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文檔簡介

溶血空斑試驗（PFC測定）

(Plaqueformingcellassay)小鼠B細胞溶血空斑形成試驗溶血空斑試驗是基于抗原抗體反應可活化補體，溶解細胞的原理來檢測抗體形成細胞的一種體外試驗方法，用于檢測動物的抗體產(chǎn)生功能的經(jīng)典的試驗。將SRBC免疫過的小鼠脾細胞制成細胞懸液，與一定量的SRBC混合，在補體參與下，使抗體產(chǎn)生細胞周圍的SRBC溶解，形成一個肉眼可見的溶血空斑。主要用于測定B細胞抗體產(chǎn)生能力。實驗目的：

1.掌握PFC試驗的基本原理及實驗方法；2.了解PFC試驗的臨床意義。實驗原理抗原刺激B細胞活化分泌特異性抗體抗原抗體復合物經(jīng)典途徑激活補體系統(tǒng)實驗材料小鼠18～22g，5％、15％SRBC，補體，Hank’s液，解剖器械（剪刀、鑷子），空平皿、篩網(wǎng)、組織研磨器、吸管、試管、離心機，載玻片、雙面膠、微量加樣器、Tip頭、棉簽、石蠟、石蠟鍋、溫箱等。實驗流程5％SRBC0.4ml腹腔內(nèi)注射免疫小鼠4d后頸椎脫臼處死小鼠，取脾臟，放入已加8mlHank’s液的平皿中，研磨，200目篩網(wǎng)過濾離心：1000r/min×10min去上清，加2mlHank’s液制成脾細胞懸液1.脾細胞懸液的制備實驗流程取潔凈載玻片兩張用雙面膠在中間和兩端各粘一條，將兩張玻片黏在一起即成2個小室2.制作小室實驗流程3.配制小室灌注液實驗管（μl）對照管

（μl）

脾細胞懸液10010015%SRBC100100補體100-Hank’s液500600混勻，分別灌注小室（注滿），石蠟封口，37度，40min.準備2支試管，按照下表加樣：實驗組對照組實驗組對照組結(jié)果：

實驗組出現(xiàn)無數(shù)個透明的溶血空斑，而對照組無。溶血空斑邊緣不規(guī)則，而氣泡透亮、邊

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