(jù)細(xì)胞比重差異：自然沉降法、密度梯度離心法、改變細(xì)胞密度法2〕根據(jù)細(xì)胞黏附特性：B細(xì)胞黏附于尼龍棉3〕根據(jù)細(xì)胞對(duì)滲透壓變化的敏感度：紅細(xì)胞對(duì)低滲敏感淋巴細(xì)胞是指在適應(yīng)性免疫中起關(guān)鍵作用的白細(xì)胞，由淋巴器官產(chǎn)生，機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分。主要指B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，二者外表抗原受體具有高度多樣性，經(jīng)抗原激發(fā)可分化為抗原特異性效應(yīng)細(xì)胞，分別介導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫。淋巴器官根據(jù)其發(fā)生和功能的差異可分為：中樞淋巴器官〔又名初級(jí)淋巴器官〕：包括胸腺、腔上囊或其相當(dāng)器官。它們無(wú)須抗原刺激即可不斷增殖淋巴細(xì)胞，成熟后將其轉(zhuǎn)送至周圍淋巴器官。周圍淋巴器官〔又名次級(jí)淋巴器官〕：包括脾、淋巴結(jié)等。成熟淋巴細(xì)胞需依賴抗原刺激而分化增殖，繼而發(fā)揮其免疫功能。在此我們將要討論CD4+

和CD8+

T淋巴細(xì)胞檢測(cè)的方法和意義。2024/6/25淋巴細(xì)胞5T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)中的主要調(diào)節(jié)及效應(yīng)細(xì)胞，在正常機(jī)體內(nèi)各淋巴細(xì)胞亞群相互作用，可通過(guò)對(duì)抗原識(shí)別、處理、遞呈引起多種細(xì)胞因子同多種細(xì)胞之間的網(wǎng)絡(luò)聯(lián)系，構(gòu)成維持免疫功能的生理平衡，維持著機(jī)體正常免疫功能。當(dāng)不同淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異常時(shí)，可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂并發(fā)生一系列病理變化。因此，Ｔ淋巴細(xì)胞亞群的免疫分型能夠提供有關(guān)患者免疫狀態(tài)的重要信息。T淋巴細(xì)胞2024/6/25早期將T細(xì)胞中的CD4+T細(xì)胞分為Thl和Th2兩個(gè)亞群。Thl細(xì)胞通過(guò)分泌IL-2、、IL-12、IFN-γ和TNF-

α等細(xì)胞因子，介導(dǎo)與細(xì)胞毒和局部炎癥有關(guān)的免疫應(yīng)答，參與細(xì)胞免疫及遲發(fā)型超敏反響。在抗感染、抗腫瘤反響中發(fā)揮重要作用。Th2細(xì)胞那么通過(guò)分泌IL-4、IL-5、

IL-6、IL-10和IL13等細(xì)胞因子，其主要功能為刺激B細(xì)胞增殖并產(chǎn)生抗體，促進(jìn)機(jī)體的體液免疫應(yīng)答。2024/6/25調(diào)節(jié)T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)也是近年來(lái)認(rèn)識(shí)的一種重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞在TGF-β單獨(dú)的誘導(dǎo)下那么而分化成Treg細(xì)胞，分泌TGF-β并表達(dá)Foxp3，參與免疫的調(diào)節(jié)。Thl7是一種能產(chǎn)生IL-17卻不產(chǎn)生IFN-γ和IL-4的CD4+T細(xì)胞，目前的研究證實(shí)了TGF-β和IL-6在Thl7細(xì)胞分化啟動(dòng)過(guò)程中的重要作用。同時(shí)，轉(zhuǎn)錄因子STAT3和RORγt，在Thl7的分化過(guò)程中也起著重要的調(diào)節(jié)作用。2024/6/25Th1/Th2

亞群及其相互之間的平衡在免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵的作用，Th1/Th2

平衡的失調(diào)與多種疾病的發(fā)生開展和預(yù)后有著密切的關(guān)系。目前已發(fā)現(xiàn)許多感染性疾病、自身免疫性疾病、過(guò)敏性疾病以及移植排斥反響等都與Th1/Th2

