GBT 35867-2018 糧油檢驗 卵磷脂中磷脂含量的測定 高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法

糧油檢驗卵磷脂中磷脂含量的測定中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局I Ⅲ 12規(guī)范性引用文件 1 1 1 16儀器和設(shè)備 2 2 2 310結(jié)果計算和表述 411方法精密度 412試驗報告 4附錄A(資料性附錄)高效液相色譜圖 5附錄B(資料性附錄)聯(lián)合實驗室測試結(jié)果 6 9Ⅲ本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)使用翻譯法等同采用ISO11701:2009《植物油脂高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法測定卵磷脂中磷脂的含量》——GB/T15687—2008動植物油脂試樣的制備(ISO661:2003,IDT)。糧油檢驗卵磷脂中磷脂含量的測定ple)5.6混合溶劑：混合溶劑由80mL正己烷(5.2)和20mL異丙醇(5.3)(正已烷體積分?jǐn)?shù)2GB/T35867—2018/Iφ=80mL/100mL,異丙醇體積分?jǐn)?shù)φ=20mL/100mL)組成，用于溶解標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。含量已精確測定。5.8高效液相色譜流動相酸體積分?jǐn)?shù)φ=1.50mL/100mL,三乙胺體積分?jǐn)?shù)φ=0.08mL/100mL)為使流動相配制比例穩(wěn)定，需考慮溶劑密度，建議將所有溶劑稱重。若配制2.5L流動相，則稱取5.8.2B相：將844.2mL異丙醇(5混合。(其中異丙醇體積分?jǐn)?shù)φ=84.42mL/100mL,水體積分?jǐn)?shù)φ=14.00mL/100mL,乙酸體積分?jǐn)?shù)φ=1.50mL/100mL,三乙胺體積分?jǐn)?shù)φ=0.08為使流動相配制比例穩(wěn)定，需考慮溶劑密度，建議將所有溶劑稱重。若配置2.5L流動相，則稱取6.1分析天平：感量為0.1mg。6.2高效液相色譜：配備梯度系統(tǒng)和蒸發(fā)光散射檢測器6.3高效液相色譜柱溫箱可調(diào)至55℃。6.4脫氣裝置或類似設(shè)備：用于流動相脫氣6.5高效液相色譜柱(250mm10mm):配備預(yù)柱(20mm×4.0mm),填料為二醇鍵合的球形硅膠球形微粒(5μm),例如：Lichrospher100diol(m)”色譜柱的新舊程度和使用情況、填料填裝狀態(tài)以及溫度會影響各組分的分離。6.8過濾器：用于過濾外標(biāo)和測試樣品溶液。6.9數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。7扦樣實驗室收到的樣品應(yīng)當(dāng)有代表性，且在運輸和儲存過程中不應(yīng)損壞或變質(zhì)。扦樣不是本標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容。建議采用ISO55552所規(guī)定方法進(jìn)行扦樣。8測試樣品的制備按照ISO661執(zhí)行。樣品應(yīng)在60℃以下融化，避免加熱溫度過高，然后劇烈攪拌勻質(zhì)。3GB/T35867—20189分析步驟9.1標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的制備9.1.1標(biāo)準(zhǔn)溶液R?、R?、R?:制備3種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精確稱取550mg(R?)、850mg(R?)、1150mg(R?)標(biāo)準(zhǔn)品(5.7)于3個100mL容量瓶中，用混合溶劑(5.6)溶解并定容。過濾此標(biāo)準(zhǔn)溶液用于高效液相色譜分析。9.1.2試樣溶液：稱取425mg粗制卵磷脂、255mg脫油卵磷脂、255mg分餾卵磷脂于50mL容量瓶中，精確到0.001g,用混合溶劑(5.6)溶解并定容。過濾試樣溶液得到測試液S?和S?b。9.2高效液相色譜分析優(yōu)化儀器工作條件，使測試樣品和標(biāo)準(zhǔn)品中各組分得到滿意的色譜分離，如圖A.1?？蓞⒖家韵聴l件(見表1):——柱溫：55℃;——檢測器增益：5～6; 檢測器溫度：50℃——柱中洗流速：2.0mLhm。表1高效液相色譜梯度洗脫表000555559.3標(biāo)準(zhǔn)曲線吸取20μL標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液進(jìn)行測定，以測得的峰面積對濃度作圖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在進(jìn)行磷脂的定量分析時，建議采用以下的分析順序：R?