土壤堿性蛋白酶（Solid-AlcalaseProteaseS-ALPT）試劑盒說明書

第第頁土壤堿性蛋白酶（Solid—AlcalaseProtease，S—ALPT）試劑盒說明書土壤堿性蛋白酶（SolidAlcalaseProtease，SALPT）試劑盒說明書微量法100管/48樣注意：正式測定前務(wù)必取23個預(yù)期差別較大的樣本做猜測定測定意義：土壤蛋白酶參加土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一、SALPT在堿性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。測定原理：堿性條件下，SALPT可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)；在680nm有特征吸取峰。試驗中所需儀器及設(shè)備：可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、雙蒸水試劑構(gòu)成和配置：試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保管；試劑二：粉劑×1瓶，4℃保管；臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑4℃保管；試劑三：粉劑×1瓶，4℃保管；臨用前加入2mL試劑七，沸水浴加熱溶解，然后加入8ml試劑一，充分混勻備用，用不完的試劑4℃保管；試劑四：粉劑×1瓶，4℃保管；臨用前加入30ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保管；試劑五：液體8mL×1瓶，4℃保管；試劑六：液體1.5mL×1支，0.05mg/ml標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液，4℃保管；試劑七：液體5mL×1瓶，4℃保管；樣品處理：新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30～50目篩。測定操作：1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)整波長至680nm，蒸餾水調(diào)零。2、試劑二、三和四40℃水浴10min。3、樣本測定：試劑名稱測定管對比管風(fēng)干土樣（g）0.020.02試劑一（μL）150試劑三（μL）150混勻后，40℃水浴30min，振蕩56次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸試劑二（μL）5050混勻，8000g25℃離心10min，取上清液，在EP管或96孔板中加入下列試劑測定管對比管標(biāo)準(zhǔn)管上清液（μL）6060試劑六（μL）60試劑四（μL）280280280試劑五（μL）606060混勻，40℃水浴20min，8000g25℃離心10min，取上清液200μL，680nm下讀取各管吸光值A(chǔ)注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對比管。SALPT活性計算：單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg酪氨酸為一個SALPT活力單位。SALPT（mg/d/g土樣）=C標(biāo)準(zhǔn)×（A測定管A對比管）÷A標(biāo)準(zhǔn)管×V反總÷W÷T=24×（A測定管A對比管）÷A標(biāo)準(zhǔn)管C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05