平衡有關(guān)。建立穩(wěn)定有效的細(xì)胞內(nèi)因子檢測(cè)方法對(duì)于準(zhǔn)確說(shuō)明Th1/Th2細(xì)胞的作用非常重要。目前檢測(cè)的主要方法：酶聯(lián)免疫法、ELISPOT法、熒光定量法及原位雜交等方法。2024/6/25分化抗原cIusterofdifferentiation,CD不同譜系細(xì)胞在分化、成熟、活化過(guò)程中,出現(xiàn)或消失的細(xì)胞外表標(biāo)志。細(xì)胞外表標(biāo)志通常用單克隆抗體來(lái)識(shí)別。每個(gè)抗體都有指定的CD編號(hào),能被特定抗體識(shí)別的特定抗原通常具有相同的編號(hào),例如,被“CD1抗體〞識(shí)別的抗原稱為“CD1抗原〞。CD4細(xì)胞，作為淋巴細(xì)胞的一種，是人體中調(diào)控免疫系統(tǒng)最重要的樞紐細(xì)胞，其數(shù)量能夠最直接的反響人體免疫功能的狀態(tài)。CD4細(xì)胞檢測(cè)廣泛應(yīng)用于對(duì)人體免疫功能狀況的評(píng)估，有助于腫瘤、糖尿病、冠心病、艾滋病等疾病的早期發(fā)現(xiàn)及臨床診療2024/6/25人體內(nèi)的淋巴細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)根本是一樣的，但其功能各異，對(duì)T細(xì)胞、B細(xì)胞和醞細(xì)胞及其有關(guān)的亞群的相應(yīng)外表標(biāo)志檢測(cè)，藉以判斷機(jī)體的免疫水平。一、T淋巴細(xì)胞外表標(biāo)志的檢測(cè)T細(xì)胞外表標(biāo)志抗體致敏細(xì)胞花環(huán)法免疫細(xì)胞化學(xué)法免疫熒光法T細(xì)胞亞群檢測(cè)

2024/6/25T細(xì)胞外表標(biāo)志

T細(xì)胞是參與機(jī)體細(xì)胞免疫反響和在免疫應(yīng)答反響中起主導(dǎo)調(diào)節(jié)作用的一組免疫細(xì)胞。所有的T細(xì)胞均有共同的標(biāo)志性抗原，不同功能的T細(xì)胞亞群又具有各自的標(biāo)志性抗原。最常用單克隆抗睞鑒定和檢測(cè)計(jì)數(shù)T細(xì)胞及亞群的外表標(biāo)志抗體致敏細(xì)胞花環(huán)法

用相應(yīng)的抗CD3單克隆抗體吸附于醛化的紅細(xì)胞(致敏)，當(dāng)其與受檢的細(xì)胞混勻后，結(jié)合有蘭細(xì)胞的單抗與待測(cè)細(xì)胞上的CD3抗原結(jié)合形成橋聯(lián)，由于參加的紅細(xì)胞多于受檢細(xì)胞，陽(yáng)性的受程細(xì)胞能與致敏的紅細(xì)胞結(jié)合而形成玫瑰把戲的花環(huán)，凡受檢細(xì)胞周圍黏附3個(gè)和3個(gè)以上紅細(xì)胞牽為花環(huán)形成細(xì)胞，計(jì)算花環(huán)形成細(xì)胞與計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞之比。

2024/6/252024/6/25T細(xì)胞亞群檢測(cè)

采用三色標(biāo)記單克隆熒光抗體標(biāo)記單個(gè)核細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)分析，可對(duì)

