GB 7300.501-2021 葡萄糖酸鈉單位產(chǎn)品能源消耗限額（正式版）

GB7300.501—2021飼料添加劑第5部分：微生物釀酒酵母國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB7300.501—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是GB7300《飼料添加劑》的第501部分。GB7300已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第101部分：氨基酸、氨基酸鹽及其類似物L-蘇氨酸；——第103部分：氨基酸、氨基酸鹽及其類似物蛋氨酸羥基類似物；——第201部分：維生素及類維生素——第202部分：維生素及類維生素維生素D?油；——第203部分：維生素及類維生素甜菜堿； 第204部分：維生素及類維生素甜菜堿鹽酸鹽：——第301部分：礦物元素及其絡(luò)(螯)合物碘化鉀；———第302部分：礦物元素及其絡(luò)(螯)合物亞硒酸鈉；———第402部分：酶制劑植酸酶；——第901部分：著色劑β-胡蘿卜素粉；——第1001部分：調(diào)味和誘食物質(zhì)谷氨酸鈉。本文件代替GB/T22547—2008《飼料添加劑飼用活性干酵母(釀酒酵母)》,與GB/T22547—a)更改了外觀與性狀要求(見4.1,2008年版的4.1);b)更改了酵母活細胞數(shù)的要求(見4.3,2008年版的4.2);c)更改了衛(wèi)生指標(見4.4,2008年版的4.3);d)增加了酵母活細胞數(shù)檢測方法的平板法(見附錄B)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出并歸口。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為： GB/T22547—2008:——本次為第一次修訂。——酶制劑；——微生物；——著色劑；—-多糖和寡糖；本文件的產(chǎn)品釀酒酵母屬于第5大類微生物，因釀酒酵母是首個發(fā)布的產(chǎn)品標準，所以本文件以GB7300.501編號，作為GB7300的第501部分。GB7300.501—2021飼料添加劑第5部分：微生物釀酒酵母貯存。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文GB4789.15—2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB10648飼料標簽GB/T13079飼料中總砷的測定GB/T13080飼料中鉛的測定原子吸收光譜法GB/T13081飼料中汞的測定GB/T13082飼料中鎘的測定方法GB/T13091飼料中沙門氏菌的測定本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4技術(shù)要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。12GB7300.501—2021酵母活細胞數(shù)/(CFU/g或個/g)"≥8×10?≤酵母活細胞數(shù)測定方法采用附錄B中B.1平板法時，采用B.2染色法時，單位為個/g應(yīng)符合表2的規(guī)定。鉛/(mg/kg)≤總砷/(mg/kg)≤汞/(mg/kg)≤鎘/(mg/kg)≤沙門氏菌/25g不得檢出5取樣樣品的采集應(yīng)遵循隨機性、代表性的原則，采樣過程應(yīng)遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來5.2.3獨立包裝大于500g的產(chǎn)品，應(yīng)用無菌采樣器從同一包裝的不同部位分別采取適量樣品，放入同一個無菌采樣容器內(nèi)作為一件樣品。5.3.2應(yīng)在運輸過程中保持樣品完整。6試驗方法3GB7300.501—20216.3酵母活細胞數(shù)按GB/T13080石墨爐原子吸收光譜法執(zhí)行。按GB/T13081執(zhí)行。按GB/T13082執(zhí)行。按GB/T13091執(zhí)行。7檢驗規(guī)則不應(yīng)超過50t。型式檢驗項目為本文件第4章規(guī)定的所有項目。在正常生產(chǎn)情況下，每年至少進行一次型式檢驗。a)產(chǎn)品定型投產(chǎn)時；c)停產(chǎn)3個月以上，重新恢復生產(chǎn)時；4GB7300.501—2021d)出廠檢驗結(jié)果與上次型式檢驗結(jié)果有較大差異時；e)飼料行政管理部門提出檢驗要求時。7.4.2檢驗結(jié)果中有任何指標不符合本文件規(guī)定時，可自同批產(chǎn)品中重新加倍取樣進行復檢。復檢結(jié)7.4.3各項目指標的極限數(shù)值判定按GB/T8170中全數(shù)值比較法執(zhí)行。標簽應(yīng)符合GB10648的規(guī)定。