2.2.2動物細(xì)胞融合與單克隆抗體課公開課一等獎?wù)n件省賽課獲獎?wù)n件

一、動物細(xì)胞融合1.概念：動物細(xì)胞融合（cellfusion）也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一種細(xì)胞的過程。融合和形成的含有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。2、原理：細(xì)胞膜的流動性2.2.2動物細(xì)胞融合與單克隆抗體誘導(dǎo)辦法：物理辦法：化學(xué)法：生物法：滅活的病毒電激等聚乙二醇（PEG)3.融合過程：誘導(dǎo)融合的辦法？滅活病毒植物細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理融合前處理使用的酶誘導(dǎo)方法主要用途細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶物理辦法（離心、振蕩、電激）化學(xué)辦法（PEG）物理、化學(xué)辦法滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合4.意義：突破了有性雜交辦法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。5.應(yīng)用：最重要的用途是制備單克隆抗體思考？1.抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2.抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點(diǎn)？重要分布在哪里？3.用傳統(tǒng)的辦法如何獲得抗體？二、單克隆抗體的制備抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)辦法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、敏捷度低。多個效應(yīng)B細(xì)胞動物體內(nèi)多個抗體抗原單克隆抗體的制備單克隆抗體:單個細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一,特異性強(qiáng)的抗體運(yùn)用效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功效運(yùn)用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性運(yùn)用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞運(yùn)用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)方案：單克隆抗體的制備過程雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體整個制備過程為什么要通過兩次篩選？①第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多個），在特定的選擇性培養(yǎng)基上,未融合的親本細(xì)胞(漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞)和融合的含有同種核的細(xì)胞(BB融合細(xì)胞、瘤瘤融合細(xì)胞)都會死亡,只有融合的雜種細(xì)胞(雜交瘤細(xì)胞)才干生長。②第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一種雜交瘤細(xì)胞的狀況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。由于該細(xì)胞群是單個雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，因此產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個細(xì)胞克隆的含義，只但是克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合(單克隆抗體的制備)過程第一步原生質(zhì)體的制備(酶解法)正常小鼠免疫處理第二步原生質(zhì)體的融合(物、化法)動物細(xì)胞的融合(物、化、生法)第三步雜種細(xì)胞的篩選與培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的篩選與培養(yǎng)第四步雜種植株的誘導(dǎo)與鑒定單克隆抗體的提純意義和用途(1)克服遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙，大大擴(kuò)展了雜交的親本組合范圍(2)克服有性雜交的母系遺傳現(xiàn)象，獲得細(xì)胞質(zhì)基因的雜合子，研究細(xì)胞質(zhì)遺傳(1)制備單克隆抗體等(2)診斷、治療、預(yù)防疾病三、單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診療試劑——最廣泛應(yīng)用精確、高效、簡易、快速（猶如位素標(biāo)記單克隆抗體，可診療腫瘤、心血管畸形等）（2）運(yùn)載藥品生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥品，治療腫瘤）(“生物導(dǎo)彈”—單抗導(dǎo)向，藥品為彈頭)B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

下圖為某同窗根據(jù)雜交瘤技術(shù)的辦法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無限增殖原代傳代50例1：1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）A.通過免疫的B淋巴細(xì)胞B.沒通過免疫的T淋巴細(xì)胞

C.通過免疫的T淋巴細(xì)胞D.沒通過免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞A鞏固練習(xí)2.動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，對的的是（）誘導(dǎo)融合的辦法完全相似B.所用的技術(shù)手段基本相似C.操作環(huán)節(jié)基本相似D.都能形成雜種細(xì)胞D3.單克隆抗體制備過程中哺育的雜交細(xì)胞是（）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合B.由小鼠一種B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成C.由小鼠一種B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D.由小鼠一種B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D4.只能使動物細(xì)胞融合的慣用誘導(dǎo)辦法是（）

A．PEGB．滅活的病毒C．電刺激D．離心B5.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞本身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞本身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A.②④B.①③⑤C.①②③④D.②③C6.“生物導(dǎo)彈”是指 （）A.單克隆抗體B.雜交瘤細(xì)胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞D.在單克隆抗體上連接抗癌藥品DA、B細(xì)胞為動物細(xì)胞,請據(jù)圖回答下列問題:A細(xì)胞B細(xì)胞C細(xì)胞D細(xì)胞(1)若A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞B細(xì)胞為淋巴細(xì)胞,那么D細(xì)胞稱為細(xì)胞,D細(xì)胞含有兩個親本細(xì)胞的特性,首先因含有骨髓瘤細(xì)胞的性質(zhì),通過方式產(chǎn)生大量細(xì)胞,我們稱之為過程;另首先能分泌大量的抗體,我們把該過程分泌的抗體稱.雜交瘤持續(xù)分裂有絲分裂單克隆單克隆抗體練一練(2)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是,合成該物質(zhì)的場合是,它是由控制合成的,合成過程涉及和兩個重要環(huán)節(jié).球蛋白核糖體基因轉(zhuǎn)錄翻譯(3)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體含有作用,與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于強(qiáng)高.