農(nóng)業(yè)部2122號(hào)公告-14-2014 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè) 抗蟲(chóng)和耐除草劑玉米Btll及其衍生品種定性PCR方法

抗蟲(chóng)和耐除草劑玉米Bt11及其衍生品種中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布I農(nóng)業(yè)部2122號(hào)公告—14—2014本標(biāo)準(zhǔn)代替農(nóng)業(yè)部869號(hào)公告—3—2007《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)抗蟲(chóng)和耐除草劑玉米Bt11及其衍生品種定性PCR方法》。本標(biāo)準(zhǔn)與農(nóng)業(yè)部869號(hào)公告——修改了定性PCR方法的引物序列(見(jiàn)5.12～5.13,2007年版的5.12);——修改了定性PCR方法的反應(yīng)體系(見(jiàn)表1,2007年版的表1); ——農(nóng)業(yè)部869號(hào)公告—3—2007。1農(nóng)業(yè)部2122號(hào)公告—14—2014抗蟲(chóng)和耐除草劑玉米Bt11及其衍生品種定性PCR方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)和耐除草劑玉米Bt11轉(zhuǎn)化體特異性定性PCR檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)和耐除草劑玉米Bt11及其衍生品種，以及制品中Bt11轉(zhuǎn)化體成分的定性PCR檢測(cè)。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格農(nóng)業(yè)部1485號(hào)公告—4—2010轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)DNA提取和純化農(nóng)業(yè)部1861號(hào)公告—3——2012轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因定性PCR方法農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告—19—-2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)抽樣NY/T672轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)通用要求zSSIIb基因zSSIbgene4原理2zSSIIb-F:5'-CTCCCAATCCTTTGAzSSIIb-R:5'-TCGATTTCTCTCTTGGBt11-F:5'-GCCTCGTGATACGCCTBtl1-R:5'-CAAAAATCCAAGAAT37.5.1.2.1每個(gè)試樣PCR反應(yīng)設(shè)置3次平行。終濃度水10×PCR緩沖液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)總體積“—”表示體積不確定。如果PCR緩沖液中含有氯化鎂，則不加氯化鎂溶液。根據(jù)TagDNA聚合酶的濃度確定其體積，并相應(yīng)調(diào)整水的體積，使反應(yīng)體系總體積達(dá)到25.0μL?；蚪MDNA,或采用Bt11轉(zhuǎn)化體特異性序列與非轉(zhuǎn)基因玉米基因組相比的拷貝數(shù)分?jǐn)?shù)為0.1%~4農(nóng)業(yè)部2122號(hào)公告—14—2014增片段是否為目的DNA片段，按照7.8和7.9的規(guī)定執(zhí)行。將回收的PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序，與轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)和耐除草劑玉米Bt11轉(zhuǎn)化體特異性序列(參見(jiàn)附錄A)進(jìn)行比對(duì)，確定PCR擴(kuò)增的DNA片段是否為目的DNA片段。期片段大小一致，而陰性對(duì)照中僅擴(kuò)增出玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因片段，空白對(duì)照8.2.1玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因和Bt本標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出限為1g/kg。51GCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAG