NY-T 3867-2021 糧油作物產(chǎn)品中黃曲霉毒素B1、環(huán)匹阿尼酸毒素、雜色曲霉毒素的快速檢測膠體金法

糧油作物產(chǎn)品中黃曲霉毒素B?、環(huán)匹檢測膠體金法2021-05-07發(fā)布2021-11-01實(shí)施NY/T3867—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則”的規(guī)定本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種植業(yè)管理司提出并歸口。本文件起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部生物毒素檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、農(nóng)業(yè)農(nóng)村5.4牛血清白蛋白(BSA),純度210.0mL。此標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.10mg/mL,—20℃保存，備用。5.13膠體金標(biāo)記抗體復(fù)合物：黃曲霉毒素B?、環(huán)匹阿尼酸毒素、雜色曲霉毒素單克隆抗體的純度不低于80%,親和力常數(shù)不低于1.00×10?L/mol、與其他毒素交叉反應(yīng)率小于10%。6儀器設(shè)備6.1膠體金多通道檢測儀，信號值變異系數(shù)CV≤3.0%。6.2免疫層析檢測試紙條：固定有黃曲霉毒素B?-BSA偶聯(lián)物、環(huán)匹阿尼酸毒素-BSA偶聯(lián)物、雜色曲霉毒素-BSA偶聯(lián)物，用于樣品中黃曲霉毒素B?、環(huán)匹阿尼酸毒素、雜色曲霉毒素與膠體金標(biāo)記抗體預(yù)反應(yīng)后再與偶聯(lián)物反應(yīng)的載體。6.3均質(zhì)機(jī)。6.6渦旋混合器：≥2000r/min6.8有機(jī)相濾膜：0.45μm6.9中速定性濾紙。7分析步驟準(zhǔn)確稱取20.0g去殼、磨碎(過孔徑0.9mm篩孔)的試樣于燒杯中，加內(nèi)4.0g氯化鈉及加入100mL乙腈溶液(5.10)用均質(zhì)機(jī)(6.3)提取2min后，靜置1min,中速定性濾紙(6.9)過濾。取1.0mL濾液，加入3.0mL試樣稀釋液(5.1),渦旋混合器(6.6)混勻，經(jīng)有機(jī)相濾膜(6.8)過濾，備用。7.1.2空白基質(zhì)溶液制備取空白樣品，按7.1.1制備空白基質(zhì)溶液，備用。7.2取50μI膠體金標(biāo)記黃曲衍毒素B、膠體金標(biāo)記環(huán)匹阿尼酸毒素、膠體金標(biāo)記雜色曲霉毒素混合溶7.3取7.1.1制備的濾液150正，垂直滴加個(gè)樣品瓶內(nèi)(7.2),渦旋混合居，將樣品瓶置于恒溫裝置(6.5)中反應(yīng)3min,然后取出毒素免疫層析檢測試紙條(6.2),按使用要求方向插入到加樣后的樣品瓶中，于恒溫裝置(6.5)中反應(yīng)6min,取出毒素免疫層析檢測試紙條，上機(jī)(6.1)檢測。7.4標(biāo)準(zhǔn)曲線將黃曲霉毒素B?、環(huán)匹阿尼酸毒素、雜色畫霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液(5.12)用空白基質(zhì)溶液(7.1.2)配制為系列梯度標(biāo)準(zhǔn)工作液，按由低到高的濃度次序進(jìn)行7.2、7.3步驟的檢測(每個(gè)樣品重復(fù)3次),根據(jù)檢測線T信號值與質(zhì)控線C信號值的比值(T/C)和標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的自然對數(shù)值(Inc)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(r≥0.95)。8結(jié)果計(jì)算8.1結(jié)果測定試樣