《生物產(chǎn)品分析與檢驗(yàn)技術(shù)》課件-維生素B12的測定

維生素B12的測定

維生素測定方法化學(xué)分析法比色法分光光度法（紫外和熒光）層析法色譜法微生物法維生素B12的測定參與制造骨髓紅細(xì)胞，防止惡性貧血，防止大腦神經(jīng)受到破壞。自然界中的維生素B12都是微生物合成的，高等動(dòng)植物不能制造維生素B12。需要一種腸道分泌物（內(nèi)源因子）幫助才能被吸收的唯一的一種維生素。當(dāng)人體腸胃異常，缺乏這種內(nèi)源因子，即使膳食中來源充足也會患惡性貧血。維生素B12的測定又稱鈷胺素，是含鈷的B族維生素之一。在pH小于3或大于8的強(qiáng)酸或堿性溶液中極易分解，遇強(qiáng)光或紫外線易被破壞。在紫外區(qū)278nm、361nm與550nm波長處有最大吸收。在361nm波長處的吸收峰干擾因素少，通常以361nm作為測定波長。維生素B12的測定維生素B12的測定方法：

微生物法、比色法、紫外分光光度法、離子交換層析法、原子吸收分光光度法和高效液相色譜法。紫外分光光度法是較常見的方法。維生素B12的測定一、測定原理

維生素B12在紫外區(qū)278nm（納米）、361nm與550nm波長處有最大吸收，在361nm波長處的吸收峰干擾因素少，通常以361nm作為測定波長，測定待測溶液的吸光度，用吸光度計(jì)算含量。紫外分光光度法測定維生素B12含量722N型紫外－可見分光光度計(jì)，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g/L維生素B12水溶液，維生素B12注射液(市售品)。二、試劑和材料：紫外分光光度法測定維生素B12含量三、操作步驟1、比色皿的校正將2只比色皿編號標(biāo)記，裝入蒸餾水，在361nm處比較2只比色皿的透光率。以透光率最大的比色皿為100%透光，測定另一只比色皿的透光率，換算成吸光度，作為它的校正值A(chǔ)0。測定溶液時(shí)，以那只透光率最大的比色皿作空白，另一只比色皿裝待測溶液，測定吸光度。紫外分光光度法測定維生素B12含量2、測定吸光度準(zhǔn)確吸取0.50mL維生素B12注射液于10mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度線，搖勻，得到樣品稀釋液。打開722N型紫外－可見分光光度計(jì)，預(yù)熱30min。將樣品稀釋液置于1cm石英比色皿中，以蒸餾水作為空白，在361nm波長條件下測定吸光度。計(jì)算維生素B12標(biāo)示量的百分含量。紫外分光光度法測定維生素B12含量四、結(jié)果計(jì)算紫外分光光度法測定維生素B12含量五、注意事項(xiàng)稱取樣品的質(zhì)量應(yīng)使樣品稀釋液中維生素B12的濃度小于0.03mg/mL。維生素B12在pH小于3或大于8時(shí)極易分解，在溶液的pH為4.5-5時(shí)最為穩(wěn)定，測定時(shí)