2024年革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)報(bào)告

革蘭氏染色法的原理及其練習(xí)摘要：革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌重要的鑒別特性，因此學(xué)習(xí)微生物學(xué)，進(jìn)行革蘭氏染色試驗(yàn)是很重要的。為保證染色成果的對(duì)的性，采用規(guī)范的的染色操作措施是拾分必要。本試驗(yàn)重要對(duì)大腸桿菌（Escherichiacoli）、金黃色葡萄球菌（StaphyloccocusaureusRosenbach）、枯草桿菌（Bacillussubtilis）進(jìn)行革蘭氏染色，觀測(cè)它們的染色特性，辨別是革蘭氏陰性還是陽(yáng)性，從而掌握其染色措施。染色措施與過(guò)程很清晰，但試驗(yàn)成果中金黃色葡萄球菌(S.aureusRosenbach）多組展現(xiàn)假陰性。本試驗(yàn)的重要目的是熟悉并掌握革蘭氏染色措施及原理，但要想做出很好的染色得多加練習(xí)。本試驗(yàn)還可以鍛煉顯微鏡操作技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù)。關(guān)鍵詞：革蘭氏染色大腸桿菌(E.coli)金黃色葡萄球菌(S.aureusRosenbach)枯草桿菌(B.subtilis)引言革蘭氏染色是微生物學(xué)中最重要的鑒別染色措施，它可以直接將細(xì)菌分為革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性。革蘭氏染色法可將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性（G+）和革蘭氏陰性（G-）兩種類(lèi)型，這是由這兩種細(xì)菌細(xì)胞壁構(gòu)造構(gòu)成與構(gòu)造的差異所決定的。通過(guò)一定的染色過(guò)程後，革蘭氏陽(yáng)性的細(xì)菌會(huì)由于細(xì)胞壁肽聚糖的含量高，脂質(zhì)含量低而保持第一次染色的藍(lán)紫色。革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的脂質(zhì)含量高，乙醇處理時(shí)脂質(zhì)溶解，藍(lán)色被洗脫，復(fù)染後變?yōu)榧t色。革蘭氏染色原理很簡(jiǎn)樸，染色時(shí)需注意要注意使用處在活躍生長(zhǎng)期的細(xì)菌，涂片不適宜過(guò)厚，嚴(yán)格控制脫色時(shí)間。大腸桿菌(E.coli)是革蘭氏陰性細(xì)菌，金黃色葡萄球菌(S.aureusRosenbach)與枯草桿菌(B.subtilis)都是革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，染色後在顯微鏡下輕易區(qū)別。同步它們的形態(tài)各異，可以根據(jù)詳細(xì)顏色和形態(tài)差異來(lái)判斷染色與否成功。本試驗(yàn)還波及到高倍油鏡的使用。使用油鏡與用一般的鏡頭不一樣，詳細(xì)使用在試驗(yàn)措施中描述。1.1材料1.1.1菌種大腸桿菌16小時(shí)牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌16小時(shí)牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物，枯草桿菌16小時(shí)牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物。1.1.2溶液與試劑無(wú)菌生理鹽水，草酸銨結(jié)晶紫染液，盧戈氏碘液，95%乙醇，番紅復(fù)染夜，香柏油，二甲苯1.1.3儀器酒精燈，載玻片，顯微鏡，雙層瓶，接種環(huán)，滴管等1.2措施1.2.1制片：取活躍生長(zhǎng)期菌種按常規(guī)措施涂片（不要太厚）、干燥和固定。1.2.2染色（1）初染：滴加草酸結(jié)晶紫染液覆蓋涂菌部位，染色2min，水洗至流出水無(wú)色。（2）媒染：用盧戈氏染液沖去殘留水跡，再用碘液覆蓋1min，傾去碘液，水洗至流出水無(wú)色。（3）脫色：將玻片上的水用吸水紙吸取，用滴管流加95%乙醇脫色（持續(xù)20秒），稍後立即洗去乙醇。（4）復(fù)染：將玻片上的水用吸水紙吸去，用番紅復(fù)染液染色2min，水洗，吸去殘水烤干。1.2.3鏡檢分別用香柏油覆蓋涂菌部位，先用低倍鏡找到菌，換用100倍2．試驗(yàn)成果與分析2.2成果分析大腸桿菌竟革蘭氏染色後展現(xiàn)紅色，3個(gè)圖片上都是紅色，因此大腸桿菌應(yīng)當(dāng)是革蘭氏陰性細(xì)菌，與事實(shí)相符，染色成功。金黃色葡萄球菌比較難染色，從成果中可以分析，前兩個(gè)涂片的菌種也許培養(yǎng)的時(shí)間太長(zhǎng)了。由于老齡的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌會(huì)被染成紅色而導(dǎo)致假陰性，老齡的G+細(xì)菌細(xì)胞壁老化，不能在乙醇處理的時(shí)候使肽聚糖網(wǎng)孔收縮而使碘-結(jié)晶紫復(fù)合物滯留在細(xì)胞壁，從而在復(fù)染時(shí)被染紅?？莶輻U菌染色成果很好，藍(lán)紫色很明顯，染色成功。1.3.3小結(jié)1、獲得本試驗(yàn)成功的關(guān)鍵：固定期烘烤要適度，太輕會(huì)在沖洗時(shí)沖走細(xì)菌，過(guò)度會(huì)破壞細(xì)菌形態(tài)；脫色的時(shí)間要嚴(yán)格控制，脫色不夠?qū)е录訇?yáng)性，脫色過(guò)度會(huì)出現(xiàn)假陰性；選用新培養(yǎng)的菌種，涂片時(shí)不能太厚。這些問(wèn)題在試驗(yàn)過(guò)程中幾乎均有出現(xiàn)，尤其是對(duì)于初學(xué)者，尤其需要注意。2、革蘭氏染色