DB11∕T 1461.4-2018 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育與遺傳監(jiān)測(cè) 第4部分：實(shí)驗(yàn)用狨猴

ICS65.020.30B44備案號(hào)：607232018DB11DB11/T146142018實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育與遺傳監(jiān)測(cè)第4部分:實(shí)驗(yàn)用狨猴L(fēng)aboratoryanimalBreedingandgeneticcontrolPart5:Experimentalmarmoset前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 14繁育 15繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè) 2附錄A(規(guī)范性附錄）封閉群實(shí)驗(yàn)用狨猴微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測(cè)方法 3DB11/T1461《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育與遺傳監(jiān)測(cè)》擬分為以下部分:一一第2部分：實(shí)驗(yàn)用牛；一一第3部分：實(shí)驗(yàn)用羊；一一第4部分：實(shí)驗(yàn)用狨猴；本部分為DB11/T1461的第4部分。本部分按照GB/T112009給出的規(guī)則起草。本部分由北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本部分由北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)組織實(shí)施。本部分起草單位：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。本部分主要起草人：劉云波、劉先菊、向志光、滕永康繁殖種群breedingstock以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)用狨猴種群，種猴數(shù)量應(yīng)不少于25對(duì)。3術(shù)語(yǔ)和定義繁殖種群breedingstock以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)用狨猴種群，種猴數(shù)量應(yīng)不少于25對(duì)。3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB14923實(shí)驗(yàn)動(dòng)物哺乳類(lèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)用狨猴experiments丨marmoset經(jīng)人工飼育，對(duì)其攜帶的病原微生物和寄生蟲(chóng)實(shí)行控制，遺傳背景明確或者來(lái)源清楚，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)和檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的狨猴。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育與遺傳監(jiān)測(cè)本部分規(guī)定了實(shí)驗(yàn)用狨猴的繁育與繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)。本部分適用于實(shí)驗(yàn)用狨猴的繁育與遺傳監(jiān)測(cè)。參考封閉群實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖方法保持繁殖種群動(dòng)物的遺傳概貌和生理特征，避免近交系數(shù)隨繁殖代數(shù)増加而過(guò)快上升。作為繁殖用原種的實(shí)驗(yàn)用狨猴必須遺傳背景明確，來(lái)源清楚，有較完整的資料（包括種群名稱(chēng)、來(lái)源、遺傳基因特點(diǎn)及主要生物學(xué)特性等）。為保持繁殖種群動(dòng)物的遺傳異質(zhì)性及基因多態(tài)性，引種動(dòng)物數(shù)量要足夠多。參照GB14923規(guī)定，實(shí)驗(yàn)用狨猴最小引種群規(guī)模為25對(duì)無(wú)血緣關(guān)系（三代以?xún)?nèi)無(wú)共同祖先）動(dòng)物。為保持封閉群動(dòng)物遺傳基因的穩(wěn)定，封閉群應(yīng)足夠大，并盡量避免近親交配。5繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)為保持封閉群動(dòng)物遺傳基因的穩(wěn)定，封閉群應(yīng)足夠大，并盡量避免近親交配。5繁殖種群的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)采用微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測(cè)方法進(jìn)行，具體檢測(cè)方法見(jiàn)附錄A。實(shí)驗(yàn)用狨猴應(yīng)符合以下要求：a)具有明確的遺傳背景資料，來(lái)源清楚，有完整的資料（包括種群名稱(chēng)、來(lái)源、遺傳基因特點(diǎn)及主要生物學(xué)特性等并能充分表明新培育的或引種的繁殖種群符合要求。b)保種及生產(chǎn)的繁殖記錄卡應(yīng)清楚完整，繁殖方法科學(xué)合理。群體內(nèi)遺傳變異采用平均雜合度指標(biāo)或群體平衡狀態(tài)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。按附錄A中A.6進(jìn)行遺傳判定。實(shí)驗(yàn)用狨猴繁殖種群每年至少進(jìn)行一次遺傳質(zhì)量檢測(cè)。隨機(jī)采取實(shí)驗(yàn)用狨猴的血液或其他組織，按表1要求從每個(gè)繁殖種群中隨機(jī)抽取非同窩成年動(dòng)物，雌雄各半。采樣數(shù)量按表1進(jìn)行。表1封閉群實(shí)驗(yàn)用狨猴遺傳檢測(cè)采樣數(shù)量少于100不少于100A.3微衛(wèi)星位點(diǎn)用于檢測(cè)狨猴微衛(wèi)星位點(diǎn)分別為30個(gè)，各微衛(wèi)星位點(diǎn)的名稱(chēng)、A.3微衛(wèi)星位點(diǎn)用于檢測(cè)狨猴微衛(wèi)星位點(diǎn)分別為30個(gè)，各微衛(wèi)星位點(diǎn)的名稱(chēng)、引物序列、等位基因數(shù)、PCR反應(yīng)的A.4PCR擴(kuò)增A.4.1PCR擴(kuò)增的體系A(chǔ).4.2PCR產(chǎn)物的檢測(cè)外分光光度儀。A.2基因組DNA的提取PCR儀用酚-氯仿萃取法或試劑盒提取基因組DNA。PCR產(chǎn)物，經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳以及凝膠成像系統(tǒng)拍照檢測(cè)擴(kuò)増結(jié)果。A.4.3擴(kuò)增產(chǎn)物的STR掃描擴(kuò)増產(chǎn)物經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)確保擴(kuò)増出目的片斷后，選擇分別以FAM、HEX、TAMRA標(biāo)記的三個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)増產(chǎn)物，以1:3:5體積比混合，取1吣上樣進(jìn)行STR掃描。A.5STR掃描結(jié)果的判讀與統(tǒng)計(jì)分析A.5.1STR掃描結(jié)果的判讀掃描結(jié)果可出現(xiàn)兩種波形：一種為純合基因型，只有一個(gè)主波；另一種為雜合基因型，有兩個(gè)主波。由群體遺傳分析軟件讀出每個(gè)樣本在每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的擴(kuò)増片斷大小。每個(gè)位點(diǎn)的等位基因根據(jù)擴(kuò)増片斷從小到大順序排列記錄為a,b,c,d...等。附錄A(規(guī)范性附錄）封閉群實(shí)驗(yàn)用狨猴微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測(cè)方法A.5.2運(yùn)用群體遺傳分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析方檢驗(yàn)，可知被監(jiān)測(cè)群體是否達(dá)到平衡狀態(tài)。根據(jù)判定結(jié)果對(duì)被檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)用狨猴群體做表A.1實(shí)驗(yàn)用狨猴微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物序列、最佳擴(kuò)