耐高鹽核酸酶產(chǎn)品上市：解鎖高鹽條件下的DNA高效去除方案

耐高鹽核酸酶產(chǎn)品上市：解鎖高鹽條件下的DNA高效去除方案隨著生物醫(yī)藥行業(yè)的蓬勃發(fā)展，利用生物技術(shù)制備的產(chǎn)品安全性更加備受關(guān)注，其中宿主核酸的控制與去除是至關(guān)重要的。一般的生物制品使用全能核酸酶即可去除宿主核酸，但一些廣泛應(yīng)用于基因及細(xì)胞治療領(lǐng)域的生物制品制備和純化工藝需要在較高鹽濃度進(jìn)行，需要高鹽條件下具有高活性的核酸酶。義翹神州已成功開發(fā)耐鹽核酸酶產(chǎn)品（Cat#:

SASN），在200-600mM的NaCl條件下具有較高酶活，可以更高效、低成本地去除宿主核酸。宿主DNA殘留控制的法規(guī)要求生物制品在生產(chǎn)過程中通常會(huì)使用工程細(xì)胞（菌）作為宿主。宿主的核酸殘留，特別是DNA殘留會(huì)引入免疫原性、致瘤性、感染性、干擾代謝等潛在的安全風(fēng)險(xiǎn)，因此各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對生物制品的宿主核酸殘留量都有著嚴(yán)格的限度控制。各國法規(guī)對不同生物制品的宿主核酸殘留控制限度要求不同，殘留量一般控制在0.1-10ng/劑，如有殘留片段大小的限制要求，一般控制在200bp以下。如《中國藥典》（2020版）規(guī)定，疫苗類宿主DNA殘留一般控制應(yīng)在0.05-10ng/劑?！扼w內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中建議：“如有可能，建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內(nèi)，DNA殘留片段的大小控制在200bp以下”。美國FDA頒布的《Chemistry,Manufacturing,andControl(CMC)InformationforHumanGeneTherapyInvestigationalNewDrugApplications(INDs)》中要求宿主DNA殘留需控制在低于10ng/劑，并且DNA大小需小于200bp。《中國藥典》（2020版）部分生物制品殘留DNA限度要求生物制品名稱限度要求人胰島素每1.5mg人胰島素中不得超過10ng注射用人生長激素每1mg人生長激素中不高于1.5ng尼妥珠單抗注射液每1支/瓶不高于0.1ng重組乙型肝炎疫苗（釀酒酵母）不高于10ng/劑凍干人用狂犬疫苗（Vero細(xì)胞）不高于3ng/劑凍干型乙型腦炎滅活疫苗（Vero細(xì)胞）不高于0.1ng/劑Sabin株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗（Vero細(xì)胞）不高于0.05ng/劑宿主DNA殘留控制面臨的挑戰(zhàn)來源于粘滯沙雷氏菌的非特異性核酸酶，如SuperNuclease等，已廣泛應(yīng)用于上市藥品生產(chǎn)過程中的宿主核酸控制。雖然在生理鹽條件下的體外水解實(shí)驗(yàn)中，這類酶可以迅速水解魚精DNA或小牛胸腺DNA，生成小于8nt的寡核苷酸產(chǎn)物，但是在復(fù)雜的工藝條件下使用仍面臨著眾多挑戰(zhàn)。例如：?宿主DNA通常以染色質(zhì)的形式存在，且被包裹于含有宿主細(xì)胞碎片的復(fù)雜基質(zhì)中，有時(shí)需要在高于生理鹽濃度的鹽離子中才能使DNA和蛋白質(zhì)有效分離。?AAV等一些病毒載體易發(fā)生聚集，在低鹽條件下穩(wěn)定性差，需要在中、高鹽的緩沖液中才能保證其活性。因此需要核酸酶在中、高鹽的條件下具有高活性，保證病毒載體的回收率。?在純化工藝環(huán)節(jié)中，如利用高鹽洗脫的層析樣品中的宿主細(xì)胞核酸含量偏高，需要采取相應(yīng)措施降低宿主核酸含量。除此之外，傳統(tǒng)核酸酶的活性會(huì)隨著鹽濃度升高而急劇下降，在中、高鹽條件使用這類核酸酶會(huì)造成生產(chǎn)成本顯著增加。耐高鹽核酸酶產(chǎn)品上市為解決下游客戶使用過程中的這些挑戰(zhàn)，義翹神州依托先進(jìn)的酶篩選和改造技術(shù)平臺(tái)，自主開發(fā)出耐高鹽全能核酸酶（SaltActiveSuperNuclease，貨號(hào)：SASN），其來源于嗜鹽微生物，在200-600mM的中、高鹽條件下均表現(xiàn)出高活性，可滿足絕大多數(shù)中、高鹽條件下的生物制品中宿主核酸殘留的控制需求。產(chǎn)品優(yōu)勢①中、高鹽條件下，其活性高于傳統(tǒng)核酸酶；②穩(wěn)定性高，25℃保存3個(gè)月酶活性不受影響；③理論等電點(diǎn)高，殘留風(fēng)險(xiǎn)低，易于從AAV和大多數(shù)病毒載體中去除。義翹神州的GMP級(jí)耐高鹽核酸酶，在嚴(yán)格的質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)，無抗生素和動(dòng)物源性原料，即將上市，敬請關(guān)注！產(chǎn)品基本信息貨號(hào)SASN產(chǎn)品名稱耐高鹽全能核酸酶(SaltActiveSuperNuclease)表達(dá)宿主Escherichiacoli蛋白純度≥95%（SDS）來源Halophilicmicroorganisms分子量25.40kDa理論等電點(diǎn)9.27蛋白濃度（UV）0.2-0.3mg/mL比活*≥3×106

U/mg內(nèi)毒素≤10EU/mg底物專一性非特異性的核酸內(nèi)切酶，能夠裂解單鏈和雙鏈DNA和RNA儲(chǔ)存緩沖液50mMTris、500mMNaCl、5mMMgCl2、50%甘油，pH7.4儲(chǔ)存條件-20°C，保存12個(gè)月

*酶活單位的定義：在37℃，50mMTris-HCl、500mMNaCl、5mMMgCl2、pH8.0條件下，在30min內(nèi)水解過量DNA，260nm處吸光度增加1.0定義為一個(gè)酶活單位（U）。

推薦和最優(yōu)反應(yīng)條件反應(yīng)條件有效工作范圍最佳工作范圍溫度（℃）4-5025-45pH7.0-10.07.5-9.5NaCl濃度