膀胱移行細胞癌組織VEGF和COX2表達及意義

1/1膀胱移行細胞癌組織VEGF和COX2表達及意義膀胱移行細胞癌組織VEGF和COX2表達及意義【摘要】目的探討血管內皮生長因子（VEGF）和環(huán)氧化酶2（COX2）蛋白在膀胱移行細胞癌（TCCB）組織中的表達及其與腫瘤生物學行為之間的關系。

方法采用免疫組化SP法檢測68例TCCB和10例正常膀胱黏膜組織VEGF和COX2蛋白的表達。

結果正常黏膜組織中VEGF和COX2均不表達。

在Ⅰ～Ⅲ級和淺表性、浸潤性TCCB組織中VEGF的陽性表達率分別為23.07%、58.62%、84.61%和43.75%、77.77%，VEGF的陽性表達率在不同組織學分級及不同臨床分期的TCCB組織中差異有極顯著性（2=14.11、8.29，Plt;0.01）；復發(fā)組與未復發(fā)組其陽性表達率分別為78.94%和40.00%，差異有極顯著性（2=10.77，Plt;0.01）。

在Ⅰ～Ⅲ級和淺表性、浸潤性TCCB組織中COX2的陽性表達率分別為15.38%、55.17%、80.77%和37.50%、75.00%，COX2的陽性表達率在不同組織學分級及不同臨床分期的TCCB組織中差異有極顯著性（2=15.27、9.73，Plt;0.01）；在復發(fā)組與未復發(fā)組其陽性表達率分別為73.68%和36.67%，差異有極顯著性（2=9.40，Plt;0.01）。

在TCCB組織中，VEGF表達與COX2表達呈正相關（r=0.55,Plt;0.01）。

結論VEGF和COX2陽性表達與TCCB病理分級、浸潤及復發(fā)關系密切，VEGF和COX2可以作為判定膀胱移行細胞癌惡性程度及復發(fā)的參考指標。

【關鍵詞】血管生成誘導劑；環(huán)氧化酶2；膀胱腫瘤；免疫組織化學；預后近年研究認為，惡性腫瘤的浸潤轉移與癌細胞的浸潤能力及其在轉移部位的生存能力等因素有關。

血管內皮生長因子（VEGF），又稱血管滲透因子或血管調理素，與惡性腫瘤的新生血管形成相關，在惡性腫瘤的發(fā)展和浸潤轉移過程中發(fā)揮著重要作用[1]。

環(huán)氧化酶2（COX2）作為前列腺素合成過程中的一個限速酶，其過度表達與多種上皮性腫瘤發(fā)生發(fā)展關系密切[2～4]。

為了探討VEGF和COX2在膀胱移行細胞癌（TCCB）組織中的表達及其與腫瘤生物學行為的關系，本文采用免疫組織化學SP法檢測了TCCB組織和正常膀胱黏膜組織中二者的表達情況，現報告如下。

1材料與方法1.1標本選擇隨機選取我院1999～2002年經手術切除的初發(fā)性TCCB石蠟標本68例，男49例，女19例;年齡30～85歲，平均60.2歲。

臨床病理分期按國際抗癌協會（UICCTNM）標準確定，其中淺表性(Tis～T1)腫瘤32例，浸潤性(T2～T4)腫瘤36例。

病理分級按世界衛(wèi)生組織（WHO）1998年標準確定，其中Ⅰ級（G1）13例，Ⅱ級（G2）29例，Ⅲ級（G3）26例。

所選病例均有隨訪，其中復發(fā)38例。

10例正常膀胱黏膜組織標本取自非腫瘤病人。

標本均作5m厚的連續(xù)組織切片，分別進行蘇木精伊紅、免疫組織化學染色。

所有病例術前均未經放療、化療及免疫治療。

1.2檢測方法采用免疫組化SP法。

鼠抗人VEGF單克隆抗體和鼠抗人COX2單克隆抗體為SantaCruzBiotech公司產品,工作濃度為1∶100；生物素化羊抗鼠IgG及SP試劑盒為北京中山生物有限公司產品；DAB為Sigma公司產品。