T細(xì)胞及亞群作出精確分類。2024/6/25免疫細(xì)胞定量檢測(cè)，如T淋巴細(xì)胞亞群〔CD3、CD4、CD8等〕檢測(cè)，能精確觀察免疫細(xì)胞數(shù)值變化，評(píng)估免疫狀況。通常采用流式細(xì)胞儀法，特別針對(duì)CD4細(xì)胞檢測(cè)，此方法已被稱作“金標(biāo)準(zhǔn)〞。T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)T淋巴細(xì)胞檢測(cè)免疫細(xì)胞活性檢測(cè)，如T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，根據(jù)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度測(cè)定免疫應(yīng)答功能，但功能檢測(cè)仍需結(jié)合細(xì)胞定量檢測(cè)，結(jié)果更可靠。流式細(xì)胞儀T細(xì)胞外表標(biāo)志及其亞群T細(xì)胞有兩大亞群：CD4+CD8+根據(jù)具體功能有分不同亞群：TdTiThTcTs受抗原或細(xì)胞因子激活就是活化的T細(xì)胞不同的活化細(xì)胞功能不同：Tc活化后成CTL主要?dú)徊《靖腥镜募?xì)胞或癌細(xì)胞，Ts活化主要抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體和其他T細(xì)胞的分化，起調(diào)節(jié)免疫作用，Td活化那么適當(dāng)多種淋巴因子導(dǎo)致炎癥，排除抗原，Th也主要協(xié)助其他免疫細(xì)胞發(fā)揮功能，是免疫應(yīng)答必不可少的。2024/6/25T細(xì)胞外表標(biāo)志及其亞群

CD3+CD4+CD8-輔助性T細(xì)胞〔helpTcell,Th〕CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞〔cytotoxicTcell,TcorCTL〕CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞〔regulatoryTcell,TrorTreg〕2024/6/2517SmIg、Fc受體、補(bǔ)體受體、EB病毒受體，局部CD分子是B細(xì)胞的重要外表標(biāo)志，其中以SmIg為B細(xì)胞所特有，是鑒定B細(xì)胞可靠的指標(biāo)。CD19/CD5分子：可將B細(xì)胞區(qū)分為B1細(xì)胞和B2細(xì)胞，B1細(xì)胞為CD19和CD5雙陽(yáng)性，而B2細(xì)胞僅為CD19陽(yáng)性，B2細(xì)胞為通常所指的B細(xì)胞。B細(xì)胞外表標(biāo)志18

人類NK細(xì)胞外表標(biāo)志主要以CD16、CD56來(lái)認(rèn)定，臨床將CD3-CD56+CD16+淋巴細(xì)胞認(rèn)定為NK細(xì)胞。NK細(xì)胞外表標(biāo)志19FACS2024/6/250.4um40um細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞粒度DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量染色體分析細(xì)胞功能細(xì)胞外表/胞漿/核的特異性抗原細(xì)胞活性細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子酶活性激素結(jié)合位點(diǎn)細(xì)胞受體細(xì)胞凋亡在上述信號(hào)根底上的細(xì)胞分選流式細(xì)胞儀組成液流系統(tǒng)：形成層流系統(tǒng)，聚焦細(xì)胞光學(xué)系統(tǒng)：產(chǎn)生和收集光學(xué)信號(hào)電子系統(tǒng)：光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，進(jìn)行信號(hào)處理25熒光激活細(xì)胞別離儀別離法2024/6/25光學(xué)系統(tǒng)

激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)包括:-激光器-透鏡和反射鏡，將激光引導(dǎo)到檢測(cè)區(qū)域收集光學(xué)系統(tǒng)包括:濾光片，將產(chǎn)生的光信號(hào)引導(dǎo)到對(duì)應(yīng)的光學(xué)接收器光學(xué)系統(tǒng)

