從技術(shù)難點(diǎn)出發(fā)如何選擇合適的抗體開發(fā)平臺

如何選擇合適的抗體開發(fā)平臺北京義翹神州科技股份有限公司從技術(shù)難點(diǎn)分析義翹神州CONTENT抗體開發(fā)平臺概述1抗體開發(fā)在四個(gè)平臺的比較和分析2雜交瘤技術(shù)和案例噬菌體展示技術(shù)和案例流式分選單B細(xì)胞技術(shù)和案例Beacon篩選單B細(xì)胞技術(shù)和案例義翹神州抗體開發(fā)平臺概述01雜交瘤技術(shù)和案例噬菌體展示技術(shù)和案例流式分選單B細(xì)胞技術(shù)和案例Beacon篩選單B細(xì)胞技術(shù)和案例義翹神州義翹神州抗體開發(fā)平臺4雜交瘤噬菌體展示流式分選單BBeaconSin義翹神州抗體開發(fā)平臺概述01雜交瘤技術(shù)和案例流式分選單B細(xì)胞技術(shù)和案例噬菌體展示技術(shù)和案例Beacon篩選單B細(xì)胞技術(shù)和案例義翹神州雜交瘤技術(shù)YYYYYYYYYYYYYYYYY脾細(xì)胞雜交瘤篩選表達(dá)純化骨髓瘤細(xì)胞義翹神州13株亞克隆細(xì)胞穩(wěn)定株15株亞克隆ELISA競爭陽性40株細(xì)胞2~3輪有限稀釋102株主克隆ELISA競爭抑制陽性(抽檢20株，6株細(xì)胞活性陽性）835孔主克隆ELISA結(jié)合陽性融合后細(xì)胞接種42塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板10只小鼠高效價(jià)，挑選1只進(jìn)行融合Balb/c、C57BL/6小鼠各免疫5只重組蛋白（細(xì)胞生物活性檢測EC502~8ng/mL）活性蛋白免疫抗體親和力達(dá)到E-10級別細(xì)胞活性等多功能介入篩選案例：anti-IL15中和抗體篩選義翹神州KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)8.78E-114.15E+053.64E-05KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)2.47E-101.97E+054.88E-05KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)2.29E-103.91E+058.94E-0513株抗體均可抑制細(xì)胞，其中11株優(yōu)于對照抗體抗體親和E-10~E-11M案例：anti-IL15抗體功能驗(yàn)證義翹神州抗體開發(fā)平臺概述01雜交瘤技術(shù)和案例噬菌體展示技術(shù)和案例流式分選單B細(xì)胞技術(shù)和案例Beacon篩選單B細(xì)胞技術(shù)和案例義翹神州

驗(yàn)證淘洗建庫

免疫噬菌體展示技術(shù)義翹神州納米抗體CH2CH3CH2CH3FR1FR2FR3FR4CDR1CDR2CDR3VHH

分子量小

低免疫原性

穿透性強(qiáng)

穩(wěn)定性好

識別隱藏的表位

親和力與常規(guī)單抗相當(dāng)

容易改造BloodCollectionRT-PCRCloningConstructalibraryBiopanningElutionSequencingCultureAssaySDSActivityAffinityVHHIdentifybyELISA義翹神州SampleIDIC50（ug/mL）EC50（ug/mL）Atezolizumab0.144260.38Durvalumab0.14190.33PD-L1-Nh3940.083440.23PD-L1-Nh4840.107230.51SampleIDKD(M)kon(1/Ms)kdis(1/s)Atezolizumab6.60E-096.96E+044.59E-04Durvalumab6.37E-101.82E+051.16E-04PD-L1-Nh3941.44E-091.01E+051.45E-04PD-L1-Nh4843.42E-091.75E+055.98E-04BlockingAffinityCellularActivity庫容克隆數(shù)ELISA陽性數(shù)

Hits競爭克隆

6*10896020011022PD-L1納米抗體開發(fā)AtezolizumabDurvalumabNh394Nh484義翹神州抗體開發(fā)平臺概述01雜交瘤技術(shù)和案例流式分選單B細(xì)胞技術(shù)和案例噬菌體展示技術(shù)和案例Beacon篩選單B細(xì)胞技術(shù)和案例義翹神州B細(xì)胞激活B-cellB-cellThelperPlasmaBMemoryBPlasma-blastMHCClassIITCRCD40CD40LTD-AgTI-AgInterleukinIgMIgDIgEIgAIgGShort/Long-lived義翹神州脾細(xì)胞

&

外周血流式分選單B細(xì)胞RT-PCR兔B細(xì)胞培養(yǎng)

表達(dá)構(gòu)建評價(jià)鼠B細(xì)胞裂解

BIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIBIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIBIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII兔B細(xì)胞裂解