用已知胃癌陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照,DAB顯色，蘇木精復染，中性樹脂封片。

具體操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.3結果判定標準VEGF表達的判定：

以腫瘤細胞及其附近的血管內皮細胞胞質出現黃色或棕黃色為陽性染色，無瘤細胞著色或著色瘤細胞數＜10%為陰性表達,著色瘤細胞數10%為陽性表達。

COX2陽性表達的判定標準：

胞質和核膜染為棕黃色或棕褐色的細胞為染色陽性細胞，連續(xù)觀察5個高倍視野，各計數100個細胞，陽性細胞占腫瘤細胞數10%為陰性表達，著色瘤細胞數10%為陽性表達[5]。

1.4統(tǒng)計學處理采用SPSS11.0軟件進行2檢驗及Spearman相關分析。

果2結2.1TCCB組織中VEGF蛋白的表達VEGF主要著色部位為癌細胞胞質，部分癌細胞周圍的血管內皮細胞的細胞質也著色，位于浸潤邊緣的癌細胞染色較重。

68例TCCB組織中42例VEGF蛋白表達陽性（61.76%），10例正常膀胱黏膜上皮組織VEGF蛋白的表達均為陰性，二者差異有極顯著意義（2=11.01，Plt;0.01）。

2.2TCCB組織中COX2蛋白的表達COX2主要著色部位為癌細胞胞質，少數為核膜著色，部分癌細胞周圍的血管內皮細胞的細胞質亦有著色。

68例TCCB組織中39例COX2蛋白表達陽性（57.35%），10例正常膀胱黏膜上皮組織COX2蛋白的表達均為陰性，二者差異有極顯著意義（2=11.47，Plt;0.01）。

2.3VEGF和COX2表達與TCCB病理分級、臨床分期、復發(fā)的關系VEGF在TCCBG1、G2、G3陽性表達率分別為23.07%、58.62%、84.61%，差異具有極顯著意義（2=14.11，Plt;0.01）；兩兩比較,三者間差異均有顯著性(2=4.56、4.48、14.26，Plt;0.05、0.01)；淺表性TCCB陽性表達率為43.75%，浸潤性TCCB為77.77%，差異有極顯著性（2=8.29，Plt;0.01）；復發(fā)組的陽性表達率為78.94%，而未復發(fā)組為則40.00%，兩者間的差異有極顯著性（2=10.77，Plt;0.01）。

COX2在TCCBG1、G2、G3異常表達率分別為15.38%、55.17%、80.77%，差別有極顯著性（2=15.27，Plt;0.01）；兩兩比較,三者間差異均有顯著性(2=5.80、4.08、15.33，Plt;0.05、0.01)；在淺表性TCCB陽性表達率為37.50%，浸潤性TCCB為75.00%，差異有極顯著性（2=9.73，Plt;0.01）;復發(fā)組陽性表達率為73.68%，未復發(fā)組為36.67%，差異有極顯著性（2=9.40，Plt;0.01）。

2.4VEGF與COX2表達的關系TCCB組織中VEGF與COX2的共同陽性表達率為48.53%（33/68）。

VEGF陽性組中COX2陽性表達率為78.57%（33/42）；VEGF陰性組中COX2陽性表達率為23.08%（6/26），兩者之間差異有極顯著性（2=20.22，Plt;0.01）。

相關分析表明，TCCB組織中VEGF與COX2的表達具有正相關性（r=0.55,Plt;0.01）。

3討論3.1VEGF在TCCB組織的表達情況研究表明，腫瘤的生長和轉移取決于血管形成。

血管形成受大量促血管生長因子和抗血管生成因子的調節(jié)，而在所有的調節(jié)因子中，VEGF是最重要的，它調控血管形成作用強，特異性高，與腫瘤的浸潤轉移有關。

VEGF是一種特異性促血管內皮細胞有絲分裂因子，其基因定位于人染色體6p21.3上，全長14kb[6]。

VEGF高表達于多種惡性腫瘤，如膠質瘤、肺癌、乳癌和腎癌等。

而在正常人體組織中如心肌、肺、腎、肝臟等均可檢測到VEGF的表達，但其陽性率極低，僅維持正常的血管密度和基本滲透功能，以利于營養(yǎng)物質的運輸[7]。

本文結果顯示，VEGF蛋白在TCCB組織中呈高表達，而在正常膀胱黏膜組織不表達；VEGF在TCCB組織陽性表達率隨著TCCB的病理分級、臨床分期的增高而上升；浸潤性TCCB與淺表性相比，前者VEGF陽性表達率明顯升高；VEGF陽性表達的腫瘤病人，其復發(fā)率顯著高于陰性表達的腫瘤病人。

