規(guī)模化羊場綿羊支原體肺炎診斷及免疫技術(shù)規(guī)程

1規(guī)模化羊場綿羊支原體肺炎診斷及免疫技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了規(guī)?；驁鼍d羊支原體肺炎診斷及免NY/T2835奶山羊飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)范NY/T3052舍飼肉羊飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)范3.1綿羊肺炎支原體mycoplasmaovi約125nm～500nm，無細(xì)胞壁。Mo合成能力差，3.23.3聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechain一種級聯(lián)反復(fù)循環(huán)的DNA合成反應(yīng)過程。一般由三個步驟組成：模板的熱變性，寡核苷酸引物復(fù)性23.4機(jī)體抵抗力下降的羊更易感染。綿羊肺炎支原體在自然條件下可以通過空氣-飛沫（氣溶膠）傳染，引發(fā)傳染性胸膜肺炎。病畜通過咳嗽、打噴嚏、一年四季都發(fā)，其中夏末和冬季頻發(fā)。環(huán)境擁擠等因素容易引起傳染的發(fā)生。發(fā)病率因地域和養(yǎng)殖模式而有所不4.2臨床癥狀減退等癥狀。有的病羊有腹脹、腹瀉、口腔潰瘍、腰背拱起等癥狀4.3病理變化肺臟與胸腔粘連，出現(xiàn)胸腔積液。尖葉病變嚴(yán)重，心葉和膈葉次之，其他器官的病變不明顯。無菌條件下取樣，在肺組織病變與正常組織交界處，取3cm3～5cm3大小的組織樣本，冷藏條3在表層消毒后，在病變和正常組織交界處取米粒至綠豆大小深層肺組織置于玻璃勻漿器中，加入3），體變?yōu)槌燃t色，取1mL培養(yǎng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)入10mL培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)，盲傳三代后，取3mL培養(yǎng)液提取基因45.3PCR檢測PCR儀，電爐，離心機(jī)，混勻器，微量可調(diào)移液器，1.5mL離心管，PCR反應(yīng)管，核酸電泳儀，凝5體，1M硫酸溶液。除另有規(guī)定，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682分離鑒定并經(jīng)測序確定為綿羊肺炎支原體的菌液制備全菌滅活抗原，并用其免疫3月齡羔羊制備標(biāo)綿羊肺炎支原體菌液100mL，4℃12000rpm離心30min，棄上清，取沉淀。將菌體沉淀用0.1MpH7.4的PBS緩沖液洗滌3次，用5mLPBS重懸。菌體重懸液超聲裂解，4℃集上清，即為綿羊肺炎支原體全菌抗原。用BCA法測定蛋白質(zhì)濃度，將抗原凍存于-20℃?zhèn)溆?。孔加入至酶?lián)反應(yīng)板，置4℃冰箱過夜，次日棄6陰性對照N比值>2.1即判定為陽性，待檢驗本S臨床診斷符合綿羊肺炎支原體癥狀，病原鑒定為陽性或PCR鑒定為陽性，即可判定6.2疫苗免疫6.3治療原則飼養(yǎng)管理與衛(wèi)生消毒工作及提高生物安全標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上7A.3TAE電泳緩沖液：Tris4.84g/L,冰乙酸1.142入容器中；未溶解的酚紅繼續(xù)加1MNaOH溶液2mL，重復(fù)上述步驟（NaOH溶液總量不8B.2綿羊肺炎支原體