GB/T 42956-2023 飼料中泰樂菌素、泰萬菌素、替米考星的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（正式版）

測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T42956—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC76)提出并歸口。本文件起草單位：四川省飼料工作總站、四川省中安檢測有限公司、新疆維吾爾自治區(qū)獸藥飼料監(jiān)察所。1GB/T42956—2023測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1范圍本文件描述了飼料中泰樂菌素、泰萬菌素和替米考星的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本文件適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補(bǔ)充料和添加劑預(yù)混合飼料中泰樂菌素、泰萬菌素和替米考星的測定。本文件的方法檢出限為0.02mg/kg,定量限為0.05mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理試樣中的待測物用乙腈溶液提取，經(jīng)混合型陽離子交換柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標(biāo)法定量。5試劑或材料5.450%乙腈溶液：取500mL乙腈，加水稀釋至1000mL,混勻。5.50.1%甲酸溶液：取1mL甲酸(5.3),加水稀釋至1000mL,混勻。5.6磷酸二氫鉀溶液(0.1mol/L):稱取磷酸二氫鉀13.61g,加水溶解并稀釋至1000mL,混勻。5.75%氨化甲醇：取氨水5mL,加甲醇稀釋至100mL,混勻。5.8標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(1mg/mL):稱取泰樂菌素A(CAS號(hào)：1401-69-0,含量≥98.0%)、泰萬菌素(CAS號(hào)：63409-12-1,含量≥97.0%)、替米考星標(biāo)準(zhǔn)品(CAS號(hào)：108050-54-0,含量≥94.0%)各10mg2GB/T42956—2023效期3個(gè)月。5.10內(nèi)標(biāo)貯備溶液(0.5mg/mL):稱取替米考星-d?(CAS號(hào)：108050-54-0,含量≥98.0%)5mg(精確至0.01mg),用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻。-18℃以下保存，有效期3個(gè)月。5%氨化甲醇(5.7)稀釋定容，配制成質(zhì)量濃度分別為0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL和內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度均為5ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。臨用現(xiàn)配。6.3旋渦混合器。6.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于7000r/min。7樣品按GB/T20195制備試樣。取樣品至少200g,粉碎使其全部通過0.425mm孔徑的分析篩，充分混8試驗(yàn)步驟平行做兩份試驗(yàn)。稱取試樣2g(精確至0.1mg)于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)工作溶液(5.11)100μL、50%乙腈溶液(5.4)10mL,300r/min振蕩提取15min,7000r/min離心5min,移取上清液至另一50mL離心管。殘?jiān)?0%乙腈溶液(5.4)10mL重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，混勻?；旌闲完栯x子交換固相萃取柱(5.13)依次用甲醇33GB/T42956—2023時(shí)間流速A%B%00質(zhì)譜參考條件如下：d)離子源溫度：350℃;化合物名稱監(jiān)測離子對m/z定量離子對m/≈錐孔電壓V碰撞能量916.5>772.5916.5>174.2916.5>174.2泰萬菌素替米考星869.5>696.3869.5>174.2869.5>174.2替米考星-d?872.6>696.5872.6>696.54GB/T42956—20238.3.3混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液測定在儀器的最佳條件下，分別取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(5.12)和試樣溶液(8.2)上機(jī)測定。多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)色譜圖見附錄A。在相同試驗(yàn)條件下，試樣溶液中待測物的保留時(shí)間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(濃度相當(dāng))中待測物的保留時(shí)間一致，其相對偏差在±2.5%之內(nèi)。根據(jù)表2選擇的定性離子對，比較試樣譜圖中待測物監(jiān)測離子對的相對離子豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中對應(yīng)的監(jiān)測離子對的相對離子豐度，若最大允許偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在對應(yīng)的待測物。表3定性測定時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差>20～50>10～20士20士25士30士508.3.5定量按照8.3.1和8.3.2設(shè)定儀器條件，取試樣溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液上機(jī)分析，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以待測物與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)，如超出線性范圍，應(yīng)重新試驗(yàn)。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí)，試樣溶液中待測物的濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度相差不超過30%。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中泰樂菌素A、泰萬菌素和替米考星的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)wi計(jì)，數(shù)值以毫克每千克(mg/kg)表示。多點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(1)計(jì)算，單點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(2)計(jì)算：式中：…………p;——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得試樣溶液中待測物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);n——上機(jī)測定的試樣溶液超出線性范圍后，進(jìn)一步稀釋的倍數(shù)；V?———凈化時(shí)所用試樣提取溶液的體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。式中：A;——試樣溶液中待測物的峰面積；A';s———標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)的峰面積；C。---—標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);Cs—---試樣溶液中內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);5GB/T42956—2023V?--—固相萃取時(shí)洗脫液的體積，單位為毫升(mL);n——上機(jī)測定的試樣溶液超出線性范圍后，進(jìn)一步稀釋的倍數(shù)；As——試樣溶液中內(nèi)標(biāo)的峰面積；A?！獦?biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的峰面積；C'標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V?--——凈化時(shí)所用試樣溶液的體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字。10精密度在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測試結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的20%。6強(qiáng)度/cps(資料性)4210