白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)_第1頁(yè)
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/白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)[定義]白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)是將血液制成分布均勻的薄膜涂片,用染料染色,根據(jù)各類白細(xì)胞著色特征,在顯微鏡下觀察其數(shù)量、形態(tài)和質(zhì)量的變化、予以分類計(jì)數(shù)并求出各種白細(xì)胞所占的百分率。[意義]血液中的白細(xì)胞一般包括:顆粒細(xì)胞(嗜中性、嗜酸性和堿性細(xì)胞)、淋巴細(xì)胞(大、中、小淋巴細(xì)胞)和單核細(xì)胞,它們分工不同,在體內(nèi)發(fā)揮各自的作用。①嗜中性白細(xì)胞,成熟的嗜中性白細(xì)胞通過(guò)吞噬作用而消滅入侵的細(xì)菌,特別是球菌。在嚴(yán)重感染和炎癥初期時(shí)最活躍;②嗜酸性白細(xì)胞,常積聚在抗原-抗體反應(yīng)的部位,因此,認(rèn)為它抑制組胺等物質(zhì)的活動(dòng);③嗜堿性白細(xì)胞,堿性顆粒中有肝素,表明它有抗凝作用;④淋巴細(xì)胞;參與機(jī)體免疫反應(yīng);⑤單核細(xì)胞;它有特殊的酶系統(tǒng),能對(duì)付頑強(qiáng)的病原體,如真菌、原生動(dòng)物、結(jié)核桿菌與布病等。在慢性感染時(shí)或體內(nèi)有較多組織碎片需要清除時(shí),它會(huì)大量出現(xiàn)。在正常情況下,白細(xì)胞構(gòu)成的比例、形態(tài)和質(zhì)量基本是不變的,但在病理情況下,這種比例、形態(tài)、質(zhì)量將會(huì)發(fā)生變化,故臨床上常把計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù)結(jié)合起來(lái),進(jìn)行分析和診斷某些感染性疾病的種類。[目的與要求]掌握計(jì)數(shù)的原理、方法和臨床意義[原理]由于白細(xì)胞內(nèi)含有帶不同電荷的物質(zhì),其中帶正電荷的物質(zhì)易與酸性染料結(jié)合呈現(xiàn)紅色(這種物質(zhì)叫嗜酸性物質(zhì)或顆粒,而其本身呈堿性);而帶負(fù)電荷的物質(zhì)易與堿性染料結(jié)合呈現(xiàn)藍(lán)色(這種物質(zhì)叫嗜堿性物質(zhì)或顆粒,而其本身呈酸性);當(dāng)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)帶的正負(fù)電荷相等時(shí),那么結(jié)合的酸性染料和堿性染料幾乎相等,這些物質(zhì)就呈現(xiàn)紅、藍(lán)相混的紫紅色(這種物質(zhì)叫嗜中性物質(zhì)或顆粒)。這樣血片中的白細(xì)胞經(jīng)過(guò)染色后就被染成紅、藍(lán)與紫紅色,從而可以識(shí)別分類?!酒鞑呐c試劑】器材:載玻片、染色缸與支架、洗瓶、顯微鏡與鏡油、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器、吸水紙等。試劑:染液、緩沖液[步驟]1.采血2.制作血涂片:①取潔凈載玻片數(shù)張,選擇邊緣光滑的載片作為推片(也可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的蓋玻片做為推片),用左手的拇指與中指夾持載片并置于平穩(wěn)的臺(tái)面上,右手持推片。②取被檢血(經(jīng)EDTA抗凝)1小滴,放于載玻片的右端,手持推片放于血滴之前并與載片接觸,以30°~40°角向后拉動(dòng)推片,使之與血滴接觸,待血液擴(kuò)散形成一條線狀之后,以均等的速度輕輕向前推動(dòng)推片,則血液就被均勻地涂于載片上而形成一薄血膜。良好的血片,血液應(yīng)分布均勻,厚度要適當(dāng),對(duì)光觀察時(shí)呈霓紅色,血膜應(yīng)位于玻片中央,兩端留有空隙,以便標(biāo)上患畜名稱、畜別、編號(hào)、日期。常溫下自然風(fēng)干(冬天可適當(dāng)加溫)。3.染色3.1單染色瑞氏染色:滴加染液(約20滴)蓋滿血膜,染1分鐘后,再加等量的緩沖液,繼續(xù)染色3~10分鐘(外界溫度低染色時(shí)間長(zhǎng),反之亦然),用水沖去染液,吸干染片,干燥后,油鏡觀察。對(duì)胞漿與顆粒染色效果好。姬姆薩氏染色:在血膜上先加2-3滴甲醇使血膜固定,3-5分鐘后待甲醇揮發(fā)后再加染液;染色20-60分鐘(依外界溫度高低而定染色時(shí)間長(zhǎng)短);水洗,干后油鏡觀察。對(duì)胞核與血液原蟲(chóng)染色效果好。3.2復(fù)染色(混合染色)瑞氏-姬姆薩氏復(fù)合染色:先加瑞氏染液,半分鐘后用水洗去染液;再加姬姆薩氏染液染約10分鐘,水洗、干燥鏡檢?;蛟谂R染色時(shí)向瑞氏染液中加入適量的姬姆薩氏原液,即每10毫升瑞氏染液中,加入0.5-1.0毫升姬姆薩氏原液,混勻后,按瑞氏染色的步驟進(jìn)行染色。4.鏡檢分類計(jì)數(shù)方法:四角曲則計(jì)數(shù)法或三段曲則計(jì)數(shù)法.步驟:(1)先用低倍鏡觀察血片上白細(xì)胞的分布情況.一般嗜中性白細(xì)胞,單核細(xì)胞與體積較大的細(xì)胞分布在血片的上,下邊與尾端,中小淋巴細(xì)胞則多在涂片的起始端.(2)滴加鏡油,轉(zhuǎn)用油鏡頭進(jìn)行計(jì)數(shù).至少數(shù)100個(gè)白細(xì)胞,根據(jù)染色特點(diǎn),分別計(jì)數(shù)各類白細(xì)胞的數(shù)量,最后求出各類白細(xì)胞占總數(shù)的百分比。[白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的臨床意義]1.判斷可能的感染或疾病的狀況1).嗜中性白細(xì)胞:(1)增多:見(jiàn)于某些急性傳染病(豬丹毒、炭疽、出敗等)和慢性傳染病(鼻疽、結(jié)核等),某些化膿性疾?。撔孕啬ぱ住⒛撔愿鼓ぱ?、肺膿腫與創(chuàng)傷性心包炎等),某些急性炎癥(急性胃腸炎、急性肺炎、急性子宮內(nèi)膜炎和乳房炎等),術(shù)后一周內(nèi),酸中毒的初期,毛地黃中毒以與腎上腺素中毒等。(2)減少:見(jiàn)于病毒性疾病以與病危期,造血機(jī)能受阻或衰弱;懷騾子的母驢在妊娠中毒癥時(shí),嗜中性白細(xì)胞顯著減少。2).嗜酸性白細(xì)胞:(1)增多:見(jiàn)于某些寄生蟲(chóng)?。ǜ纹x(chóng)病、球蟲(chóng)病、旋毛蟲(chóng)病等),某些過(guò)敏疾?。暡葸^(guò)敏、尋麻疹、注射血清后等),皮膚病(濕疹、疥癬等)(2)減少:見(jiàn)于毒血癥、尿毒癥、嚴(yán)重創(chuàng)傷與中毒等。3).嗜堿性白細(xì)胞:增多或減少較少見(jiàn)。4).淋巴細(xì)胞:(1)增多:見(jiàn)于某些慢性傳染?。ㄈ缃Y(jié)核、布病等),急性傳染病的恢復(fù)期,某些病毒?。ㄘi瘟、流感等)以與血孢子蟲(chóng)病等。(2)減少:常在嗜中性白細(xì)胞數(shù)絕對(duì)增多時(shí),出現(xiàn)淋巴細(xì)胞減少的現(xiàn)象。說(shuō)明機(jī)體與病原正處于激烈的斗爭(zhēng),此后若淋巴細(xì)胞漸漸增多,表示預(yù)后良好。5).大單核細(xì)胞:(1)增多:見(jiàn)于某些原蟲(chóng)病,某些慢性細(xì)菌感染以與某些病毒病(如馬傳染性貧血)。(2)減少:見(jiàn)于急性傳染性病的初期與各種疾病的垂危期。2.判斷預(yù)后1)預(yù)后不良:白細(xì)胞總數(shù)與嗜中性白細(xì)胞的百分比顯著升高者;嗜中性桿狀核細(xì)胞與晚幼細(xì)胞顯著增多者;白細(xì)胞總數(shù)未能隨病情的發(fā)展而適時(shí)升高者;嗜酸性白細(xì)胞完全消失者。2)預(yù)后良好:白細(xì)胞總數(shù)與嗜中性白細(xì)胞的百分比隨病情的好轉(zhuǎn)而逐步下降者;嗜中性桿狀核細(xì)胞與晚幼細(xì)胞逐漸減少而分葉核細(xì)胞漸次相應(yīng)恢復(fù)者;淋巴細(xì)胞的百分比逐漸恢復(fù)者;大單核細(xì)胞暫時(shí)增多者;嗜酸性白細(xì)胞重新出現(xiàn)或暫時(shí)增多者。[白細(xì)胞的染色(瑞氏或姬姆薩氏)特點(diǎn)]1.嗜堿性粒細(xì)胞:細(xì)胞較大,呈圓形或橢圓形,胞漿中有深紫色的較小的染色顆粒。嗜酸性粒細(xì)胞:細(xì)胞較大,呈圓形或橢圓形,胞漿中有鮮紅色的染色顆粒。中性粒細(xì)胞:細(xì)胞中等大小,呈圓形或橢圓形,胞漿中有淡玫瑰紅的小顆粒。依細(xì)胞核的形態(tài)分為髓細(xì)胞、幼稚型、桿狀核與分葉核細(xì)胞。髓細(xì)胞的細(xì)胞核色淡,著色不均,呈長(zhǎng)圓形或豆型。幼稚型的細(xì)胞核著色較淡,核染色質(zhì)疏松,多呈腎型、豆型。桿狀核細(xì)胞的核致密、色深,呈桿狀的香腸形、蹄鐵型或S型,兩邊平行。分葉核細(xì)胞其核分成2~6個(gè)不等,并在其間有細(xì)絲狀連接為其特征。淋巴細(xì)胞:胞體呈圓形,直徑大者為大淋巴細(xì)胞,小者稱小淋巴細(xì)胞;核呈深藍(lán)紫色,圓形,致密且常偏在;胞漿呈淡天藍(lán)色,核周圍有淡染色帶(或呈透明帶);小淋巴細(xì)胞的胞漿極少,有時(shí)僅呈月牙形,位于一側(cè)。單核細(xì)胞:個(gè)體極大,呈不正、多邊、多角形,胞漿呈較暗的煙灰色,核呈紫褐色,形如腎形、山字形、折疊狀,核染色質(zhì)疏松網(wǎng)狀?!菊⒖贾怠恳?jiàn)表1-1表1-1各種動(dòng)物白細(xì)胞分類正常平均值(%)動(dòng)物種類白細(xì)胞總數(shù)×109/L嗜堿性白細(xì)胞嗜酸性白細(xì)胞嗜中性白細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞晚幼細(xì)胞桿狀核分葉核牛8.00.54.00.53.033.057.02.0馬9.50.54.50.54.054.034.02.5羊綿8.2,山9.60.54.51.03.033.055.53.5豬14.80.52.51.05.532.055.03.5駱駝0.58.01.06.547.035.02.0犬9.4少見(jiàn)4.00.00.870.020.05.0貓12.04.50.250.254.563.525.81.2雞19.01-45-825-30%55-6010附注:1.白細(xì)胞的染色(用瑞氏或姬姆薩氏)特點(diǎn):1.嗜堿性粒細(xì)胞:細(xì)胞較大,呈圓形或橢圓形,胞漿中有深紫色的較小的染色顆粒。2.嗜酸性粒細(xì)胞:細(xì)胞較大,呈圓形或橢圓形,胞漿中有鮮紅色的染色顆粒。3.中性粒細(xì)胞:細(xì)胞中等大小,呈圓形或橢圓形,胞漿中有淡玫瑰紅的小顆粒。依細(xì)胞核的形態(tài)分為髓細(xì)胞、幼稚型、桿狀核與分葉核細(xì)胞。髓細(xì)胞的細(xì)胞核色淡,著色不均,呈長(zhǎng)圓形或豆型。幼稚型的細(xì)胞核著色較淡,核染色質(zhì)疏松,多呈腎型、豆型。桿狀核細(xì)胞的核致密、色深,呈桿狀的香腸形、蹄鐵型或S型,兩邊平行。分葉核細(xì)胞其核分成2~6個(gè)不等,并在其間有細(xì)絲狀連接為其特征。4.淋巴細(xì)胞:胞體呈圓形,直徑大者為大淋巴細(xì)胞,小者稱小淋巴細(xì)胞;核呈深藍(lán)紫色,圓形,致密且常偏在;胞漿呈淡天藍(lán)色,核周圍有淡染色帶(或呈透明帶);小淋巴細(xì)胞的胞漿極少,有時(shí)僅呈月牙形,位于一側(cè)。5.單核細(xì)胞:個(gè)體極大,呈不正、多邊、多角形,胞漿呈較暗的煙灰色,核呈紫褐色,形如腎形、山字形、折疊狀,核染色質(zhì)疏松網(wǎng)狀。2.各種畜禽血細(xì)胞的染色特點(diǎn):禽血細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn):雞白細(xì)胞總數(shù)19×109/L.異嗜性白細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的25-30%;嗜酸性白細(xì)胞占5%-8%;嗜堿性白細(xì)胞占1-4%;淋巴細(xì)胞占55-60%;單核細(xì)胞占10%.(1)紅細(xì)胞:呈卵圓形,大小為10~14×6~9微米,體積比馬的紅細(xì)胞大.中央有橢圓形的核,核中有不規(guī)則的深染色質(zhì).胞漿呈橙紅色.(2)異嗜性白細(xì)胞:又叫假嗜酸性白細(xì)胞,相當(dāng)于哺乳動(dòng)物的嗜中性粒細(xì)胞,近乎圓形,大小為0-14微米,胞漿淡染,其中有許多嗜酸性桿狀或紡錘型結(jié)晶顆粒,這種顆粒被染成淺紅色.胞核呈多型性,核通常為2-5葉,葉間的連接帶較明顯.核內(nèi)染色質(zhì)塊較粗大,呈藍(lán)紫色.鴨的異嗜性白細(xì)胞顆粒為不正圓形;鵝的為大米粒樣.(3)嗜酸性白細(xì)胞:大小為4-11微米.嗜酸性顆粒大而呈球形(鴨的呈桿狀),染成深紅色.胞漿為淡藍(lán)灰色;核常為2葉,染成藍(lán)色.(4)嗜堿性白細(xì)胞:胞漿內(nèi)有中等大小的深紫色顆粒;核為圓形、卵圓形或分葉,核染色較淺.(5)淋巴細(xì)胞:分大、中、小淋巴細(xì)胞,小的居多,常有突起.淋巴細(xì)胞胞漿微嗜堿性(淡藍(lán)色);核呈圓形或一側(cè)凹陷(核的凹陷側(cè)有時(shí)可見(jiàn)到嗜天青顆粒),核常偏在,染色質(zhì)粗糙或細(xì)勻.(6)單核細(xì)胞:占白細(xì)胞總數(shù)的10%.比大淋巴細(xì)胞稍大,其胞漿為藍(lán)灰色(與大淋巴細(xì)胞相似,但胞漿比淋巴細(xì)胞多).核不規(guī)則,核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)疏松均勻?yàn)榧?xì)絲狀.(7)凝血細(xì)胞:相當(dāng)于哺乳動(dòng)物的血小板,呈卵圓形,胞漿清晰,其中央有一圓形的核.在細(xì)胞的一端常有一個(gè)或多個(gè)染成紅色的小顆粒;胞核的染色質(zhì)密集并結(jié)成較大的塊.馬的血細(xì)胞形態(tài)特征:馬的白細(xì)胞總數(shù)9.5×109/L.嗜中性白細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的58.5%;嗜酸性白細(xì)胞占4.5%;嗜堿性白細(xì)胞占0.5%;淋巴細(xì)胞占34%;單核細(xì)胞占2.5%.(1)紅細(xì)胞:大小一致,平均直徑為5.7微米,染色濃且均勻,中心淡染區(qū)不明顯..紅細(xì)胞常形成長(zhǎng)鏈狀(錢串狀),一般不出現(xiàn)未成熟的紅細(xì)胞.(2)嗜中性白細(xì)胞:成熟的細(xì)胞,核呈劇齒樣外觀,核分葉明顯.