激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)包括:-激光器-透鏡和反射鏡，將激光引導(dǎo)到檢測(cè)區(qū)域收集光學(xué)系統(tǒng)包括:濾光片，將產(chǎn)生的光信號(hào)引導(dǎo)到對(duì)應(yīng)的光學(xué)接收器懸浮狀態(tài)的細(xì)胞單個(gè)流過(guò)流動(dòng)室細(xì)胞被激發(fā)產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)信號(hào)被采集轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)存儲(chǔ)于電腦上液流系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)電子系統(tǒng)前向散射光forwardanglelightscatterFALS、FSC、FS光學(xué)檢測(cè)器在入射光的正前方所收集的低角度光信號(hào),與細(xì)胞或顆粒的大小和體積有關(guān)。側(cè)向散射光sidescatter,SSC光學(xué)檢測(cè)器在入射光的直角處所收集的細(xì)胞散射的光信號(hào),與細(xì)胞或顆粒的內(nèi)部和外表結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度有關(guān),如細(xì)胞質(zhì)顆粒性、膜不規(guī)那么性及核形等。2024/6/25熒光強(qiáng)度f(wàn)luorescenceintensity結(jié)合到細(xì)胞或顆粒上的熒光素的量。熒光信號(hào)的通道數(shù)越大提示熒光強(qiáng)度越強(qiáng)。在恰當(dāng)?shù)臈l件下,熒光強(qiáng)度與一個(gè)細(xì)胞和特定熒光素相結(jié)合的位點(diǎn)數(shù)相關(guān)。自發(fā)熒光autofIuorescence未染色細(xì)胞白身發(fā)出的熒光。通常由嘧啶和黃素核苷酸所產(chǎn)生,自發(fā)熒光的強(qiáng)度取決于激發(fā)光的波長(zhǎng),且隨所分析細(xì)胞的類型和(或)細(xì)胞活化狀態(tài)而改變。通過(guò)特殊的標(biāo)本處理方法可以降低自發(fā)熒光的強(qiáng)度(如用結(jié)晶紫孵育)。2024/6/25顏色補(bǔ)償coIorcompensation由于一種熒光素發(fā)射的熒光疊加到其他熒光素發(fā)射的波長(zhǎng)范圍內(nèi)而造成熒光信號(hào)重疊，通過(guò)在其他熒光信號(hào)中扣除已測(cè)定熒光信號(hào)的一局部而糾正顏色重疊造成的計(jì)數(shù)錯(cuò)誤?？鄢臒晒饬渴怯们‘?dāng)?shù)膯稳緦?duì)照來(lái)確定的。被校正的信號(hào)反映了單熒光信號(hào)的發(fā)射情況。設(shè)門gate在流式細(xì)胞儀顯示的象限圖上基于一組參數(shù)(如熒光對(duì)SSC、FSC/SSC等)來(lái)確定的所要分析的目的細(xì)胞群。對(duì)限定區(qū)內(nèi)的目的細(xì)胞群通過(guò)其他參數(shù)(如熒光參數(shù))進(jìn)一步分析其表達(dá)情況。2024/6/25數(shù)據(jù)采集

三種數(shù)據(jù)：

-前向散射光FSC

-側(cè)向散射光SSC

-各種熒光散射光FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3，F(xiàn)L4當(dāng)使用激光光源時(shí)，在前向方向〔和激光行進(jìn)的方向相同〕上可用前向散射光接收通道接收到一定量的散射光前向散射光的強(qiáng)度是和細(xì)胞或其他檢測(cè)顆粒的大小、形狀密切相關(guān)的數(shù)據(jù)采集-前向散射光當(dāng)激光光源被使用時(shí)，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生，可以用90o

角的側(cè)向散射光檢測(cè)通道來(lái)采集側(cè)向散射光的強(qiáng)度和細(xì)胞或其他檢測(cè)顆粒的顆粒密度、內(nèi)部復(fù)雜程度密切相關(guān)數(shù)據(jù)采集-側(cè)向散射光外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖

顆粒雜質(zhì)、氣泡對(duì)檢測(cè)的影響細(xì)胞標(biāo)記上熒光物質(zhì)后，這種熒光物質(zhì)要求特定波長(zhǎng)的激發(fā)光來(lái)激發(fā)，同時(shí)發(fā)出特定波長(zhǎng)的光熒光物質(zhì)被激發(fā)以后產(chǎn)生的發(fā)射光將由特定的熒光通道來(lái)接收特定檢測(cè)是通過(guò)光學(xué)濾片和透鏡來(lái)控制的數(shù)據(jù)采集-熒光信號(hào)熒光強(qiáng)度是和細(xì)胞上標(biāo)記上的熒光染料的量正相關(guān)數(shù)據(jù)采集電壓

