TCSBM 0050.2-2024 創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評(píng)價(jià) 第2部分：水不溶性材料體外浸提液評(píng)價(jià)方法

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T/CSBM團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/CSBM0050.2—2024創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評(píng)價(jià)2EffectivenessevaluationofwoundrepairmaterialsPart2:Invitroextractsevaluationmethodforwaterinsolublematerials2024-05-14發(fā)布 2024-10-01實(shí)施中國(guó)生物材料學(xué)會(huì) 發(fā)布T/CSBM0050.2T/CSBM0050.2—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANIII目 次前言 II引言 III范圍 1規(guī)范性用文件 1術(shù)語(yǔ)和義 1浸提液備 1細(xì)胞增試驗(yàn) 1細(xì)胞遷試驗(yàn) 3參考文獻(xiàn) 5前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)工作導(dǎo)則 第部分：標(biāo)準(zhǔn)化件的結(jié)和起草規(guī)》的規(guī)起草。本文件是T/CSBM0050—2024《創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評(píng)價(jià)》的第2部分。包括以下部分：——第1部分：水溶性材料體外評(píng)價(jià)方法；——第2部分：水不溶性材料體外浸提液評(píng)價(jià)方法；——第3部分：刺激因子屏蔽評(píng)價(jià)方法；——第4部分：體外微血管形成試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法；——第5部分：體外細(xì)胞粘附和增殖直接接觸評(píng)價(jià)法；——第6部分：動(dòng)物食管創(chuàng)面模型促修復(fù)愈合評(píng)價(jià)方法；——第7部分：動(dòng)物胃創(chuàng)面模型促修復(fù)愈合評(píng)價(jià)方法；——第8部分：動(dòng)物腸道創(chuàng)面模型促修復(fù)愈合評(píng)價(jià)方法；——第9部分：動(dòng)物皮膚創(chuàng)面模型促修復(fù)愈合質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。本文件由中國(guó)生物材料學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：杭州英健生物科技有限公司、中國(guó)食品藥品檢定研究院、四川大學(xué)。引 言T/CSBM0050.2T/CSBM0050.2—202411創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評(píng)價(jià)第2部分：水不溶性材料體外浸提液評(píng)價(jià)方法范圍本文件規(guī)定了水不溶性創(chuàng)面修復(fù)材料體外評(píng)價(jià)的浸提液制備、細(xì)胞增殖試驗(yàn)和細(xì)胞遷移試驗(yàn)。GB/T16886.12—2023 醫(yī)療械生物評(píng)價(jià) 第部分：樣制備與照樣品T/CSBM0050.1 創(chuàng)修復(fù)材有效性價(jià) 第部：水溶性料體外價(jià)方法術(shù)語(yǔ)和定義T/CSBM0050.1界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。浸提液制備在無(wú)菌狀態(tài)下，按照以下條件制備浸提液：a) 浸提溫度：37℃±1浸提時(shí)間：24h±2h48h±2h72h±2h；浸提條件：120r/minGB/T16886.12—20231原理器具試驗(yàn)器具如下：T/CSBM0050.2T/CSBM0050.2—202422酶標(biāo)儀；電子天平；液氮罐；96試劑和耗材試驗(yàn)試劑和耗材如下：10％DMEM（10％FBSDMEM）；CCK-8細(xì)胞系樣品制備試驗(yàn)樣品將浸提液使用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋成100％、75％、50％、25％、12.5％的濃度。陽(yáng)性對(duì)照含10％FBSDMEM37120r/min24?？瞻讓?duì)照，37120r/min24h。試驗(yàn)方法1×105個(gè)/mL96100L，624h124h48h和72hCCK-83hT/CSBM0050.2T/CSBM0050.2—2024PAGEPAGE3450nm的吸光度值，按照式（1）計(jì)算細(xì)胞增殖率，評(píng)估試驗(yàn)樣品溶液不同濃度對(duì)細(xì)胞的增殖作用，并篩選出最佳增殖濃度。表1 細(xì)胞增殖驗(yàn)試驗(yàn)分組培養(yǎng)條件檢測(cè)模型觀察時(shí)間檢驗(yàn)方法陽(yáng)性對(duì)照組含10％FBSDMEM低糖培養(yǎng)基細(xì)胞系24h、48h、72hCCK-8法空白對(duì)照組無(wú)血清培養(yǎng)基試驗(yàn)組樣品無(wú)血清培養(yǎng)基溶液1??=??450????×100％·································································(1)1??450????式中：P1——細(xì)胞增殖率，％；A450nm——陽(yáng)性對(duì)照組不同濃度樣品組平均吸光度；B450nm——空白對(duì)照組平均吸光度。結(jié)果分析/（p0.0（p＞0.05）6 原理器具試驗(yàn)器具如下：酶標(biāo)儀；電子天平；液氮罐；24T75ImageJ試劑和耗材試驗(yàn)試劑和耗材如下：10％DMEM（10％FBSDMEM）；細(xì)胞系同5.2.3。樣品制備同5.3。試驗(yàn)方法按照表21×105個(gè)/mL241個(gè)復(fù)孔，24h1mL10×012h、hImageJ（2）表2 細(xì)胞遷移驗(yàn)試驗(yàn)分組培養(yǎng)條件檢測(cè)模型觀察時(shí)間檢驗(yàn)方法陽(yáng)性對(duì)照組含10％FBSDMEM低糖培養(yǎng)基細(xì)胞系0h、12h、24h顯微鏡觀察拍攝圖片空白對(duì)照組無(wú)血清培養(yǎng)基試驗(yàn)組樣品無(wú)血清培養(yǎng)基溶液2??=??0???12/??24×100％·······························································(2)2??0式中：P2——細(xì)胞遷移率，％；S0012hS2424h結(jié)果分析/（p0.0（p＞0.05）參 考 文 獻(xiàn)究[J].,2022,41(04):405-412.HangZ,MuyeH,MinyiY,etal.InVitroandVivoInvestigationonth