母馬的嗜中性白細(xì)胞核上有時(shí)可見(jiàn)鼓錘狀突起.胞漿染成淡紅色,其中有桃紅色微細(xì)的顆粒.在健康馬的末梢血液中,嗜中性桿狀核白細(xì)胞的核比分葉核白細(xì)胞的核大,呈馬蹄形或S形,核的邊緣有染色較深的斑點(diǎn).(3)嗜酸性白細(xì)胞:細(xì)胞中有明亮的,被染成橙紅色的,大而圓的顆粒,這種嗜酸性顆粒充滿整個(gè)胞漿,甚至覆蓋在胞核上,致使淡藍(lán)色的胞漿幾乎看不到.(4)嗜堿性白細(xì)胞:胞漿中有散在的或密集的被染成深藍(lán)紫色的,大小和形狀一定的顆粒.(5)淋巴細(xì)胞:大多數(shù)為小淋巴細(xì)胞,其特點(diǎn)是核大且染色濃,僅有一小片月牙形的天藍(lán)色的胞漿.大淋巴細(xì)胞的胞漿相對(duì)較多,呈淡藍(lán)色,胞漿中含有為數(shù)不多的天藍(lán)色小顆粒.(6)單核細(xì)胞:核多呈腎形,偏于細(xì)胞一側(cè).胞漿呈灰藍(lán)色,內(nèi)有微細(xì)的天藍(lán)色顆粒.(7)血小板:一般呈卵圓形,也有呈精子形狀者,常聚集在一起,內(nèi)有細(xì)小的天藍(lán)色顆粒.牛的血細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn):牛的白細(xì)胞總數(shù)8.0×109/L.嗜中性白細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的36.5%;嗜酸性白細(xì)胞占4.0%;嗜堿性白細(xì)胞占0.5%;淋巴細(xì)胞占57%;單核細(xì)胞占2.0%.(1)紅細(xì)胞:大小不均勻,平均直徑為5.5微米,不易形成串錢狀.在重劇疾病時(shí),可見(jiàn)到紅細(xì)胞形成串錢狀,因此根據(jù)串錢形成的程度,對(duì)判斷預(yù)后有一定的幫助.(2)嗜中性白細(xì)胞:成熟細(xì)胞的核分葉明顯,各葉間有較短的核絲連接,胞漿呈淡桃紅色,含有大量紫紅色的細(xì)小顆粒.桿狀核細(xì)胞的核短而粗且稍彎曲,胞漿染色比成熟型的淡,顆粒也較少.晚幼粒細(xì)胞的核較大,呈圓形,腎形,核染色質(zhì)出現(xiàn)斑點(diǎn)狀構(gòu)造,胞漿為淡灰色,顆粒不明顯.(3)嗜酸性白細(xì)胞:嗜酸性顆粒較小,呈圓形,有屈光性,顆粒之間有空隙,呈現(xiàn)出淡灰色的細(xì)胞漿.胞核多呈桿狀,也有呈分葉狀的,核染色質(zhì)濃淡不勻.(4)嗜堿性白細(xì)胞:嗜堿性顆粒呈卵圓形,大小和馬的相似.(5)淋巴細(xì)胞:大小極不一致,小淋巴細(xì)胞的大小似紅細(xì)胞,往往只能看到核,胞漿很少.大淋巴細(xì)胞大小似單核細(xì)胞.各種淋巴細(xì)胞的胞漿中有大小不等的紫紅色顆粒.(6)單核細(xì)胞:核呈牛腎形或多角形,染色質(zhì)呈彌散性或紐扣狀.胞漿呈灰色,常有空泡出現(xiàn).(7)血小板:每一血小板的體積較小,有時(shí)可出現(xiàn)比紅細(xì)胞還大的巨型血小板,內(nèi)有紫紅色的小顆粒.常聚集成堆,有時(shí)浮在紅細(xì)胞上.綿羊的血細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn):綿羊的白細(xì)胞總數(shù)8.2×109/L.嗜中性白細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的26.9%;嗜酸性白細(xì)胞占2.9%;嗜堿性白細(xì)胞占0.2%;淋巴細(xì)胞占68.1%;單核細(xì)胞占1.9%.(1)紅細(xì)胞:大小略有差異,平均直徑為4.5微米,多數(shù)是單個(gè)存在,少數(shù)可有串錢狀,細(xì)胞中央淡染.