信號(hào)放大方式：log、lin信號(hào)類型：A,W,H電壓的調(diào)節(jié):根據(jù)陰性對(duì)照管來(lái)調(diào)節(jié)閾值可以以任意參數(shù)及多個(gè)參數(shù)的組合作為閾值大多數(shù)樣本都可以設(shè)定FSC/SSC閾值以下的信號(hào)不存儲(chǔ)根據(jù)陰性對(duì)照管來(lái)調(diào)節(jié)目的是將不需要的雜質(zhì)信號(hào)，噪音信號(hào)，無(wú)用的細(xì)胞信號(hào)等扣除，使收集到的都是有用信號(hào)補(bǔ)償

補(bǔ)償方式：任意兩個(gè)通道之間，可以采用手動(dòng)或自動(dòng)補(bǔ)償。補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié):根據(jù)單染對(duì)照管來(lái)調(diào)節(jié)數(shù)據(jù)分析流式數(shù)據(jù)直方圖散點(diǎn)圖等高線圖密度圖三維圖統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)直方圖直方圖(DistributionHistogram)橫坐標(biāo)代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，單位是對(duì)數(shù)，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)。縱坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)。散點(diǎn)圖散點(diǎn)圖(DotPlot)X坐標(biāo)為該細(xì)胞一參數(shù)相對(duì)含量，Y坐標(biāo)為該細(xì)胞另一參數(shù)的含量，可以將細(xì)胞亞群分開。等高線圖和密度圖三維圖統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)Events百分比平均熒光強(qiáng)度熒光中位值CVSD……數(shù)據(jù)獲取與分析電壓閾值補(bǔ)償獲得數(shù)據(jù)畫圖設(shè)門統(tǒng)計(jì)熒光素標(biāo)記的單克隆抗體采用熒光素直接標(biāo)記的單克隆抗體(單抗)，稱直標(biāo)抗體。選擇直標(biāo)抗體是淋巴細(xì)胞亞群分析的關(guān)鍵步驟,要考慮所選抗體對(duì)細(xì)胞的反響性。單抗CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56。2024/6/25單抗對(duì)細(xì)胞的反響性CD45表達(dá)于所有白細(xì)胞;CD3表達(dá)于T淋巴細(xì)胞;CD4表達(dá)于T輔助/誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞(CD4+T細(xì)胞)和單核細(xì)胞;CD8表達(dá)于細(xì)胞毒T細(xì)胞(CD8-T)和NK細(xì)胞;CD19表達(dá)于B淋巴細(xì)胞;CD16表達(dá)于NK細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等;CD56表達(dá)于NK細(xì)胞和細(xì)胞毒T細(xì)胞。單抗對(duì)淋巴細(xì)胞亞群的鑒定CD4、CD8、CD16和CD56單抗均不能特異性標(biāo)記淋巴細(xì)胞某一亞群。采用CD45和(或)CD3作為設(shè)門抗體,同時(shí)兼做質(zhì)控試劑。CD3+T細(xì)胞標(biāo)記為CD3+,CD4+T細(xì)胞標(biāo)記為CD3+CD4+CD8+T細(xì)胞標(biāo)記為CD3+CD8+B細(xì)胞標(biāo)記為CD3-CD19+NK細(xì)胞標(biāo)記為CD3-CD56+或CD3ˉCD(16+56)+2024/6/25直標(biāo)抗體常用熒光染料異硫氰酸熒光素(FITC)藻紅蛋白(PE/RD1)藻紅蛋白偶聯(lián)物(PECY5)多甲藻葉綠素蛋白(PerCP)藻紅蛋白-德州紅偶聯(lián)物(ECD)別藻青蛋白(APC)除別藻青蛋白(APC)外,其他熒光染料均采用488nm的激發(fā)光源激發(fā),最大發(fā)射波長(zhǎng)分別為525nm、575nm、670nm、675nm和613nm。別藻青蛋白(APC)的激發(fā)光源為630nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為660nm。2024/6/25溶血素使用與儀器相匹配的溶血素(內(nèi)含固定液),并嚴(yán)格按照使用說(shuō)明和本卷須知進(jìn)行操作。如果使用沒有固定作用的溶血?jiǎng)?如氯化銨和低滲緩沖液等),染色后標(biāo)本需要保存在4℃,并在1h內(nèi)完成上機(jī)固定液0.1%-2.0%多聚甲醛或甲醛緩沖液是常用的固定液,用于對(duì)感染的標(biāo)本在分析前進(jìn)行滅活,能夠滅活HIV等病毒的3個(gè)-5個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)的病毒載量。在染色過(guò)程中的最后一次離心后,用含有多聚甲醛或甲醛緩沖液(Ph7.0-7.4)處理,4℃保存待測(cè)。2024/6/2556流式細(xì)胞分析儀1973年BD公司與StanfordUniversity合作開發(fā)世界上第一臺(tái)商用流式細(xì)胞儀FACSI。

