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ICS59.080.01蠶絲中非蠶絲蛋白物質(zhì)含量試驗(yàn)方法2024-07-24發(fā)布2025-02-01實(shí)施I 1 13術(shù)語(yǔ)和定義 14原理 15試劑和材料 16儀器和設(shè)備 2 27.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 27.2緩沖液配制 27.3樣品前處理 37.4衍生化操作 3 37.6測(cè)定 38結(jié)果計(jì)算與表示 4 4 5 5 5附錄A(資料性)四種氨基酸化合物信息 6Ⅲ1蠶絲中非蠶絲蛋白物質(zhì)含量試驗(yàn)方法本文件適用于通過(guò)測(cè)定蠶絲中四種主要氨基酸(絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸和酪氨酸)含量計(jì)算蠶絲下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用2GB/T44214—20245.8三乙胺-乙腈溶液(1mol/L):移取1.4mL三乙胺于10mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,5.10氮?dú)猓杭兌葹?9.99%。5.11氨基酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):絲氨酸(Ser)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)和酪氨酸(Tyr),化合物信6.2高效液相色譜儀(HPLC):6.9恒溫干燥箱:能控制溫度在110℃±2℃。6.12水浴鍋:能控制溫度在55℃±2℃。稱取附錄A所列各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品適量(精確至0.01mg),用水溶解,分別配制成質(zhì)量濃度約為分別準(zhǔn)確移取1mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于10mL容量瓶中,用水稀釋定容至刻度,混勻,即得到第一份混合標(biāo)準(zhǔn)液。將第一份混合標(biāo)準(zhǔn)液用水逐級(jí)稀釋,制成總共5個(gè)不同濃度的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。5個(gè)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中各氨基酸質(zhì)量濃度分別為10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L磷酸緩沖液(10mmol/L,pH=6.9):移取0.68mL磷酸溶液(5.12)于1000mL容量瓶中,用水37.3.1.3取出試樣瓶,冷卻至室溫,過(guò)濾后移取1mL水解液,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(6.11)或水浴鍋(6.12)7.3.2.1取待測(cè)樣品1g,按GB/T9995規(guī)定烘超聲處理2min,放置冰水(0℃)混合物中冷凍5min,抽真空通入氮?dú)?次后密封,并放置于7.3.2.3取出試樣瓶,冷卻至室溫,過(guò)濾后移取1mL水解液,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(6.11)或水浴鍋(6.12)0.45μm有機(jī)相微孔濾頭過(guò)濾(5.14),再進(jìn)樣分析。做兩個(gè)平行試樣。4GB/T44214—2024時(shí)間min流動(dòng)相A%133作液(7.1.2),按照7.4衍生化操作。衍生化完畢后,注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定,分別得到四種氨分析經(jīng)過(guò)前處理(7.3)和衍生化(7.4)制備的試樣,測(cè)定試樣中各氨基酸色譜峰面積,由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(7.6.2)計(jì)算試樣中各氨基酸的濃度。按公式(1)計(jì)算各氨基酸的含量:所測(cè)四種氨基酸的總含量按公式(2)計(jì)算:5非蠶絲蛋白物質(zhì)含量按公式(3)計(jì)算:K——修正系數(shù),88(桑蠶絲)或81(柞蠶絲)?;オ?dú)立進(jìn)行的測(cè)試獲得的兩次氨基酸總量的測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不大于這兩個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的5%,以大于5%的情況不超過(guò)5%為前提。c)測(cè)試結(jié)果(四種氨基酸在試樣中的含量、非蠶絲蛋白物質(zhì)含量);6(資料性)A.1四種氨基酸化合物信息見(jiàn)表A.1。序號(hào)中文名稱英文和簡(jiǎn)寫(xiě)分子式相對(duì)分子質(zhì)量1絲氨酸56-45-1C?H?NO?2甘氨酸Gly56-40-6C?H?NO?75.073丙氨酸Ala56-

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