醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn) Djp2 免疫細(xì)胞檢測(cè)

1醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)-2-細(xì)胞免疫體外檢測(cè)2E-花環(huán)試驗(yàn)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（示教）大、小吞噬細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象（示教）白細(xì)胞的吞噬作用（操作）本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容3Developmentanddifferentiationofhematopoieticstemcell場(chǎng)所:骨髓造血干細(xì)胞的發(fā)育與分化造血干紅胞髓樣干細(xì)胞淋巴樣干細(xì)胞場(chǎng)所：胸腺4細(xì)胞免疫的測(cè)定（一）T細(xì)胞總數(shù)及亞群數(shù)量的測(cè)定（二）T細(xì)胞功能的測(cè)定1.淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)

形態(tài)學(xué)方法、MTT比色法、3H-TdR摻入法等。2.細(xì)胞毒試驗(yàn)3.細(xì)胞因子測(cè)定流式細(xì)胞儀：不同類型細(xì)胞的計(jì)數(shù)；亞群：HIV，CD4+；

Th1/Th2：腫瘤/結(jié)核，類風(fēng)/潰結(jié)，（絲裂原）CD8+T，雞紅細(xì)胞ELISA：Th1/Th2細(xì)胞因子5原理：T細(xì)胞表面有綿羊紅細(xì)胞受體(E受體，CD2/LFA-2)，形

成花環(huán)。計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞，結(jié)合3個(gè)或以上SRBC者

為一個(gè)E花環(huán)（陽(yáng)性）。T+TTT1）T細(xì)胞E花環(huán)形成試驗(yàn)(E-rosettetest)目的：檢測(cè)T細(xì)胞數(shù)量，判斷機(jī)體的細(xì)胞免疫狀況。總花環(huán)（Et）：T細(xì)胞與SRBC，37℃水浴，5min；4℃，1-2小時(shí)；[50-80%]活性花環(huán)(Ea)：不經(jīng)4℃處理，低速離心，沉淀的花環(huán)；（大）[20-40%]E受體E抗原T細(xì)胞的異質(zhì)性：不同類型T細(xì)胞與SRBC結(jié)合能力、結(jié)合后的穩(wěn)定性不同。6正常范圍：50%-80%玫瑰花環(huán)試驗(yàn)E-rosettetest72）T細(xì)胞增殖試驗(yàn)（淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)）

原理：T細(xì)胞在體外受到刺激物（PHA，ConA）作用下，

細(xì)胞代謝和形態(tài)相繼發(fā)生變化，細(xì)胞變大，漿擴(kuò)

大，出現(xiàn)空泡、核仁明顯，染色質(zhì)疏松→轉(zhuǎn)化為

具有分裂能力的淋巴母細(xì)胞。目的：檢測(cè)T細(xì)胞活性。8計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞，算轉(zhuǎn)化率。淋巴母細(xì)胞（體積增大，形態(tài)不整齊，核大，松散，有核仁，胞漿變寬，出現(xiàn)空泡）93）大、小吞噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)大吞噬細(xì)胞－單核巨噬細(xì)胞小吞噬細(xì)胞－中性粒細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)：核呈腎形，1.實(shí)驗(yàn)前3天，小鼠腹腔，注射可溶性淀粉肉湯，

6%/1mL.2.再腹腔注射1%/0.5mL雞紅C，30min,輕揉3.處死、取腹腔液，瑞氏染色。瑞氏染色：藍(lán)色A.大吞噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)（示教）10B.中性粒細(xì)胞的吞噬作用標(biāo)記加肝素采血加等量菌液，37oC反應(yīng)30min加沉淀細(xì)胞(10ul)*，30-45o快速推片自然干燥加瑞氏染液反應(yīng)30‘’-1min(馬上)，后加入等量蒸餾水反應(yīng)3-5min（1-2）細(xì)水流沖洗吸水紙印干后油鏡檢查混勻操作：分葉核細(xì)菌將推玻片向1的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向推動(dòng)。11瑞氏染液:由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)

合染料.嗜酸性粒細(xì)胞：？嗜堿性粒細(xì)胞：？中性粒細(xì)胞：？淋巴細(xì)胞：圓單核細(xì)胞：腎形結(jié)果：12中性粒細(xì)胞：分裂/分葉嗜堿性粒細(xì)胞：藍(lán)色嗜堿性粒細(xì)胞：藍(lán)色嗜酸性