8.2包裝5GB7300.501—2021(規(guī)范性)釀酒酵母菌種鑒別方法A.1形態(tài)鑒別A.1.1培養(yǎng)基A.1.1.1麥芽汁液體培養(yǎng)基：麥芽汁加水稀釋至10°Bx～15°Bx(巴林糖度計),115℃高壓蒸汽滅菌A.1.1.2麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基：麥芽汁加水稀釋至10°Bx～15°Bx(巴林糖度計),加2%瓊脂粉，115℃高壓蒸汽滅菌15min。A.1.1.3產(chǎn)孢子培養(yǎng)基：葡萄糖0.1%,氯化鉀0.18%,酵母汁0.25%,醋酸鈉0.82%,瓊脂2%,用蒸餾水配制，裝管，115℃高壓蒸汽滅菌15min,擱置斜面。A.1.1.4馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂20g,自來水1L。將馬鈴薯洗凈，去皮，切成小塊，立即放入水中，以免被氧化。煮沸30min,經(jīng)紗布過濾，濾液加水至1L,加入葡萄糖和瓊脂，溶解后分裝三角瓶或試管，115℃高壓蒸汽滅菌20min。A.1.2在麥芽汁液體培養(yǎng)基中的生長28℃靜置培養(yǎng)3天后，菌體在液體培養(yǎng)基中緊密沉淀于底部，培養(yǎng)液清亮，不形成菌膜。取少量菌體于400倍顯微鏡下觀察，細胞呈卵圓形或圓形，單個或成雙，偶爾成簇狀，細胞芽殖。細胞長與寬之比A.1.3在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上的生長28℃培養(yǎng)3天后，菌落大而濕潤，微隆起或平坦，乳白色，表面光滑無褶皺，邊緣整齊。A.1.4在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的生長28℃培養(yǎng)3天后，在馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基上生長，無假菌絲或是有比較發(fā)達但不典型的假菌絲。A.1.5在產(chǎn)孢子培養(yǎng)基上的生長28℃培養(yǎng)3天后，能產(chǎn)生子囊孢子，每囊有1個～4個圓形光面的子囊孢子。A.2生理生化特性在麥芽汁瓊脂斜面上，于28℃±1℃,24h～48h培養(yǎng)，進行表A.1中的試驗，以驗證釀酒酵母生理生化特性。A.3分子生物學鑒定采用核酸序列分析法對菌株rRNA基因中26SrDNAD1/D2區(qū)和轉(zhuǎn)錄間區(qū)ITS序列保守性進行分析。擴增菌株26SrDNAD1/D2區(qū)和ITS序列，與GenBank等國際核酸序列數(shù)據(jù)庫中Saccharomy-cescerevisiae序列進行同源性比較，序列差異小于1%,則該菌株為釀酒酵母Saccharomycescerevisiae。6試驗項目結(jié)果試驗項目結(jié)果糖類發(fā)酵葡萄糖十碳源利用蜜二糖十，一半乳糖十，一棉子糖十，一麥芽糖十，一纖維二糖—蔗糖十，一海藻糖十，一蜜二糖十，一D-木糖—棉子糖十，一山梨糖—乳糖乙醇十，一海藻糖十，一甘油十，一纖維二糖—山梨糖—松三糖十，一赤蘚醇一碳源利用乳糖一甘露醇一半乳糖十，一肌醇一麥芽糖十，一熊果苷一蔗糖氮源利用硝酸鉀—注：十為陽性反應(yīng)；一為陰性反應(yīng)。GB7300.501—2021(規(guī)范性)酵母活細胞數(shù)測定方法B.1第一法平板法(仲裁法)按GB4789.15—2016第一法進行檢測。檢測時，GB4789.15—2016中5.1.1所“加入225mL無菌稀釋液”的溫度為37℃~40℃。B.2.1原理鏡觀察即可計算活細胞數(shù)。B.2.2試劑或材料B.2.2.1無菌生理鹽水：0.85%的氯化鈉溶液。B.2.3儀器設(shè)備B.2.3.1顯微鏡：放大倍數(shù)400以上。B.2.3.2血球計數(shù)板。B.2.3.3血球計數(shù)板專用蓋玻片。B.2.4試驗步驟B.2.4.1稱取0.1g樣品，精確至0.0002g,準確加入37℃~40℃無菌生理鹽水20mL,振蕩使充分分溫下靜置染色10min。B.2.4.3將蓋玻片置于血球計數(shù)板計數(shù)室上，使之緊緊蓋在血球計數(shù)板上。取0.02mL染色后的菌液用顯微鏡觀察計數(shù)。注1:計數(shù)板通常有兩種規(guī)格：一種是1個大格中有16個中格，1個中格又分25個小格，即16×25規(guī)格，用這種規(guī)格計數(shù)板，取左上、左下、右上、右下四個中格(即100個小格)進行計數(shù)。另一種是1個大格分為25個中格，中央的一個中格(即80個小格)進行計數(shù)。注2:蓋玻片放置好后不要滑動，否則細胞也會移動，滴注后計數(shù)時處于水平狀態(tài)。B.2.4.4用10×接物鏡和16×接目鏡找出方格后，換用40×接物鏡，調(diào)整微調(diào)至視野最清晰，開始計GB7300.501—2021數(shù)，當細胞處于方格線上時，計數(shù)原則：數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。計出芽時，超過母細胞的二分之一者按細胞計，小于二分之一者忽略不計。染為藍色的為死細胞，無色的為活細胞，只計活細胞數(shù)。注1:在顯微鏡下觀察釀酒酵母細胞形態(tài)為細胞卵圓形或橢圓形，大小為(5μm~7.5μm)×(7.5μm～10μm),胞內(nèi)可看到明顯的細胞核。注2:對每個樣品重復計數(shù)兩次，取其