(2)嗜中性白細(xì)胞:分葉的核明顯分為數(shù)葉,葉間有細(xì)絲連接,核染色質(zhì)為斑點(diǎn)狀,在母羊??煽吹酵黄鸬娜旧w.胞漿的染色性較弱,一般呈淺桃色,其中有彌散性的微細(xì)小顆粒.嗜中性桿狀核型的細(xì)胞核多呈U字形,也有呈S形的,核染色質(zhì)的斑紋比分葉核型的淺,胞漿稍帶藍(lán)紫色.成年健康綿羊的血液中,桿狀核細(xì)胞非常少.(3)嗜酸性白細(xì)胞:嗜酸性顆粒大小一致,卵圓形,呈橙紅色,輪廓明顯.胞漿為淺藍(lán)色.(4)嗜堿性白細(xì)胞:有暗紫色的大小均勻的圓形嗜堿性顆粒,分布在胞漿與胞核上.胞核的顏色比胞漿稍深,但兩者的界限帶不明顯.(5)淋巴細(xì)胞:特點(diǎn)是胞漿內(nèi)有大的嗜天青顆粒.在核與胞漿之間,有明顯的淡染區(qū),好象形成了空隙.(6)單核細(xì)胞:核為變形蟲(chóng)樣,多為三葉,每一葉較寬,核的染色質(zhì)呈星芒狀.胞漿呈灰藍(lán)色.(7)血小板:為深紫色的小顆粒,常聚集在一起,有時(shí)可見(jiàn)到巨型血小板.山羊的血細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn):山羊的白細(xì)胞總數(shù)9.6×109/L.嗜中性白細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的41.8%;嗜酸性白細(xì)胞占0.7%;嗜堿性白細(xì)胞占0.7%;淋巴細(xì)胞占54.5%;單核細(xì)胞占2.3%.(1)紅細(xì)胞:為家畜中紅細(xì)胞最小者,其平均直徑為4.1微米,形狀圓形乃至橢圓形,染色均勻,常單個(gè)存在.(2)嗜中性白細(xì)胞:成熟的嗜中性白細(xì)胞核分葉比綿羊少,母羊的核有鼓錘狀突起.胞漿著色與綿羊的相似.(3)嗜酸性白細(xì)胞:有明顯紫紅色的圓而小的嗜酸性顆粒充滿于胞漿中.核多呈桿狀,也有分成2-3葉的.(4)嗜堿性白細(xì)胞:嗜堿性顆粒的顏色與核的顏色相似(藍(lán)紫色),但顆粒周圍有一稍紅的帶.(5)淋巴細(xì)胞:胞漿呈淺藍(lán)色,但在邊緣為深藍(lán)色,胞漿內(nèi)有大小不一的紅紫色的小顆粒.(6)單核細(xì)胞:胞漿呈淡藍(lán)色,胞漿內(nèi)有空泡,并有細(xì)小的藍(lán)紫色顆粒.胞核呈卵圓形,桿狀或分葉,核染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)呈鈕扣狀(7)血小板:與綿羊血小板相似,為深紫色的小顆粒,常聚集在一起.豬的血細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn):豬的白細(xì)胞總數(shù)14.8×109/L.嗜中性白細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的38.5%;嗜酸性白細(xì)胞占2.5%;嗜堿性白細(xì)胞占0.5%;淋巴細(xì)胞占55.0%;單核細(xì)胞占3.5%.(1)紅細(xì)胞:平均直徑為6.2微米,可形成串錢狀,有時(shí)中央呈現(xiàn)淡染蒼白.(2)嗜中性白細(xì)胞:成熟的核分為數(shù)葉,核絲不明顯,核染色質(zhì)呈鮮明的斑點(diǎn)狀構(gòu)造.桿狀核細(xì)胞的核呈U字形或S形,核膜平滑.在1日齡健康仔豬的血液中常出現(xiàn)晚幼嗜中性白細(xì)胞,胞漿呈淡藍(lán)色乃至藍(lán)色.(3)嗜酸性白細(xì)胞:顆粒呈圓形或卵圓形,染成橙紅色,均勻分布于胞漿中.核為腎形,桿狀或分葉.(4)嗜堿性白細(xì)胞:胞核明顯,呈淡紫色.嗜堿性顆粒為藍(lán)紫色,顆粒比馬的稍大.(5)淋巴細(xì)胞:胞漿與核之間有一透明帶,胞漿的邊緣有小而細(xì)長(zhǎng)的嗜天青顆粒.