、R?、R?(每個標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣一次),Sa、S?b(每個試樣溶液進(jìn)樣兩次),R?、R?、R?(每個標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣一次)。9.4測定吸取20μL試樣溶液進(jìn)樣測定，記錄峰面積。通過比較測試樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液中各物質(zhì)的保留時間4GB/T3586進(jìn)行定性(參見圖A.1)。10結(jié)果計算和表述用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算單組分磷脂的含量(參見9.3)。標(biāo)準(zhǔn)曲線中應(yīng)包含3個比樣品濃度低的校準(zhǔn)點和3個比樣品濃度高的校準(zhǔn)點。根據(jù)測試樣品濃度，可將R?、R?、R?(9.1.1)稀釋為合適的6個校準(zhǔn)點。按下式計算：w;——測試樣品中單組分磷脂的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為克每百克(g/100g);mp;——測試樣品中單組分磷脂的質(zhì)量，單位為毫克(mg);m——測試樣品的質(zhì)量(9.1.2),單位為計算結(jié)果保留一位小數(shù)。11方法精密度11.1聯(lián)合實驗室測試關(guān)于方法精密度的聯(lián)合實驗室試驗數(shù)據(jù)參見附錄B。由此次聯(lián)合實驗室測試得出的數(shù)據(jù)可能不適用于其他的含量范圍和測試對象。11.2重復(fù)性限在重復(fù)性條件下進(jìn)行一系列測定所得兩個最終測試結(jié)果的絕對差值小于或等于重復(fù)性限r(nóng)的可能性為95%。重復(fù)性條件是指在同一實驗室，由同一操作者使用相同的設(shè)備、按相同的測試方法，在短時間內(nèi)對同一被測對象相互獨立進(jìn)行的測試條件。11.3再現(xiàn)性限在再現(xiàn)性條件下進(jìn)行一系列測定所得兩個最終測試結(jié)果的絕對差值小于或等于再現(xiàn)性限R的可能性為95%。再現(xiàn)性條件指在不同的實驗室，由不同的操作者使用不同的設(shè)備、按相同的測試方法，對同一被測試對象相互獨立進(jìn)行的測試條件。12試驗報告試驗報告應(yīng)說明：a)完整識別樣品所必需的所有信息；b)取樣方法；c)依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)所采用的檢驗方法；d)本標(biāo)準(zhǔn)未規(guī)定或列為可選的所有操作細(xì)節(jié)，以及可能影響測試結(jié)果的其他因素；5GB/T35867—2018/ISO11701:20(資料性附錄)高效液相色譜圖00圖A.1粗制大豆卵磷脂高效液相色譜圖6樣品8844重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差，s,重復(fù)性限，r(=s,×2.8)再現(xiàn)性限，R(=sr×2.8)樣品44重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差，s?重復(fù)性限，r(=s,×2.8)再現(xiàn)性限，R(=sk×2.8)7樣品944重復(fù)性變異系數(shù)，CV?/%重復(fù)性限，r(=s,×2.8)再現(xiàn)性限，R(=sr×2.8)樣品444重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差，s?重復(fù)性變異系數(shù)，CV?/%重復(fù)性限，r(=s,×2.8)再現(xiàn)性限，R(=sr×2.8)樣品所有實驗室對每個樣品的測定次數(shù)，≈448表B.5(續(xù))樣品重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差，s?重復(fù)性限，r(=s,×2.8)再現(xiàn)性限，R(=sr×2.8)樣品744重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差，s重復(fù)性變異系數(shù)，CV?/%重復(fù)性限，r(=s,×2.8)再現(xiàn)性限，R(=sr×2.8)[3]ISO5725-1Accuracy(truenessandprecision)of