醉魚草總黃酮的提取及抗氧化活性研究

摘要以醉魚草為對象，選擇料液比、超聲功率、微波功率和提取時間進行單因素實驗，以單因素試驗結(jié)果為參考利用響應(yīng)面試驗設(shè)計對超聲波-微波聯(lián)合提取醉魚草中總黃酮的工藝進行篩選優(yōu)化，并對DPPH自由基及羥自由基進行體外抗氧化活性研究。修正最佳工藝條件為：料液比1：48（g/mL），超聲功率389W，微波功率446W，提取時間45min。試驗測得總黃酮得率為12.212%，與預(yù)測值12.247%相接近。在0.05～0.30mg/mL的濃度范圍內(nèi)，醉魚草總黃酮對DPPH自由基及羥自由基均有較強的清除作用，表明其具有一定的抗氧化能力。因此，響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波-微波提取醉魚草總黃酮的工藝研究具有可行性，為醉魚草的綜合利用及形成產(chǎn)業(yè)化提供一定的理論及技術(shù)支持。引言醉魚草（Buddlejalindleyanafort）為醉魚草屬馬錢科植物，廣泛生長于我國長江以南地區(qū)，馬來西亞、美洲和非洲也均有栽培。常用于皮膚紅疹、瘙癢、燒傷燙傷、清熱解毒等，是一種民間常用的中藥材。醉魚草中含醉魚草苷、洋芹素、蒙花苷等多種黃酮類成分。黃酮類物質(zhì)是一種自然饋贈給我們的天然產(chǎn)物資源，具有多種對人體有益的功能，包括抑菌抗氧化、消炎止痛、調(diào)節(jié)免疫功能、神經(jīng)調(diào)節(jié)、抗腫瘤等。目前，有關(guān)黃酮方面的應(yīng)用也越來越多，包括食物色素的添加，食品貯藏的保鮮抗菌抗氧化，以及化妝品等多方面的應(yīng)用。研究表明醉魚草中含有大量的黃酮類物質(zhì)，是良好的提取原料。目前黃酮類化合物的提取方法多種多樣，包括煎煮法、蒸餾法、連續(xù)回流提取法等，但這些方法均存在提取率不高，純度較低等缺點。超聲波提取法主要運用超聲波特有的空化效應(yīng)和良好的融合作用，提高溶劑分子的運動速率，增大介質(zhì)的穿透力使溶劑更容易滲透到藥材中；微波提取法具有安全、清潔、快速加熱、高效節(jié)能的特點。超聲波-微波聯(lián)合輔助提取法同時將兩者結(jié)合既利用了超聲波的空化作用又利用微波作為加熱源，充分利用兩者的優(yōu)勢顯著提高提取成分的提取得率。因此本次試驗采用超聲波-微波輔助提取醉魚草中總黃酮類物質(zhì)，同時結(jié)合響應(yīng)面分析試驗選取醉魚草總黃酮最佳提取工藝。并對其進行體外抗氧化活性分析，為醉魚草總黃酮的進一步加工及在醫(yī)療、食品、化工、化妝品等的綜合應(yīng)用提供數(shù)據(jù)依據(jù)。

正文部分1

實驗部分1.1

主要儀器與試劑1.2

實驗流程與方法1.2.1

醉魚草總黃酮提取流程及工藝1.2.2

醉魚草總黃酮含量測定方法1.2.3

醉魚草總黃酮的響應(yīng)面提取優(yōu)化工藝1.2.3.1

單因素實驗以醉魚草總黃酮提取率為參照標(biāo)準(zhǔn)，分別對醉魚草粉末的料液比、設(shè)置的超聲波功率、微波功率以及提取時間進行篩選，確定最佳提取條件。1.2.3.2

響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計參照1.2.3.1的實驗結(jié)果，以醉魚草總黃酮提取率為參照標(biāo)準(zhǔn)，進行響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化。1.2.4

醉魚草總黃酮體外抗氧化活性測定1.2.4.1

清除氮自由基（DPPH）能力的測定1.2.4.2

清除羥自由基能力的測定2

結(jié)果與討論2.1

單因素實驗結(jié)果2.1.1

料液比的篩選精密稱取適量的醉魚草烘干粉末，提取液用95%乙醇，按照料液比1：10、1：20、1：30、1：40、1：50（g/mL）添加至超聲波-微波輔助提取儀中，設(shè)置超聲功率為300W、微波功率為300W、提取時間為30min。參照1.3.2流程及計算公式計算得出醉魚草總黃酮提取率，如圖1所示。2.1.2

超聲功率的選擇精密稱取適量醉魚草烘干的粉末，提取液用95%乙醇于超聲波-微波輔助萃取儀中以料液比1：30（g/mL），設(shè)置超聲功率為100、200、300、400、500W、微波功率300W提取30min。參照1.2.2流程及計算公式計算得出醉魚草總黃酮提取率，如圖2所示。2.1.3

微波功率的選擇精密稱量適量醉魚草烘干的粉末，提取液用95%乙醇于超聲波-微波輔助萃取儀中以料液比1：30（g/mL），超聲功率300W，設(shè)置微波功率為100、200、300、400、500W提取30min。參照1.2.2流程及計算公式計算得出醉魚草總黃酮提取率，如圖3所示。2.1.4

提取時間的選擇精密稱量適量醉魚草烘干的粉末，提取液用95%乙醇于超聲波-微波輔助萃取儀中以料液比1：30（g/mL），設(shè)置超聲功率300W，微波功率300W，提取10、20、30、40、50min。參照1.2.2流程及計算公式計算得出醉魚草總黃酮提取率，如圖4所示。2.2

響應(yīng)面結(jié)果與分析以單因素實驗取得的結(jié)果,制定響應(yīng)面實驗的因素水平表，如表1所示。2.3

抗氧化分析2.3.1

DPPH自由基清除作用醉魚草總黃酮和Vc對氮自由基（DPPH）的清除作用如圖6所示。2.3.2

羥自由基清除作用醉魚草總黃酮和Vc對羥自由基的清除作用如圖7所示。3結(jié)論結(jié)論本實驗以醉魚草粉末作為原材料，采用超聲波-微波聯(lián)合輔助提取醉魚草總黃酮，以單因素試驗結(jié)果為考察對象結(jié)合響應(yīng)面優(yōu)化最佳提取工藝。結(jié)果表明：響應(yīng)面分析的模型良好，準(zhǔn)確度高。料液比(A)、超聲功率(B)、微波功率(C)、提取時間(D)等因素對總黃酮提取率的影響提取時間(D)＞超聲功率(B)＞微波功率(C)＞料液比(A)，醉魚草總黃酮最優(yōu)提取條件為：料液比1∶48（g/mL）、超聲功率389W，微波功率446W，提取時間45min。在此條件下提取醉魚草總黃酮得率為12.212%，與預(yù)測值12.247%接近。體外抗氧化活性分析結(jié)果表明，在0.05～0.30mg/mL的濃度范圍內(nèi)，醉魚草總黃酮對DPPH自由基清除及羥自由基的清除比Vc稍弱，但在0.30mg/mL時清除率達到了75.12%、74.56%。表明醉魚草總黃酮有良好