(6)單核細(xì)胞:核的邊緣不整齊,核染色質(zhì)呈紐扣狀.胞漿為灰藍(lán)色,幾乎看不到胞漿的顆粒.(7)血小板:呈小的卵圓形,有時(shí)也可見(jiàn)到細(xì)長(zhǎng)的巨型血小板.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)血液中的白細(xì)胞一般包括:顆粒細(xì)胞(嗜中性、嗜酸性和堿性細(xì)胞)、淋巴細(xì)胞(大、中、小淋巴細(xì)胞)和單核細(xì)胞。在正常情況下,其構(gòu)成的比例、形態(tài)和質(zhì)量基本是不變的,但在病理情況下,這種比例、形態(tài)、質(zhì)量將會(huì)發(fā)生變化,故臨床上常把計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù)結(jié)合起來(lái),進(jìn)行分析和診斷某些感染性疾病的種類?!驹怼堪准?xì)胞分類計(jì)數(shù)是將血液制成分布均勻的薄膜涂片,用復(fù)合染料染色,根據(jù)各類白細(xì)胞著色特征,在顯微鏡下觀察其數(shù)量、形態(tài)和質(zhì)量的變化、予以分類計(jì)數(shù)并求出各種白細(xì)胞所占的百分率,對(duì)疾病有輔助診斷意義。【器材與試劑】器材:載玻片、染色缸與支架、洗瓶、顯微鏡與鏡油、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器、吸水紙等。試劑:染液、緩沖液1.瑞(Wright)氏染液瑞氏染粉0.lg,甲醇60.0ml。將染粉置于研缽中,加少量甲醇研磨,使其溶解,然后將已溶解的染液倒入潔凈的棕色玻瓶,剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨,如此繼續(xù)操作,直至全部染料溶解并用完甲醇為止。在室溫中保存7日后即可應(yīng)用。新配制的染液偏堿性,放置后可呈酸性。保存時(shí)間愈久,染色力愈佳。2.吉(Giemsa)氏染液吉氏染粉0.5g,純甘油33.0ml,純甲醇33.0m1。先將染粉置于研缽中,加入少量甘油,充分研磨,然后加入其余量的甘油,水浴加溫(60℃)1-2h,經(jīng)常用玻璃棒攪拌,使染色粉溶解,最后加入甲醇混合,裝棕色瓶中保存1周后過(guò)濾即成原液。臨用時(shí)取此原液1ml,加pH6.8的緩沖液或新鮮蒸餾水10ml,即成應(yīng)用液。3.瑞—吉氏復(fù)合染色液瑞氏染粉1.0g,吉氏染粉0.3g,中性甘油10ml,甲醇500ml。先將瑞氏染粉與吉氏染粉置于研缽中,加入少量甘油和甲醇,充分研磨,吸出上層染液置棕色瓶中,在加甲醇繼續(xù)研磨,再吸出上液,如此連續(xù)數(shù)次,直至500ml甲醇用完。配好后每天早、晚各振搖3min,共5天,存放1周后可使用。4.緩沖液(pH6.8)磷酸氫二鈉(Na2HPO4)3.8g,磷酸二氫鉀(KH2PO4)5.47g,用蒸餾水溶解并定容到1000ml?!狙磕ā?.取潔凈載玻片數(shù)張,選擇邊緣光滑的載片作為推片(也可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的蓋玻片做為推片),用左手的拇指與中指夾持載片并置于平穩(wěn)的臺(tái)面上,右手持推片。2.取被檢血(經(jīng)EDTA抗凝)1小滴,放于載玻片的右端,手持推片放于血滴之前并與載片接觸,以30°~40°角向后拉動(dòng)推片,使之與血滴接觸,待血液擴(kuò)散形成一條線狀之后,以均等的速度輕輕向前推動(dòng)推片,則血液就被均勻地涂于載片上而形成一薄血膜。良好的血片,血液應(yīng)分布均勻,厚度要適當(dāng),對(duì)光觀察時(shí)呈霓紅色,血膜應(yīng)位于玻片中央,兩端留有空隙,以便標(biāo)上患畜名稱、畜別、編號(hào)、日期。