1980年北京師范大學(xué)引進(jìn)中國(guó)第一臺(tái)流式細(xì)胞儀FACSIII。實(shí)驗(yàn)應(yīng)用

流式細(xì)胞儀主要有兩個(gè)最根本的用途：可以定量分析鑒定活細(xì)胞外表表達(dá)的特異分子，進(jìn)行特定的活細(xì)胞群的別離和純化。2024/6/25免疫細(xì)胞群的分類

靜止淋巴細(xì)胞之間從其外觀形態(tài)難以區(qū)分，都是以致密的核及少量細(xì)胞質(zhì)組成的小而圓的細(xì)胞為特征。然而，這些細(xì)胞確是由功能各異的不同細(xì)胞亞群所組成，各種細(xì)胞群表達(dá)各自特殊的外表分子。B淋巴細(xì)胞上表達(dá)有特異的膜外表免疫球蛋白〔mIg〕，而成熟的T淋巴細(xì)胞外表表達(dá)特異的CD3分子。T淋巴細(xì)胞又可進(jìn)一步按其表達(dá)的不同外表標(biāo)志細(xì)分成不同的亞群，如CD4+CD8-和CD4-CD8+亞群。因此，可由這些特征性的外表標(biāo)志，將細(xì)胞分為不同的群或亞群。2024/6/25免疫細(xì)胞的分化發(fā)育

免疫細(xì)胞分化發(fā)育的不同階段，其外表標(biāo)志也在不斷地發(fā)生著變化。如胸腺細(xì)胞〔發(fā)育過(guò)程中的T淋巴細(xì)胞〕，在發(fā)育的不同階段從不成熟到成熟，其外表標(biāo)志經(jīng)歷了從雙陰性〔CD4-CD8-〕到雙陽(yáng)性〔CD4-CD8-〕，直到單陽(yáng)性〔CD4+CD8-或CD4-CD8+〕的過(guò)程。正常生理狀態(tài)下，發(fā)育不同階段的胸腺細(xì)胞以一定的比例存在于胸腺中。通過(guò)檢測(cè)這些標(biāo)志，即可判定某些因素〔基因突變等〕對(duì)胸腺細(xì)胞發(fā)育的影響。2024/6/25

免疫細(xì)胞的分子表達(dá)

免疫細(xì)胞的不同因素的影響下，其表達(dá)的分子也會(huì)發(fā)生變化。通過(guò)檢測(cè)這些分子的變化，可分析細(xì)胞功能以及細(xì)胞分化狀態(tài)等。靜止的T淋巴細(xì)胞不表達(dá)或低水平表達(dá)CD69分子；而一經(jīng)活化，其表達(dá)CD69分子數(shù)量明顯增加。可通過(guò)檢測(cè)這些活化標(biāo)志的變化來(lái)判定細(xì)胞狀態(tài)以及研究影響細(xì)胞活化狀態(tài)的因素。2024/6/25器材10ml圓底試管，F(xiàn)ACs專用離心管，滴管，吸管血球記數(shù)板，蓋玻片4℃冰箱，離心機(jī)，流式細(xì)胞儀試劑抗凝全血、淋巴細(xì)胞別離液熒光素標(biāo)記抗體FACs緩沖液Hanks液2024/6/25操作步驟抗凝全血