免疫流式分選單B細(xì)胞技術(shù)義翹神州磷酸化抗體開發(fā)PHKinasedomainRDPSer473PHKinasedomainRDSer473種屬分選細(xì)胞數(shù)上清特異VH/VL特異數(shù)

WB陽性

兔960159123,77.4%89,72.3%20,22.5%WB陽性克隆VH/VL多樣性

WB檢測

IHC檢測

對照加入多肽肺癌乳腺癌陽性義翹神州抗體開發(fā)平臺概述01雜交瘤技術(shù)和案例Beacon篩選單B細(xì)胞技術(shù)和案例噬菌體展示技術(shù)和案例流式分選單B細(xì)胞技術(shù)和案例義翹神州Beacon光導(dǎo)系統(tǒng)篩選單B細(xì)胞導(dǎo)入

培養(yǎng)

檢測

導(dǎo)出

1天義翹神州Beacon抗體篩選服務(wù)脾細(xì)胞

&

外周血Beacon表達(dá)

評價(jià)2周1天2~3周最快35天交付陽性抗體義翹神州Beacon光導(dǎo)系統(tǒng)篩選單B細(xì)胞蛋白結(jié)合陽性細(xì)胞結(jié)合陽性導(dǎo)入B細(xì)胞:13630人&猴蛋白結(jié)合:371人&猴細(xì)胞結(jié)合:56VH/VL:45人&猴ELISA:37人&猴FACS:34~80%陽性率義翹神州抗體開發(fā)在四個(gè)平臺的比較和分析02義翹神州四種技術(shù)平臺開發(fā)CD47抗體技術(shù)平臺初篩克隆數(shù)ELISA陽性數(shù)&比例競爭抗體&比例血凝陰性&比例紅細(xì)胞弱結(jié)合雜交瘤363288.9%1850%211.1%無噬菌體21020899%16176.7%53.1%無流式分選32224776.7%12839.8%2721.1%2Beacon595084.7%4169.5%24.9%無義翹神州平臺克隆號IC50(ng/mL)流式分選M067890.46M077486.32BeaconM056719.68M060521.93噬菌體M44933.80M47524.72雜交瘤MM39H36.99MM52H139.15陽性對照Ligufalimab30.39競爭活性紅細(xì)胞結(jié)合M0678M0774M0567M0605M449M475MM39HMM52HLigufalimab血凝檢測（100μg/ml）CD47抗體功能驗(yàn)證義翹神州抗體親和力比較固定物名稱KD(M)Kon(1/Ms)Kdis(1/s)FullR^2Ligufalimab1.55E-091.30E+052.01E-040.9953M06784.82E-085.56E+042.68E-030.9962M07743.01E-092.91E+058.76E-040.9983M05672.96E-092.73E+058.08E-040.9995M06052.89E-092.30E+056.65E-040.9993M4492.60E-097.63E+051.98E-030.9713M4752.15E-095.78E+051.25E-030.9602MM39H2.63E-091.60E+054.21E-040.9963MM52H3.34E-091.32E+054.42E-040.9963義翹神州雜交瘤VH-CDR3競爭抗體重鏈及CDR3多樣性分析義翹神州四種平臺對比分析技術(shù)路線優(yōu)勢局限應(yīng)用場景雜交瘤?成本低?天然配對全長抗體?足夠上清做介入檢測?高親和力?周期長?融合效率?多樣性差?種屬較少方法經(jīng)典、易操作、通用性強(qiáng)、推薦基本款流式分選單B細(xì)胞?通量大?天然配對全長抗體?多樣性更好?高親和力?抗原標(biāo)記?體外培養(yǎng)效率表位有特殊要求：修飾類抗體Beacon?通量大?對細(xì)胞無傷害?效率高?成本高(設(shè)備、耗材、維護(hù))成藥性抗體噬菌體展示?將基因型與表現(xiàn)型聯(lián)系起來?靈活的建庫和篩選方式?不需要免疫?人工設(shè)計(jì)，突變庫?更多種屬?不是天然配對?展示分子大小受限?非特異擴(kuò)增和富集納米抗體、CAR、高親和抗體、親和力成熟、pH相關(guān)、溫度相關(guān)抗體義翹神州義翹神州抗體開發(fā)技術(shù)服務(wù)雜交瘤噬菌體展示流式單BBeacon成藥性抗體抗獨(dú)特型抗體診斷抗體病毒抗體檢測試劑盒小分子抗體修飾基團(tuán)抗體單鏈抗體納米抗體標(biāo)簽抗體試劑抗體義翹神州關(guān)于“北京義翹神州”堅(jiān)持自主研發(fā)生產(chǎn)打造中國生命科學(xué)研究“一站式”試劑與服務(wù)支撐平臺人才與設(shè)施榮