常溫下自然風(fēng)干(冬天可適當(dāng)加溫)?!狙旧坑袉稳竞蛷?fù)染1.瑞氏染色法是最常用的染色法之一。將干燥的血片用蠟筆于血膜之兩端各劃一道橫線,以防染色液外溢。置血片于水平支架上,滴瑞氏染液于血片上,并計(jì)其滴數(shù),直至將血膜浸蓋為止,待染1~2min后,滴加等量緩沖液或新鮮蒸餾水,輕輕吹動(dòng)使之混勻,再染4~10min,用蒸餾水或常水沖洗,吸干,油鏡觀察。此染液對(duì)胞漿與顆粒的染色效果較好。2.姬姆薩氏染色法血涂片用甲醇固定1~2min。待甲醇揮發(fā)后再將血片直立于裝有姬姆薩氏應(yīng)用液的染色缸中,染色30~60min,取出用蒸餾水或常水沖洗,干燥后鏡檢。此染液對(duì)細(xì)胞核與血液原蟲(chóng)的染色效果較好。3.瑞氏與姬姆薩氏復(fù)合染色法將血片置于染色架上,滴加復(fù)合染液3~5滴,使其迅速布滿血膜,約1min后,滴加緩沖液5~10滴,輕輕搖動(dòng)玻片使之充分混合,5~10min后用流水沖去染液,待干鏡檢。【分類計(jì)數(shù)】1.先用低倍鏡檢視血片上白細(xì)胞的分布情況,一般是粒細(xì)胞、單核細(xì)胞與體積較大的細(xì)胞分布在血片的上、下緣與尾端,淋巴細(xì)胞多在血片的起始端。滴加顯微鏡油,轉(zhuǎn)過(guò)油鏡頭進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。2.計(jì)數(shù)時(shí),為避免重復(fù)和遺漏,可用四區(qū)、三區(qū)或中央曲折計(jì)數(shù)法推移血片,記錄每一區(qū)的各種白細(xì)胞數(shù)。每張血片最少計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞,連續(xù)觀察2~3張血片,求出各種白細(xì)胞的百分比。3.記錄時(shí),可用“白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器”,也可事先設(shè)計(jì)一表格,用畫(huà)“正”字的方法記錄,以便于統(tǒng)計(jì)百分?jǐn)?shù)。【正常參考值】見(jiàn)表1-1表1-1各種動(dòng)物白細(xì)胞分類正常平均值(%)動(dòng)物種類嗜堿性白細(xì)胞嗜酸性白細(xì)胞嗜中性白細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞晚幼細(xì)胞桿狀核分葉核牛0.54.00.53.033.057.02.0馬0.54.50.54.054.034.02.5羊0.54.51.03.033.055.53.5豬0.52.51.05.532.055.03.5駱駝0.58.01.06.547.035.02.0【臨床意義】白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)可發(fā)現(xiàn)各種白細(xì)胞的量或質(zhì)的變化,結(jié)合白細(xì)胞總數(shù),可進(jìn)一步揭示機(jī)體防御機(jī)能的狀況,對(duì)疾病的診斷、病程、預(yù)后判斷與治療等有著重要的指導(dǎo)意義。由于外周血液中白細(xì)胞的組成主要為中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,尤其是中性粒細(xì)胞數(shù)最多,約占白細(xì)胞總數(shù)的50%~70%(除牛、豬外),所以,在多數(shù)情況下,白細(xì)胞數(shù)的變化主要受中性粒細(xì)胞的影響,其增多或減少的臨

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