膀胱癌是富血管性的惡性腫瘤，VEGF表達將有助于膀胱腫瘤的血管新生。

隨著膀胱癌分期、分級的提高，VEGF蛋白表達率升高，這表明VEGF可能與膀胱腫瘤的生長和浸潤密切相關，其表達愈強，TCCB的惡性度愈高，復發(fā)率高，提示VEGF可以作為反映膀胱移行細胞癌生物學行為的一個重要指標。

3.2COX2在TCCB組織的表達情況哺乳動物的COX有COX1和COX2兩種類型。

COX1屬結構型蛋白，在正常組織和細胞中表達；而COX2屬可誘生型酶，在正常生理狀態(tài)下多數組織內幾乎檢測不到，而在細胞受到各種刺激時，如組織損傷、炎癥或細胞惡性轉化時表達增強。

人的COX2基因定位于1q25.225.3上，長約8.3kb。

COX2的過度表達與多種上皮性腫瘤發(fā)生發(fā)展關系密切，并可以作為預防和治療腫瘤的靶分子，具有重要的臨床意義[8]。

研究表明，在結腸癌、乳癌、前列腺癌等許多上皮來源的惡性腫瘤組織中，COX2和前列腺素的合成都增加[2～4]。

體外實驗中結腸癌細胞系在穩(wěn)定轉染COX2基因后，細胞的增殖能力增強，細胞凋亡減少[9]。

本文結果也顯示，COX2蛋白在TCCB組織中呈高表達，而在正常膀胱黏膜組織不表達；COX2在TCCB組織陽性表達率隨著TCCB的病理分級的增高而增加，提示COX2可能參與了TCCB癌變細胞的分化；浸潤性TCCB與淺表性相比，前者COX2陽性表達明顯增強，提示較晚期的TCCB產生較多量的COX2，以維持其生長；COX2陽性表達的腫瘤病人，其復發(fā)率顯著高于陰性表達的腫瘤病人。

本研究結果提示，COX2表達與TCCB的分級、分期有顯著相關性；在高級別、易復發(fā)的病例中，COX2蛋白表達率升高，這表明COX2可能與TCCB的生長和浸潤密切相關，其表達愈強，TCCB的惡性度愈高，復發(fā)率也愈高，提示COX2可以作為檢測膀胱移行細胞癌惡性程度及復發(fā)的重要指標之一。

3.3VEGF與COX2表達的關系腫瘤的生長及轉移都依賴于新生血管的形成，大部分腫瘤都會分泌出大量的VEGF，從而調節(jié)血管形成及啟動轉移過程。

在生長旺盛的腫瘤，組織相對低氧誘導COX2表達，從而也引起VEGF的表達增加。

CIANCHI等[10]對31例結腸癌的研究提示，VEGF是COX2促血管形成作用的最重要相關因子，結腸癌組織COX2的表達水平和VEGFmRNA及蛋白表達水平都有著顯著相關性。

WILLIAMS等[11]研究結果顯示，COX2與VEGF的表達密切相關，在COX2基因缺失的成纖維細胞中，VEGF的表達下降了94%，在COX2基因缺陷的小鼠中VEGFmRNA含量明顯下降。

COX2也可以直接刺激腫瘤細胞產生類花生四烯酸產物如TXA2、PGE2、PGI2等，這些物質可以直接促進內皮細胞的移位和生長因子誘導的血管形成。

MAJIMA等[12]報道，在PGE2、PGF2增加的同時，VEGFmRNA的生成也增加，VEGF以旁分泌形式作用于內皮細胞，促進血管生成。

本文研究結果表明，COX2在TCCB組織的表達模式十分接近于VEGF的表達模式，二者之間密切相關。

本研究結果表明，COX2和VEGF在TCCB的生長、侵襲與轉移中發(fā)揮重要作用。

將COX2和VEGF結合起來進行分析，能更準確反映TCCB的生物學行為，并可以作為判定TCCB惡性程度及復發(fā)的參考指標。

【參考文獻】[1]段建敏,李智,秦大山,等.膀胱腫瘤癌組織中VEGF的表達[J].蘭州醫(yī)學院學報,2001,27(3)：

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195197.[8]羅